超高效液相色譜串聯質譜法測定不同廠家生產的多潘立酮片中多潘立酮的含量

耿晶 呂玲燕 馮星月

[摘要] 目的 建立超高效液相色譜串聯質譜法（UPLC-MS/MS）測定多潘立酮片中多潘立酮含量的方法，比較不同廠家生產的多潘立酮片中多潘立酮的含量。 方法 采用BEH C18色譜柱（ 2.1 mm × 50 mm，1.7 μm），流動相為甲醇：2 mmol/L乙酸銨水溶液（85∶15，V/V），進樣量2 μL，柱溫30℃，流速0.2 mL/min。采用多重反應監測模型（MRM）方式進行正離子模式檢測。 結果 多潘立酮在3.0 min內分離良好，在10.6～5300 ng/mL濃度范圍內與峰面積呈良好的線性關系，線性回歸方程為Y = 85.362 X + 30 067，r = 0.9959;其檢測限為1.06 ng/mL，定量限為10.6 ng/mL，加樣回收率為99.2%，相對標準偏差（RSD）為1.7%。不同廠家生產的多潘立酮片中多潘立酮的含量分別為10.016、10.147、10.092、10.123、10.109、10.075 mg，均符合2015年版《中華人民共和國藥典》（二部）的要求。 結論 該方法簡便、快速，重復性好，靈敏度高，適用于多潘立酮片的快速定量分析。

[關鍵詞] 超高效液相色譜串聯質譜法;不同廠家;多潘立酮;含量測定

[中圖分類號] O657.63;TS207.5? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-7210（2019）03（a）-0033-04

[Abstract] Objective To establish a method for the determination of domperidone in Domperidone Tablets by ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry （UPLC-MS/MS）， and to compare the contents of domperidone in Domperidone Tablets produced by different manufacturers. Methods BEH C18 column （2.1 mm × 50 mm， 1.7 μm） was used. The mobile phase was methanol∶2 mmol/L ammonium acetate aqueous solution （85∶15， V/V）. The injection volume was 2 mL， the column temperature was 30℃， and the flow rate was 0.2 mL/min. Multiple Reaction Monitoring Model （MRM） was used for positive ion pattern detection. Results Domperidone was well separated within 3 min and showed a good linear relationship with peak area in the concentration range of 10.6-5300 ng/mL. The linear regression equation was Y = 85.362 X+30 067. The limit of detection was 1.06 ng/mL， and the limit of quantitation was 10.6 ng/mL. The average recoveries was 99.2% with the relative standard deviation （RSD） being 1.7%. The contents of domperidone in Domperidone Tablets produced by different manufacturers were 10.016， 10.147， 10.092， 10.123， 10.109 and 10.075 mg respectively， which met the requirements of the 2015 edition of the Pharmacopoeia of the People′s Republic of China （Part Ⅱ）. Conclusion The method is simple， rapid， reproducible and sensitive. It is suitable for rapid quantitative analysis of domperidone.

[Key words] Ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry; Different manufacturers; Domperidone; Content determination

多潘立酮片是一種合成的苯丙咪唑類衍生物，為外周多巴胺受體阻滯劑，作用較強，主要作用于胃壁上的多巴胺受體而發揮胃動力效應，可增加食道下部括約肌張力，防止胃-食管反流，增強胃蠕動，促進胃排空，協調胃與十二指腸運動，抑制惡心、嘔吐，并能有效地防止膽汁反流，不影響胃液分泌[1-4]?，F大多采用高效液相色譜法測定多潘立酮片的含量[5-9]，而采用液相色譜串聯質譜法（LC-MS/MS）測定其血藥濃度的較多[10-12]。目前，國內共有多個廠家擁有多潘立酮片的生產批文，但其質量可能不完全一致。為保證臨床用藥、安全有效，本研究采用超高效液相色譜串聯質譜法（UPLC-MS/MS）測定不同廠家生產的多潘立酮片中多潘立酮的含量。此法簡便易行，準確度高，精密度靈敏度好，有利于更好地控制產品質量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

ACQUITY型UPLC系統（包括Xevo TQ檢測器、MassLynxTM 質譜工作站軟件、自動進樣器、在線脫氣機和四元泵溶劑系統，美國Waters公司）、SCQ-250超聲波清洗器（上海盛普機械制造有限公司）、MS105電子天平（上海梅特勒-托利多有限公司）、Drict-Q5超純水機（法國Millipore公司）。

1.2試藥

多潘立酮對照品（純度：99.7%，批號：100304-201103），購自于中國食品藥品檢定研究院。多潘立酮片購自市售藥品市場上6個生產廠家，分別為Y1藥業（山西好醫生藥業集團有限公司，批號：201703005），Y2藥業（江蘇豪森藥業，批號：20161215），Y3藥業（修正藥業，批號：160635），Y4藥業（湖南千金湘江藥業，批號：1704154），Y5藥業（上海信誼藥廠有限公司，批號：150902），Y6藥業（江西捷眾制藥有限公司，批號：84170101）。上述藥品規格均為10 mg。甲醇（色譜純，德國Merck公司），水為超純水，乙酸銨為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

ACQUITYTM UPLC BEH C18色譜柱（2.1 mm × 50 mm，1.7 μm），甲醇-2 mmol/L乙酸銨水溶液（85∶15，V/V）為流動相，進樣量2 μL，柱溫30℃，流速0.2 mL/min。

2.2 質譜條件

離子源為電噴霧電離源（ESI）;檢測方式為正離子模式;檢測電壓：3.5 kV;離子源溫度：120℃;脫溶劑溫度：350℃;脫溶劑氣體流速：500 L/h。采用多反應監測（MRM）方式，多潘立酮：m/z 426.32→175.21，錐孔電壓60 V，碰撞能量30 V。在上述條件下所測多潘立酮的MRM色譜見圖1～2。

2.3 溶液的制備

2.3.1 對照品溶液制備? 精密稱取多潘立酮對照品適量，加適量的甲醇溶解后定容，制成濃度為1.06 mg/mL的對照品儲備液。臨用前吸取上述儲備液適量，并用甲醇稀釋，配制成相應濃度的對照品溶液，用于后續線性關系的考察等。上述所有對照品溶液均在4℃的條件下貯藏。

2.3.2 供試品溶液制備? 分別取6個不同廠家多潘立酮片各20片，精密稱定，用研缽研細，精密稱取適量相當于多潘立酮（10 mg）的重量。加適量甲醇溶解于50 mL容量瓶中，超聲處理20 min，使其充分溶解，放冷，以甲醇定容，搖勻，用0.22 μm微孔濾膜過濾，取續濾液100 μL，定溶至10 mL，即得供試品溶液。

2.4 方法學考察

2.4.1 線性范圍考察? 取“2.3.1”項下對照品儲備液適量，稀釋成一系列不同濃度的對照品溶液，即分別為10.6、106、265、530、2120、5300 ng/mL;按“2.1”項下色譜及“2.2”項下質譜方法分別進樣2 μL，記錄其峰面積。以對照品濃度為橫坐標X，峰面積為縱坐標Y，繪制標準曲線，得線性回歸方程Y = 85.362 X + 30 067（r = 0.9959）。結果表明多潘立酮濃度在10.6～5300 ng/mL與峰面積線性關系良好。

2.4.2 檢測限、定量限考察? 取上述“2.4.1”項下稀釋所得對照品溶液，按“2.1”“2.2”項下的色譜、質譜條件，分別進樣測定，以信噪比S/N=3、10時對照品濃度分別作為檢測限（LOD）、定量限（LOQ），其LOD值為1.06 ng/mL，LOQ值為10.6 ng/mL。結果表明對照品線性范圍良好，儀器檢測靈敏度較高，適合多潘立酮片的定量分析。

2.4.3 精密度考察? 取“2.3.1”項下的對照品溶液（530 ng/mL），按“2.1”“2.2”項下的色譜、質譜條件連續進樣6次，以多潘立酮的峰面積計算其RSD（n = 6）為1.8%，結果表明儀器的精密度較好，符合測定要求。

2.4.4 重復性試驗? 按照“2.3.2”項下方法，取Y2廠家多潘立酮片（批號：20161215）平行制備6份供試品溶液。按“2.1”“2.2”項下的色譜、質譜條件，分別進樣2 μL進行多潘立酮含量測定，計算多潘立酮峰面積的RSD值，其RSD值為1.5%，表明該測定方法的重復性良好。

2.4.5穩定性試驗? 取Y2廠家多潘立酮片（批號：2016 1215），按“2.3.2”項下方法制備供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、24 h時按“2.1”“2.2”項下的色譜、質譜條件測定多潘立酮的含量，多潘立酮的峰面積RSD值為3.6%（n = 6），結果表明供試品溶液在室溫條件下24 h內基本穩定。

2.4.6 加樣回收率試驗? 精密稱取已知含量的多潘立酮片6份，每份約1 mg，分別精密加入濃度為0.0212 mg/mL的多潘立酮對照品溶液50 mL，超聲提取制備供試品溶液，按“2.1”“2.2”項下的色譜、質譜條件測定，計算多潘立酮片的含量。公式：加樣回收率%=（C-A）/B×100%（C為加入標準物質的樣品測得量，A為樣品中該物質的測得量，B為加入的標準物質的量）計算加樣回收率，考察該方法的準確度和可靠性。多潘立酮的平均回收率為99.2%，RSD為1.73%（n = 6），結果表明該方法的加樣回收率符合規定，測定結果準確可靠。見表1。

表1? ?多潘立酮加樣回收率試驗（n = 6）

2.5 樣品測定

分別取各個廠家的多潘立酮片，精密稱定，按“2.3.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”“2.2”項下的色譜、質譜條件平行測定6次，利用已建立的標準曲線，計算不同廠家多潘立酮片中多潘立酮的含量及其平均含量、RSD值，結果見表2。

表2? ?不同廠家多潘立酮片中多潘立酮的含量（n = 6）

3 討論

3.1 色譜、質譜分析條件的優化

本研究比較了不同的色譜柱，并選擇了兩種不同型號，結果顯示，與ACQUITYTM UPLC BEH C18（2.1 mm × 50 mm，1.7 μm）色譜柱比較，ACQUITYTM UPLC BEH C8（2.1 mm × 50 mm，1.7 μm）色譜柱的保留及分離效能更好[13]。本研究還考察了不同的流動相體系及比例，如甲醇-2 mmol/L乙酸銨水溶液（含0.1%的乙酸）、甲醇-5 mmol/L乙酸銨水溶液、乙腈-2 mmol/L乙酸銨水溶液;流動相中有機相與水相的比例（體積比）主要考慮了85∶15、70∶30、60∶40。通過比較不同流動相及其比例，發現選擇甲醇作為有機相時峰形較好;考慮色譜柱清洗等因素，發現流動相可不加乙酸;不同的流動相比例驗證，發現流動相中有機相與水相的比例為（85∶15，V/V）時，其保留時間較為合適，且峰形也較好。故本研究最終選擇甲醇-2 mmol/L乙酸銨水溶液（85∶15，V/V）作為流動相[14]。參考相關文獻[15-17]，選擇ESI+模式下測定多潘立酮，在此模式下所測定的成分響應值較好，后采用IntelliStart功能自動掃描確定相應質譜參數，所得參數能較好的應用于本研究的含量測定。

3.2 提取時間的選擇

參考相關文獻[18]，分別對樣品超聲處理20、30、40 min，樣品中多潘立酮的含量基本一致，故選擇超聲處理20 min。

3.3 含量測定

本研究采用UPLC-MS/MS法對6個廠家的多潘立酮片中多潘立酮含量進行測定，測得各廠家的每片含量分別為10.016、10.147、10.092、10.123、10.109、10.075 mg，分別為標示量的100.16%、101.47%、100.92%、101.23%、101.09%、100.75%。所有廠家生產的多潘立酮片均符合2015年版《中華人民共和國藥典》（二部）的要求，其要求含多潘立酮應為標示量的90.0%～110.0%。

3.4 小結

UPLC-MS/MS的使用越來越廣泛，因其優良的性能及操作性，其也較多應用于藥物的含量測定，這有利于藥企把控藥品的品質。本研究選擇6個不同廠家的多潘立酮片中的多潘立酮作為檢測指標建立其分析方法，樣品處理簡單易行，且該檢測方法重復性好，靈敏度高，分析時間短（3 min），可考慮用作多潘立酮片的質量控制方法。本研究上述六個廠家的多潘立酮片中多潘立酮的含量均符合要求，但并不能說明它們內在品質一致，其臨床藥物濃度以及生物利用度等還有待考證。為有效控制產品質量、保證消費者的用藥安全與有效，統一質量標準和工藝勢在必行[19-23]。

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（收稿日期：2018-05-22? 本文編輯：王? ?蕾）