維生素B6片溶出度方法學研究

王書蘭

【摘 要】目的：建立維生素B6片溶出度檢測方法。方法：采用槳法，以900ml水為溶出介質，轉速為50rpm，選取時間為30min，采用高效液相色譜法測定維生素B6片的溶出量，檢測波長為291nm。結果：維生素 B6濃度在4.24μg/ml～12.71μg/ml范圍內線性關系良好，r=0.999，平均回收率為100.9%，RSD為0.66%，溶出限度為標示量的 85%。結論：該方法簡便、靈敏、準確，可用于維生素B6片的溶出度測定。

【關鍵詞】維生素B6片;溶出度;高效液相色譜法

中圖分類號： R927.2 文獻標識碼： A文章編號： 2095-2457（2019）07-0202-004

DOI：10.19694/j.cnki.issn2095-2457.2019.07.084

【Abstract】Objective：To establish a test method for determining the vitamin B6 tablets dissolution.Methods：Paddle method was used with 900m L of distilled water as the dissolution medium at the rotation speed of 50 rpm and samples were taken after 15min.vitamin B6 tablets dissolution quantity determined by HPLC with the detection wavelength of 291nm.Results Vitamin B6 concentration had a good linear relationship with the absorbance in 4.24μg/ml～12.71μg/ml，r=0.999，the average recovery was 100.9%（RSD1.0%）.The dissolution limit of the labeled amount is 85%.Conclusion：The method is simple，sensitive and accurate that can be used for the dissolution determination of vitamin B6 tablets.

【Key words】Vitamin B6 tablets;Dissolution;HPLC

維生素B6為水溶性維生素，與體內輔酶代謝密切相關，除維持正常生理作用外，還可治療貧血、白細胞減少、口腔潰瘍、帕金森綜合征等多種疾病。用于預防和治療維生素B6缺乏癥，如脂溢性皮炎、唇干裂等，也可用于減輕妊娠嘔吐。此外，維生素B6還是搶救異煙肼中毒的重要藥品。2015版《中國藥典》二部維生素B6片項下未有溶出度檢查項[1]，亦未見有關本品溶出度方法的文獻報道。溶出度是評價口服固體制劑質量的重要指標，本文采用HPLC法對維生素B6片溶出度方法進行考察，以控制其質量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Ultimate 3000型高效液相色譜儀（戴安公司），LC-20A型高效液相色譜儀（島津公司），Thermo C18，4.6×150mm，5μm色譜柱（Thermo），Wonda Cract ODS-2，4.6×150mm，5μm色譜柱（島津公司），FADT-801QY型溶出儀（上海富科思分析儀器有限公司）。

1.2 試藥

1-戊烷磺酸鈉（H1526018，阿拉丁），甲醇（862116，RiMedco），冰乙酸（20160908，天津市永大化學試劑有限公司），維生素B6對照品（100116-201404，中國食品藥品檢定研究院），維生素B6片（批號：Y180601、Y180602、Y180603，西南藥業股份有限公司）

2 方法與結果

2.1 溶出方法建立

2.1.1 溶出介質的配制：介質1為純化水（經脫氣處理）;介質2為鹽酸溶液（pH1.2）即7.65ml 鹽酸，以純化水稀釋至1000ml，即得;介質3為醋酸鹽緩沖液（pH4.0），即取醋酸鈉（三水合物）1.22g加水溶解，加入2mol/L醋酸溶液20.5ml，加水稀釋至1000ml，即得;介質4為磷酸鹽緩沖液（pH6.8）），即取0.2mol/L磷酸二氫鉀溶液 250ml，加0.2mol/L氫氧化鈉溶液118ml，用純化水稀釋至1000mL，即得。

2.1.2 對照品溶液配制：取維生素B6對照品21.22mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml置100ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.1.3 溶出曲線的測定：取本品1片，照溶出度測定法（《中國藥典》2015年版四部通則0931第二法），取上述溶出介質900ml，轉速為每分鐘50轉，在5、10、15、30min時取樣，按《中國藥典》2015版第二部維生素B6含量測定方法測定[1]，繪制溶出曲線。

2.2 溶出方法學驗證

2.2.1 輔料干擾試驗：（1）空白輔料：按一片處方量精密稱取輔料，置100ml的量瓶中，加水超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液5ml，置100ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得。（2）供試品溶液：取維生素B6片，按2.1.3溶出度法經30分鐘時，取溶液8ml，濾過，取續濾液作為供試品溶液。精密量取空白輔料溶液、維生素B6對照品溶液、供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖（見圖1），由圖可知空白輔料對維生素B6無干擾。

2.2.2 濾膜吸附試驗：取維生素B6片，按2.1.3溶出度法經30分鐘時取樣，分別于離心機（4000轉，10min）離心和0.45μm濾膜過濾;用0.45μm濾膜濾過，分別棄去初濾液1、2、3、4、5ml;取續濾液，作為供試品溶液。精密量取上述溶液10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖峰面積。結果顯示供試品溶液采用離心以及0.45μm濾膜過濾處理后，主峰面積無明顯變化，RSD為0.37%，小于2.0%，說明濾膜不干擾溶出含量測定。

2.2.3 穩定性試驗：取維生素 B6片，按2.1.3溶出度法經30分鐘時，取溶液8ml，用0.45μm的濾膜濾過，室溫放置0，5，10，14，18，23，28，36小時，精密量取各10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖峰面積，計算峰面積的RSD%。實驗結果顯示，室溫條件下36小時內，供試品峰面積RSD為0.70%，說明本品室溫36小時內穩定。

2.2.4 線性與范圍：精密稱取維生素B6對照品21.22mg，置100ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻;精密量取上述溶液2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。精密量取上述溶液各10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。由數據可知線性方程為y=24908648.400x-1992617.400，r=0.999，證明維生素B6在4.24μg/ml～12.71μg/ml的范圍內濃度和峰面積之間線性關系良好。

2.2.5 回收率試驗：精密稱稱取維生素B6對照品10、16、20mg，按濃度50%、80%、100%各平行稱取3份，分別置100mL量瓶中，再分別加入混合輔料（相當于1 片制劑的量），用水溶解并稀釋至刻度，搖勻。經0.45μm濾膜過濾，取濾液10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖（結果見表1）。

由以上數據表明，本方法供試品的低（50%）、中（80%）、高（100%）濃度水平的回收率為99.51%～101.67%之間，均在98.0%～102.0%范圍內，平均回收率為100.9%，RSD為0.66%，說明本方法準確度良好。

2.2.6 重復性試驗：取維生素B6片6片，按2.1.3溶出，按《中國藥典》2015版第二部維生素B6含量測定方法測定5、10、15、30min時溶出量，實驗結果顯示所有樣品5min取樣點的溶出度量含量RSD均小于20.0%，其它不同取樣時間點溶出度含量RSD均小于10.0%，說明此方法重復性良好。

2.2.7 耐用性試驗：改變溶出的溫度（37℃±2℃）及轉速（50±5轉），其平均溶出度的RSD均在2%以內，說明其改變溶出的溫度對溶出的影響較小。改變檢測器波長（±2nm）、流速（±0.2l/min）m、柱溫（±5℃）、流動相pH（±0.1）、流動相比例（±2），采用不同色譜柱、高效液相色譜儀和溶出儀時，平均溶出度為98.7%，RSD為0.77%，小于2.0%，對溶出度測定無影響，說明該測定方法的耐用性較好，滿足溶出測定要求。

2.3 樣品溶出度的測定和限量標準的設定

應用建立的方法對批號為Y180601、Y180602、Y180603的樣品進行溶出度測定，結果如表2所示，3批樣品的平均溶出度均在90%以上，將取樣點溶出量減掉15%作為溶出限度[2，3]，故溶出限度設定為標示量的85%。

3 討論

本文同時利用高效液相色譜法和紫外分光光度法測定維生素B6的含量，發現紫外分光光度法較高效液相色譜法所測含量較低，說明用紫外分光光度法測定該品的測定有干擾，故選擇高效液相色譜法測定溶出度。用紫外掃描維生素B6水溶液在291nm處有最大吸收，故擬定檢測波長為291nm，與2015版《中國藥典》二部維生素B6含量測定所用檢測波長一致。

考察了四種溶出介質對溶出曲線的影響，結果（圖1）顯示維生素B6片在4種溶出介質中均穩定，其溶出曲線很相似，說明溶出介質的pH值和離子強度對其溶出行為無顯著影響，由于水作為溶出介質操作相對方便，所以選擇水作為溶出介質。用本法測定維生素B6片的溶出度具有穩定性好，回收率高，精密度佳等特點，為維生素B6片溶出度測定質量標準的建立提供了科學數據和方法基礎。

【參考文獻】

[1]國家藥典委員會.《中國藥典》二部[S].2015.

[2]謝沐風.如何科學、客觀地制訂溶出度試驗質量標準[J]. 中國醫藥工業雜志，2012，43（3）：A23.

[3]張啟明，謝沐風，寧保明，等.采用多條溶出曲線評價口服固體制劑的內在質量[J].中國醫藥工業雜志，2009，40（12）：946.