Y染色體Amelogenin、DYS456、DYS570及DYS576缺失2例

黃仁武，胡利平,2，張茵，楊璐瑜，張秀峰,2，聶勝潔,2，劉林林,2＊

（1.昆明醫科大學司法鑒定中心，云南昆明 650500；2.昆明醫科大學法醫學院，云南昆明 650500；3.廣東西湖司法鑒定所，廣東深圳 518000）

在法醫學實際檢案中, Amelogenin基因是對生物樣本的性別鑒定的主要依據，該基因座中Amelogenin-X比Amelogenin-Y小6bp，但個體的Amelogenin基因發生突變時,致Amelogenin-X或Amelogenin-Y特異片段擴增失敗,則可能導致錯誤的性別判定，從而干擾性別鑒定造成誤判。現將作者工作中所見兩例男性個體染色體Amelogenin、DYS456、DYS570及DYS576缺失及分析報道如下。

1 案例資料

1.1 樣本

案例1：父親王某小、兩個兒子王某勇和王某偉、母親楊某的血樣各一份；案例2：父親黃某萬、女兒黃某仙、母親馬某瓊的血樣各一份。

1.2 檢測過程

采用Chelex-100法（Bio-Rad，美國）從采集的血樣中提取DNA。并采用PowerPlex-21（Promega，美國）試劑盒對提取的DNA模板進行PCR復合擴增，并使用3130XL（ABI，美國）遺傳檢測分析儀對擴增產物進行檢測分析。

依據我中心昆明醫科大學司法鑒定中心現有技術和條件，對DNA檢測結果的分析表明：在不考慮同卵多胞胎和近親的前提下，支持所檢血樣的所屬個體王某小和楊某是所檢血樣的所屬個體王某勇和王某偉的生物學父母親（累積親權指數如下，CPI：1.4761×1010，親權相對機會 RCP：99.9999%；CPI：8.9787×1011，親權相對機會 RCP：99.9999%）；支持所檢血樣的所屬個體黃某萬和馬某瓊是所檢血樣的所屬個體黃某仙的生物學父母親（累積親權指數，CPI：2.7720×1011，親權相對機會RCP：99.9999%）。但是Amelogenin基因座上（圖1），王某小父子三人均只顯示X等位基因，Y等位基因缺失；父親黃某萬只顯示X等位基因，Y等位基因缺失。同時采用了GoldeneyeTM20A（基點認知，中國）試劑盒進行了驗證，結果一致。

圖1 王某小父子三人（A）和黃某萬（B）的Amelogenin基因座檢測結果

為驗證受檢者性別，采用Goldeneye?26Y（基點認知，中國）試劑盒對王某小父子三人和黃某萬進行Y-STR的檢驗，結果證實父子三人和黃某萬均為男性，分型結果如圖2，均顯示DYS456、DYS570及DYS576的缺失。同時采用了PowerPlex Y23 System（Promega，美國）試劑盒進行了驗證，結果一致。

圖2 王某小父子（ABC）三人和黃某萬（D）的DYS456、DYS570及DYS576基因座檢測結果

2 討論

性別鑒定是法醫物證學的一項重要檢驗，目前常用的性別鑒定方法是針對編碼牙釉質蛋白的基因Amelogenin X染色體內含子1區中的6bp缺失特性設計引物，擴增X和Y染色體的特異性片段分別為106bp和112bp[1-2]。該方法靈敏度高，被廣泛應用于法醫親子鑒定、個體識別等。

在實際檢案中，如果送檢樣本Amelogenin基因性別檢測只檢出X片段，則認為是女性分型，本檢案中父子三人Amelogenin基因座分型結果與實際樣本來自男性表現不符。性染色體檢驗異常可分為兩種原因：（1）該個體是46，XX性反轉男性，這種個體因缺乏Y染色體，故Amelogenin基因只能檢測X片段。46，XX性反轉男性的表型為男性，但是染色體核型為女性，無生育能力，是一種少見的染色體畸形，發病率約為1/20000[3]。（2）該個體是46，XY男性，可能由于Y染色體上的引物結合區域發生突變，引物擴增效率受到嚴重影響、模板DNA降解及某些PCR抑制劑導致擴增失敗或大片段的基因組DNA缺失[4]。

兩個案例中父王某小和父黃某萬的第二性征表現明顯，分別育有兩子和一女，且Y-STR檢測結果發現僅有DYS456、DYS570及DYS576三個基因座的等位基因缺失，據此分析王某小和黃某萬具有Y染色體，為46，XY男性。兩個案例中檢材良好，電泳熒光峰高（RFU值）大于500且重復擴增結果一致，因此在實驗結果中等位基因的缺失可以排除模板質量和某些PCR抑制劑導致擴增失敗的原因。本實驗室通過不同引物設計的試劑盒分別檢驗，均出現相同結果，排除引物結合區域發生突變而導致無法擴增的可能性。因此，推測王某小父子三人和黃某萬Amel Y無擴增產物和DYS456、DYS570及DYS576三個基因座的等位基因缺失因Y染色體的部分缺失導致，且考慮本檢案中的家系在Yp11.2發生了大片段的丟失。

Amelogenin基因性別檢測簡便、靈敏、快捷，在法醫學實踐中具有較高的應用價值，是DNA性別鑒定的主要依據[2]，但是人的Amelogenin基因突變或缺失的個體，常規的檢測手段可能會造成誤判，更甚者會誤導偵查方向。近年來Amelogenin基因缺失的案例在國內外已有大量報道[3-12]。

Y-STR位于Y染色體非重組區，為男性個體所特有的遺傳標記，與X染色體不發生重組，符合單倍體連鎖遺傳。父子三人的Y-STR檢測結果相同，且都發現DYS456、DYS570及DYS576基因座的等位基因缺失，反映出該家族的重要父系特征。類似的父系特征在犯罪嫌疑人的家系排查中具有重大的應用意義，可以極大限度的縮小偵查范圍，為偵查提供有效線索節約辦案經費和時間，在日常的檢案中應注意收集。

綜上所述 ，在實際檢案中若發現Amelogenin對性別的判定結果與其他證據或線索不符，應考慮Y等位基因丟失的可能性，基因分型缺失應受到足夠重視，為提高法醫應用的信息量，隨著Y-STR技術的廣泛應用，在實際檢案中可通過檢測Y-STR并結合Y-SNP等其他遺傳標記進行綜合分析對AMEL Y缺失的個體進行性別判定，以免引起錯誤判斷。