高效液相色譜法測定40%硫磺·三環唑懸浮劑中硫磺的含量

洪陳艷，王學林，李學院，安燕萍

（昆明農藥有限公司，云南 昆明 650401）

水稻稻瘟病可采用的藥劑較多，有稻瘟靈、稻瘟凈、三環唑等，單一使用某一種農藥容易誘導稻瘟病菌產生抗藥性以致藥劑用量越來越大，藥效卻越來越差[1]。40%硫磺·三環唑懸浮劑是一種具有保護和內吸治療作用的復配殺菌劑，該藥具有流動性較好、懸浮率較高、黏著力較強、較耐雨水沖刷、易被作物吸收等特點，是防治水稻稻瘟病的理想藥劑。

40%硫磺·三環唑懸浮劑中的有效成份硫磺（英文通用名:sulfur）為無機物，其測定方法通常采用化學法。化學法操作復雜、對人員的操作熟練程度要求高、測定結果重現性不好、測定準確度差。本文通過實驗研究建立了一種高效液相色譜分析方法，更能準確、方便、快捷地測定40%硫磺·三環唑懸浮劑中的硫磺的質量分數。

1 實驗方法

1.1 溶液和試劑

硫磺標樣（質量分數98.0%）；甲醇（色譜純、流動相用）；甲醇（分析純）；N,N二甲基甲酰胺（分析純）；水（新蒸二次蒸餾水）。

1.2 操作儀器

液相色譜儀:液相色譜儀（具有可調節波長紫外檢測器和定量進樣閥）；色譜數據工作站:N2000色譜工作站；色譜柱:200mm×4.6mm（i.d）不銹鋼柱，內裝DOS（C18）5μm填充物；微量進樣注射器:50μL；定量進樣器5 μL；超聲波清洗器。

1.3 高效液相色譜操作條件

柱溫:相當于室溫；流動相:甲醇,經濾膜過濾并用超聲波脫氣。流速:1.25mL/min；波長:265nm；進樣體積:5μL；保留時間:4.690min。

1.4 實驗步驟

1.4.1 配制標樣溶液

稱取0.05g(精確至0.0001g)硫磺標樣置于50 mL容量瓶內，加5 mL蒸餾水搖勻使之溶解，再加入5 mL N,N二甲基甲酰胺，最后再用甲醇溶解到刻度，超聲5 min，直到標樣完全溶解，冷卻搖勻后用移液管移取此溶液10 mL于另一個50 mL容量瓶內，加甲醇溶解到刻度，搖勻后過濾用。

1.4.2 配制試樣溶液

稱取0.1g(精確至0.0001g)40%硫磺·三環唑試樣置于50 mL容量瓶內，加5 mL蒸餾水搖勻使之溶解，再加入5 mL N,N二甲基甲酰胺，最后再用甲醇溶解到刻度，超聲5min，直到試樣完全溶解，冷卻搖勻后用移液管移取此溶液10 mL于另一個50 mL容量瓶內，加甲醇溶到刻度，搖勻后過濾用。

1.4.3 測定方法

在以上色譜操作條件下、儀器基本穩定后，連續注入數針標樣溶液，直至相鄰兩針標樣溶液中的硫磺峰面積相對變化小于1.5%后。按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的順序進樣進行測定[2]。40%硫磺·三環唑懸浮劑的高效液相色譜圖（圖1）。保留時間為2.157min的是三環唑色譜峰，保留時間為4.690min的是硫磺色譜峰。

圖1 40%硫磺·三環唑懸浮劑的液相色譜圖

1.4.4 計算方法

將測得的兩針試樣溶液,以及試樣前后兩針標樣溶液中硫磺峰面積，分別進行平均。試樣中硫磺的質量分數w1(%)按下列公式計算:

式中:R2為試樣溶液中硫磺與內標物峰面積的平均比值；m1為標樣硫磺的質量，g；w為標品硫磺的質量分數，%；R1為標樣溶液中硫磺與內標物峰面積的平均比值；m2為試樣的質量，g；w1為樣品中硫磺的質量分數，%。

1.4.5 允許差

兩次平行測定結果之相對差不大于1.0%，取其算術平均值作為測定結果。

2 結果與討論

2.1 波長的選擇

用紫外可變波長檢測器，在不同波長下對硫磺進行掃描，當掃描波長為265nm時，硫磺的響應值最大，且能與雜質峰徹底分離，因此選擇265nm作為檢測波長。

2.2 色譜操作條件的選擇

為了保證40%硫磺·三環唑懸浮劑劑樣品中硫磺的質量分數測定的準確性，流動相的選擇十分重要。當使用甲醇為流動相時，樣品色譜圖基線平穩，峰型好，準確度高，分離效果較好，出峰時間適宜，因此確定選用甲醇作為流動相。

2.3 試樣溶劑的選擇

根據硫磺的性質，當選用N,N二甲基甲酰胺和甲醇為試樣溶劑時，能較好地溶解試樣，且峰型分離較好，滿足試劑的選擇條件。

2.4 實驗方法中的線性相關性測定

各稱取硫磺標樣 0.03、0.05、0.07、0.09、0.11g（精確至0.0002g），然后配制成幾種質量濃度不同的標準溶液。按1.3、1.4中的方法進行分析，得出了一系列色譜峰面積（表1）。以硫磺的質量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，擬合線性相關曲線，得出硫磺的線性方程y=14184x+10655，線性相關系數為0.9990，呈現出良好的線性關系。

表1 不同質量濃度硫磺標樣與對應的峰面積

2.5 方法的精密度測定

各稱取5個平行試樣，按照以上色譜條件和測定步驟測定，硫磺的標準偏差為0.43%；變異系數為0.02%，具有良好的精密度（表2）。

表2 分析方法的精密度測定結果

2.6 方法的準確度測定

稱取已知含量的試樣5份（0.1026、0.1064、0.1069、0.1043、0.1031g） 精確至0.0002g，各加入不同質量的硫磺標樣（含量99.5%）。在以上操作步驟及色譜條件下測定，硫磺的平均回收率為99.83%，故此方法的準確度比較高（表3）。

3 結語

本文建立的高效液相色譜法測定40%硫磺·三環唑懸浮劑中有效成分硫磺含量，具有良好的準確性和可重復性，方法高效、快捷、準確，能達到定量分析的要求，可用于該復配制劑中硫磺含量的檢測和質量控制。

表3 方法的準確度測定結果