氣相色譜內(nèi)標法測定d-檸檬烯含量

邱小梅，熊寶林，陳 石

（云南省化工研究院，云南 昆明 650228）

作為綠色環(huán)保農(nóng)藥的有效組分和實用助劑——d-檸檬烯（d-Limonene），對鱗翅目、鞘翅目、半翅目、膜翅目等農(nóng)業(yè)害蟲均具殺滅作用，是農(nóng)業(yè)用橙油桔油等產(chǎn)品的重要有效成分之一[1-2]。含檸檬烯的農(nóng)藥產(chǎn)品，在高品質(zhì)農(nóng)產(chǎn)品的種植生產(chǎn)中，使用程度越來越高，可大量減少有機磷及化學(xué)農(nóng)藥的使用。在2018年召開的第九屆全國農(nóng)藥登記評審委員會第二次委員會議上，d-檸檬烯原藥及可溶液劑被評審?fù)ㄟ^為新農(nóng)藥產(chǎn)品。雖然，檸檬烯在藥品和保健品領(lǐng)域，有較為成熟的檢測方法，檢測多以GC-MS、GC和HPLC等方法進行[3-4]，但在農(nóng)藥應(yīng)用領(lǐng)域，檸檬烯水劑的氣相色譜檢測方法尚未見文獻報道。本文建立和討論的氣相色譜內(nèi)標法，可做為產(chǎn)品質(zhì)量的控制方法，在今后，亦可為相應(yīng)檢測標準的制定，提供可靠的經(jīng)驗和數(shù)據(jù)支持。

1 實驗部分

1.1 儀器和試劑

儀器:Agilent6890氣相色譜儀，帶FID檢測器。

試劑:甲醇分析純，國藥集團化學(xué)試劑有限公司；乙酸丁酯，不含有干擾分析的雜質(zhì)；d-檸檬烯標準品（D-limonene） 質(zhì)量分數(shù)為90.0%（巴西 CUTRALE）。

1.2 氣相色譜檢測條件

毛細管色譜柱:Agilent HP-innowax（30m×0.25mm×0.25μm）；柱溫 50℃；進樣口溫度220℃；檢測器溫度250℃；進樣量1.0μL；載氣為高純氮，流速1.5mL/min，分流比30∶1；空氣300mL/min；氫氣:30mL/min。

1.3 樣品檢測

1.3.1 標準溶液的配制

內(nèi)標溶液的配制:乙酸丁酯1.5g，置于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋到刻度，搖勻。

標樣溶液的配制:稱取d-檸檬烯標樣0.0841g，置于25mL容量瓶中，用移液管準確加入5mL內(nèi)標溶液，用甲醇稀釋到刻度，搖勻。

試樣溶液的配制:稱取試樣0.8～1.2g，置于25mL容量瓶中，用移液管準確加入5mL內(nèi)標溶液，用甲醇稀釋到刻度，搖勻。

1.3.2 樣品檢測

在上述氣相色譜操作條件下，待儀器穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標樣溶液，待相鄰兩針中待測組分與內(nèi)標物的峰面積比值的相對響應(yīng)值變化小于1.5%時進樣檢測。色譜圖如圖1所示。由圖1看出，待檢組分與內(nèi)標物分離度良好。

1.4 結(jié)果計算

試樣中d-檸檬烯質(zhì)量分數(shù)w按下式計算:

圖1 d-檸檬烯與內(nèi)標物的氣相色譜圖Figure 1 Gas Chromatogram of the D-limonene and the internal standard

式中:r1為標樣溶液中，d-檸檬烯與內(nèi)標物峰面積比的平均值；r2為試樣溶液中，d-檸檬烯與內(nèi)標物峰面積比的平均值；m1為d-檸檬烯標樣的質(zhì)量，g；m2為試樣的質(zhì)量，g；w0為標樣中d-檸檬烯的質(zhì)量分數(shù)，%。

2 結(jié)果與討論

2.1 線性相關(guān)性驗證

稱取d-檸檬烯標樣0.75g，置于50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋到刻度，搖勻備用。用移液管分別移取1、2、5、10、20mL標樣溶液，置于25mL容量瓶中，準確加入5mL內(nèi)標溶液，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。

按上述氣相色譜操作條件進行多組分析測定，以d-檸檬烯與內(nèi)標物的質(zhì)量比為橫坐標，d-檸檬烯與內(nèi)標物的峰面積比為縱坐標繪制標準曲線，得線性方程為y=0.0161x+0.0005；其線性相關(guān)系數(shù)為0.9999。如圖2所示。

圖2 標準曲線Figure 2 Standard curve

2.2 方法精密度驗證

按前述內(nèi)標檢測方法,對同一個檸檬烯樣品進行平行測定，精密度測定結(jié)果見表1。

表1 精密度試驗結(jié)果Tab1 Precision test results

由表1可見，d-檸檬烯含量的相對標準偏差為0.35%。

2.3 方法準確度驗證

以加標回收率作為準確度驗證方法，在已知d-檸檬烯含量的樣品中分別加入不同量的d-檸檬烯標準樣品，按前述述色譜條件進行測定。結(jié)果見表2。由表2可見，d-檸檬烯的平均回收率為100.3%。

表2 準確度試驗結(jié)果Tab2 Accuracy test results

3 結(jié)論

氣相色譜內(nèi)標法測定d-檸檬烯含量，以乙酸丁酯為內(nèi)標物，具有前處理過程簡便，樣品分離效果好等優(yōu)勢。相比于外標法，此方法不受樣品進樣量的影響，并且由于通過測量內(nèi)標物及被測組分的峰面積的相對值來進行計算，也一定程度上消除了手動進樣、分流歧視、操作條件波動等的變化所引起的誤差，檢測方法更為簡便可靠。