Skp2、P27和CyclinE在宮頸癌組織中的表達及與臨床病理特征的關系

吳金訓

福建省連江縣醫院病理科，福建連江 350500

宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤，位居女性惡性腫瘤第三位，嚴重威脅婦女健康，具有較高的發病率與死亡率[1-2]。我國每年因該病的死亡人數達5.3萬，且每年新發病例數高達13.15萬[3]。研究表明，多種因素長期共同作用促進了宮頸癌的發生發展，在此過程中涉及多基因、多分子水平的改變。S期激酶相關蛋白2（S-phase kinase associated protein2，Skp2）屬于F-box蛋白家族成員，研究表明，Skp2主要參與細胞周期的調控，與多種惡性腫瘤的發生、發展密切相關[4]。P27和細胞周期蛋白E1（Cyclin E1）是與增殖相關的細胞周期調控基因，檢測P27蛋白在宮頸癌及其周圍正常宮頸組織的表達，有利于探討它們與宮頸癌發生、發展的關系。有研究結果顯示，Cyclin E1/CDK2激活加上FBW7丟失途徑，通過CENP-A-介導的著絲粒功能障礙促進染色體不穩定和腫瘤進展[5]。本研究通過過檢測浸潤性宮頸癌（infiltrating cervical carcinoma，ICC）患者標本中Skp2、P27和CyclinE表達，旨在探討它們與宮頸癌臨床病理因素及預后的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年1月～2018年1月我院病理科存檔石蠟包埋ICC組織標本70例為ICC組，年齡35～67歲，平均47.5歲，收集患者具有完整的臨床、病理資料及隨訪情況，排除術前放、化療病例。另選取宮頸上皮內瘤變（CIN）組織標本30例為CIN組和正常子宮頸鱗狀上皮（NCE）組織標本50例為NCE組。

1.2 方法

采用免疫組織化學法檢測各組標本中Skp2、P27和CyclinE表達情況，以購買的陽性片免疫組化染色結果為陽性對照，以PBS替代第一抗體的免疫組化染色結果為陰性對照。按說明書操作，石蠟切片經過二甲苯脫蠟→梯度酒精脫水→抗原修復→檸檬酸緩沖液高溫高壓抗原修復→過氧化物酶阻斷溶液阻斷內源性過氧化物酶→封閉非特異性抗原→加一抗→過夜→二抗→三抗（鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶溶液）→DAB染色→蘇木素復染→脫水、透明→封片。

1.3 統計學方法

采用統計學軟件SPSS13.0對數據進行統計分析，計數資料以百分數（%）表示，采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組Skp2、P27、CyclinE表達的比較

ICC組、CIN組、NCE組Skp2、CyclinE蛋白表達的陽性呈明顯降低趨勢，P27蛋白表達的陽性呈明顯升高趨勢，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

2.2 ICC組Skp2、P27及CyclinE蛋白表達情況

在ICC組中，Skp2蛋白、CyclinE蛋白及P27蛋白表達與年齡、腫瘤大小、臨床分期無明顯關系（P＞0.05）；而與組織學Ⅲ級、間質浸潤＞淺肌層、盆腔淋巴結轉移陽性和脈管浸潤陽性者Skp2蛋白、CyclinE蛋白表達陽性率分別顯著高于組織學≤Ⅱ級、間質浸潤≤淺肌層、盆腔淋巴結轉移陰性和脈管浸潤陰性者，P27蛋白表達陽性率于分別顯著低于組織學≤Ⅱ級、間質浸潤≤淺肌層、盆腔淋巴結轉移陰性和脈管浸潤陰性者，差異有統計學意義（P＜ 0.05），見表 2。

2.3 ICC組Skp2、P27及CyclinE的表達與預后的關系

隨訪資料顯示，ICC組生存期≥5年者38例，生存期≥5年者Skp2和CyclinE蛋白表達陽性率明顯低于生存期＜5年者，P27蛋白表達陽性率明顯高于生存期＜5年者，差異有統計學意義（P＜0.05），見表3。

表2 ICC組Skp2、P27及CyclinE蛋白陽性表達的情況[n（%）]

表3 Skp2、P27及CyclinE蛋白表達陽性率與預后的關系[n（%）]

3 討論

Skp2是zhang等于1995年從大量的惡變細胞中發現的一種能與S期激酶CyclinA-CDK2相互作用的蛋白。因其主要存在于惡變細胞的S期，且與CyclinA-CDK2活性相關，故命名為Skp2（S-phase kinase-associated proteins）。P27是從靜息細胞抽提物中發現的一種分子量為27kD的熱穩定蛋白[6-7]。P27作為細胞周期負性調控因子，廣泛抑制各種細胞周期蛋白和激酶的活性，P27在細胞周期的調控中起重要作用，作為細胞周期Gl期的重要限速因子，與腫瘤的發生、發展及預后有著密切的關系。在人類幾乎所有的上皮性腫瘤中都有P27蛋白表達的下降或缺失[8-10]。CyclinE是細胞周期G1期的正性調控因子，在控制細胞由G1進入S期過程中起限速作用。CyclinE的過度表達參與宮頸癌的發生及惡性進展。CyclinE是細胞周期正性調控因子，促進細胞周期由G1期向S期轉化，是細胞進入S期的關鍵性調節基因，過度表達可導致細胞增殖失控，形成腫瘤。P27是細胞周期負性調控因子[11]。

本研究結果顯示，ICC組、CIN組、NCE組Skp2、CyclinE蛋白表達的陽性呈明顯降低趨勢，P27蛋白表達的陽性呈明顯升高趨勢，差異有統計意義（P＜0.05）。在ICC組中，Skp2蛋白、CyclinE蛋白及P27蛋白表達與年齡、腫瘤大小、臨床分期無明顯關系（P＞0.05）；而與組織學Ⅲ級、間質浸潤＞淺肌層、盆腔淋巴結轉移陽性和脈管浸潤陽性者Skp2蛋白和CyclinE蛋白表達陽性率分別顯著高于組織學 ≤Ⅱ級、間質浸潤≤淺肌層、盆腔淋巴結轉移陰性和脈管浸潤陰性者，P27蛋白表達陽性率分別顯著低于組織學 ≤Ⅱ級、間質浸潤≤淺肌層、盆腔淋巴結轉移陰性和脈管浸潤陰性者，差異有統計學意義（P＜0.05）。 隨訪資料顯示，ICC組生存期≥5年者38例，生存期≥5年者Skp2和CyclinE蛋白表達陽性率明顯低于生存期＜5年者，P27蛋白表達陽性率明顯高于生存期＜5年者，差異有統計學意義（P＜0.05）。本研究結果提示，三者聯合檢測可預示宮頸癌的高惡性度，并提示腫瘤預后不良。隨著宮頸癌分化程度降低，Skp2、CyclinE的表達逐漸增高，而P27的表達逐漸降低。有研究發現Skp2與P27蛋白之間呈負相關。有研究發現，肺腺癌和鱗狀細胞癌、卵巢腫瘤，前列腺癌均與Skp2和P27有關[12-13]。多數研究者認為，Skp2的一個最重要功能是靶向降解P27，Skp2過量表達可下調P27，從而促進腫瘤的產生，發揮其致瘤作用[14-15]。

綜上所述，Skp2、CyclinE的高表達和P27的低表達或表達缺失可能與宮頸癌的發生發展有關。Skp2和CyclinE蛋白高表達可能是宮頸組織惡變的重要生物學標志，P27蛋白表達降低提示腫瘤具有更高的侵襲性及不良預后。