白頭翁散超微粉和普通粉穩定性的對比試驗

李艷玲,趙建平,劉永錄,張國祖,李文靜,張遠方,張貴方

(河南牧業經濟學院,河南 鄭州 450011)

白頭翁散由白頭翁、黃連、黃柏和秦皮組成。其功效為清熱解毒,涼血止痢。主治：熱毒赤痢,濕熱痢疾,赤多白少和發熱口渴等[1]。在獸醫臨床上應用非常廣泛。

超微粉碎技術是指利用機械或流體動力的方法,將物料顆粒粉碎至微米級甚至納米級微粉的過程。中藥超微粉碎技術在20世紀90年代中后期興起,它在遵循中醫藥理論的前提下,結合中藥物料的特點,采用現代粉體技術,將中藥材、中藥提取物及中藥制劑微粉化,既保留了傳統飲片的優點,又具一些特殊的理化性質,如良好的分散性、溶解性、吸附性等,

白頭翁散經超微粉碎后,可以大大提高藥材的吸收利用率,有效減少臨床用量,節約藥材資源。但對于中藥散劑而言,比表面積增加,可能會增加其吸濕性,同時影響其穩定性,而有關超微粉和普通粉相比,穩定性是否會變差的研究尚未見報道。本課題組經過正交實驗篩選確定白頭翁散超微粉的粉碎粒徑是過300目篩的粉末。為了考察白頭翁散超微粉的穩定性,本實驗對比研究了白頭翁散超微粉和普通粉穩定性的差異,以期為白頭翁散超微粉后續的生產、包裝、貯存、運輸和有效期的確定建立科學依據。

1 藥材與試劑

藥材：白頭翁、黃連、黃柏、秦皮,購自河南中醫學院一附院,經鑒定是白頭翁是毛茛科植物白頭翁(Pulsatilla chinensis(Bge.)Regel)的干燥根；黃連是毛茛科植物黃連(Coptis chinensis Franch)的干燥根莖；黃柏是蕓香科植物黃皮樹(Phellodendron chinense Schneid)的干燥樹皮；秦皮是木犀科植物苦櫪白蠟樹(Fraxinus rhynchophylla Hance)的干燥干皮。標準品：鹽酸小檗堿(含量：86.8%,批號：110713-200208,中國藥品生物制品檢定所)；試劑：甲醇(色譜純),鹽酸,三氯甲烷。

2 方法與結果

2.1 粉體的制備

2.1.1 白頭翁散普通粉的制備[2]參照《中國獸藥典》2015年版中白頭翁散制法制備。

2.1.2 白頭翁散超微粉的制備 取白頭翁散普通粉投入到振動式藥物超微粉碎機中,粉碎一定時間后,過300目篩即得。

2.2 含水量測定 采用水份測定儀測定粉體的含水量。

2.3 小檗堿含量測定[3]

2.3.1 色譜條件流動相 乙腈：0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(45∶55)(每100 mL加十二烷基磺酸鈉0.1 g,磷酸調 pH值到4.0)；色譜柱：依利特C18柱；檢測波長：345 nm。

2.3.2 樣品制備 精密稱取白頭翁散1 g,加入甲醇-鹽酸(100∶1)的混合液50 mL,密塞,稱定重量,超聲30 min,放冷,稱重,用甲醇補足減失的量,搖勻,濾過,精密量取續濾液2 mL,置10 mL量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,濾過,取續濾液,即得。進樣20 μL,測峰面積。

2.3.3 標準品制備 精密稱取小檗堿對照品,加甲醇溶解,制成濃度為196 μg/mL的儲備液。

2.3.4 測定法 分別精密吸取標準品和樣品,進樣10 μL,記錄峰面積,測定,即得。

圖1 小檗堿標準品

圖2 白頭翁散超微粉樣品

圖3 白頭翁散超微粉小檗堿陰性

2.3.5 標準曲線制備 分別精密量取5 mL、3 mL、1.5 mL、1 mL、0.5 mL、0.25 mL 置 6 個 10 mL 容量瓶中,加甲醇定容,搖勻,分別取20 μL進樣,每個平行進2針,得標準曲線方程：y=43.804x+41.585,R=0.999 9,小檗堿在9.8～117.6 μg/mL范圍內線性關系良好。

2.3.6 精密度的測定 取上述對照品溶液的2號,連續進樣6次,每次20 μL,考查進樣精密度,RSD為0.76%。

2.3.7 重復性試驗 精密稱取同一批的白頭翁散超微粉樣品6份,按上述方法試驗,測定樣品小檗堿的含量,結果平均含量為2.35%,RSD為2.01%。

2.3.8 回收率的測定 精密稱取6份300目的白頭翁散0.1 g,然后分別按樣品中小檗堿濃度的大約30%、50%、70%的量加入小檗堿標準品,各加入甲醇-鹽酸(100∶1)的混合液50 mL,密塞,稱定重量,超聲30 min,放冷,稱重,用甲醇補足減失的量,搖勻,濾過,精密量取續濾液2 mL,置10 mL量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,濾過,取續濾液,即得。進樣20 μL,測峰面積。結果平均回收率為103.08%,RSD為1.80%。

2.3.9 樣品的含量測定 分別取3個不同批號白頭翁散超微粉,按照2.2.2項下制備供試品制備方法制備供試品溶液。按照2.1項色譜條件測定,分別進樣10 μL,記錄峰面積,并計算供試品中小檗堿含量。結果見表1。

表1 不同批次白頭翁散超微粉中小檗堿的含量

根據3批樣品的含量測定結果,可以暫定白頭翁散超微粉中小檗堿的含量應達到2.00%以上。

2.4 初步穩定性試驗

2.4.1 加速穩定性試驗 將供試品按市售包裝置于CSH-SDT-IP綜合藥品穩定性試驗箱中[溫度(40±2)℃,相對濕度70% ±5%],放置6個月。在0、1、2、3、6 個月各取樣品,依據質量標準草案考察其性狀、水份、含量及微生物限度。結果見表2。

結果顯示：無論是超微粉還是普通粉,在加速試驗條件下從1月到6月水份含量均表現有顯著增加,而超微粉和普通粉相比,水份增加的更明顯。特別是到第2個月,超微粉的水份和0月相比有極顯著差異(P＜0.01),和第2個月的普通粉相比也有極顯著差異(P＜0.01),說明隨著時間的延長,白頭翁散經超微粉碎后,吸濕性和普通粉相比大大增加,但沒有超過散劑水份的限制(≤9.0%)。小檗堿含量3批樣品也均有明顯變化,普通粉中小檗堿含量降低約5%左右,但超微粉的變化更顯著,到第6個月時小檗堿含量均下降了10%左右,和0月相比,有顯著差異(P＜0.05),但未低于最低含量限制(2.10%),和普通粉相比沒有顯著差異。

表2 加速穩定性試驗考察結果

2.4.2 長期穩定性試驗 將3批樣品置于CSHSDT-IP綜合藥品穩定性試驗箱中,在溫度25℃ ±2℃,相對濕度60% ±10%的條件下放置12個月。依據質量標準草案在0、1、3、6、9、12 個月月末取樣,考察其水份、測定其含量。結果見表3。

結果表明：在前3個月,無論是超微粉和普通粉,水份雖略有增加,但沒有顯著變化,從第6個月開始,水份明顯增多,超微粉和普通粉的水份和0月相比都有顯著差異(P＜0.05),到第9個月,超微粉的3批樣品和0月相比有極顯著差異(P＜0.01),但和普通粉的9月相比,沒有顯著S差異。到第12個月,超微粉和普通粉的水份相比有顯著差異(P＜0.05),但沒有超過散劑水份的限制(≤9.0%)。小檗堿的含量在放置12個月內,只有批號20160829的超微粉樣品和0月相比發生了含量顯著降低的變化(P＜0.05),但和普通粉相比沒有明顯差異。其他批樣品無論是超微粉和普通粉小檗堿含量都略有降低,但沒有顯著變化。

表3 長期穩定性試驗考察結果

3 討論

3.1 本試驗表明,藥材經過超微粉碎后,其吸濕性明顯增加,特別是短期內,超微粉含水量增加更劇烈、流動性變化更早,這可能是由于微粉具有更大的表面積,在同時間內吸濕量更大,同時,使其流動性變化更早。

3.2 文獻報道[4-5]藥物經超微粉碎粒度減小時,因粒子表面會更加容易吸附空氣和帶有電荷,從而增加存放難度,使其穩定性變差。本試驗中無論是加速試驗還是長期穩定性試驗均證明超微粉中小檗堿穩定性和普通粉相當,雖然比普通粉中下降略快,但兩者相比沒有顯著差異。

3.3 根據藥物穩定性技術指導原則[6]對白頭翁散超微粉進行穩定性考察,結果加速試驗和長期試驗均表明白頭翁散超微粉的性狀、水份含量的檢查等指標均未見明顯變化,均符合指導原則相關規定。因此,可以確定白頭翁散超微粉的貯存條件是鋁箔密封保存,確定的最終有效期為12個月。本試驗通過對白頭翁散超微粉的穩定性研究,進一步為其質量標準的建立提供理論依據,也為該新藥的申報資料提供試驗方法和數據,對該藥物的進一步深入研究和有效開發利用奠定理論基礎。