老年重癥肺炎患者血磷與免疫狀態相關性研究

劉雪凱 劉 晨 辛 勤 陳 濤 梁國威

肺部感染是老年人最常見的疾病之一，因肺炎死亡患者中老年患者約占70%[1]。且有研究指出，危重癥患者常伴有不同程度的電解質紊亂[2～5]。而磷是人體必需的常量元素之一，臨床上低磷血癥的發生率為0.34%～3.10%[6]。老年重癥肺炎患者群體中極易多發低磷血癥，并與患者預后密切相關[7～10]。淋巴細胞亞群檢測也是重癥肺炎治療和預后判斷的重要輔助手段[11]。淋巴細胞亞群包括T細胞、B細胞和NK細胞3類。T細胞亞群又分為輔助性T淋巴細胞和抑制性T淋巴細胞，其特征分別為表達CD4+和CD8+簇分化抗原。正常情況下，淋巴細胞各亞群處于正常水平，且CD4+T細胞和CD8+T細胞保持著動態平衡，二者比值在正常范圍內浮動。通過對淋巴細胞的絕對計數、百分比計算以及CD4+/CD8+比值的計算，可獲得患者的免疫狀態信息。

本研究旨在通過檢測老年重癥肺炎患者的血清磷水平和淋巴細胞亞群狀態，探索二者的變化規律及有無相關性，并研究伴有和不伴有低磷血癥重癥肺炎患者的免疫狀態是否存在差異，從而為臨床診治和預后判斷提供參考依據，為進而嘗試糾正低磷血癥能否改善預后的實驗提供理論基礎。

對象與方法

1.研究對象：選取2017年1～4月來自航天中心醫院的老年重癥肺炎患者85例(診斷標準見2016年《中國成人社區獲得性肺炎診斷和治療指南》[12])。其中低磷血癥組(血磷<0.8mmol/L)42例，患者年齡61～91歲，中位年齡82歲，非低磷血癥組43例，患者年齡62～93歲，中位年齡82歲。健康對照者：選取同期航天中心醫院健康體檢者30例，年齡65～82歲，中位年齡75歲。均無感染及呼吸系統疾病。

2.研究方法：(1)儀器與試劑：深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司生產的BriCyte E6流式細胞儀及原裝配套抗體、溶血劑和質控物。抗體包括T淋巴細胞抗體試劑：CD3-FITC/CD8-PE/CD45-perCP/CD4-APC；B淋巴細胞抗體試劑：CD3-FITC/CD16+CD56-PE/ CD45-PerCP/CD19-APC。貝克曼庫爾特實驗系統(蘇州)有限公司生產的AU5800全自動生化分析儀。(2)標本采集：采集患者及健康對照者清晨空腹狀態下EDTA-K2抗凝靜脈全血標本2ml及靜脈血5ml以惰性分離膠采血管采集，取血后迅速混勻。(3)標本檢測：生化檢測：惰性分離膠采血管離心后，在全自動生化分析儀器上機檢測血清無機磷；淋巴細胞亞群檢測：采用全血免洗法，上機后流式細胞儀自動設門檢測CD3+T細胞、CD4+T細胞(CD3+CD4+)、CD8+T細胞(CD3+CD8+)、B淋巴細胞(CD19+)和NK細胞(CD3-CD16+56+)占淋巴細胞總數的百分比及其絕對值，絕對值測量方法為體積法。CD4+/CD8+比值為計算值。

結 果

1.3組血清磷和淋巴細胞亞群百分比:結果詳見表1。3組之間血磷比較，差異有統計學意義。低磷血癥組CD4+%和CD4+/CD8+顯著低于非低磷血癥組和正常對照組，而非低磷血癥組和正常對照組比較，差異無統計學意義。詳見表2。

2.3組血清磷和淋巴細胞亞群絕對值:結果詳見表3。3組之間CD3+和CD4+細胞絕對值比較，差異有統計學意義。重癥肺炎患者無論磷高低與否CD8+、B細胞和NK細胞絕對值均顯著低于正常對照組。詳見表4。

3.重癥肺炎患者血清磷和CD4+/CD8+比值：具有顯著相關性(r=0.626,P=0.000)。

表1 3組患者血清磷和淋巴細胞亞群百分比結果

表2 低磷血癥組、非低磷血癥組和正常對照組血清磷和淋巴細胞亞群百分比差異性分析

表3 3組患者淋巴細胞亞群絕對值結果(個/微升)

表4 低磷血癥組、非低磷血癥組和正常對照組淋巴細胞亞群絕對值差異性分析

討 論

人體中磷元素含量豐富，可作為細胞結構成分，參與體內普遍的磷酸化反應以及參與人體能量供給相關反應等。造成低磷血癥的原因有很多，如急慢性腎衰竭、心功能不全、多器官功能障礙及靜脈血液濾過等。有研究發現，危重癥患者低磷血癥的發生率可高達44.8%，低磷血癥可以引起多器官衰竭，影響患者預后[13]。本實驗中，老年重癥肺炎患者根據其血磷水平分為低磷血癥組和非低磷血癥組，3組間血磷水平比較差異有統計學意義，低磷血癥組顯著低于非低磷血癥組，非低磷血癥組顯著低于對照組，說明重癥肺炎病人的血磷水平普遍低于正常人群。

淋巴細胞是人體免疫功能的重要執行者，由免疫器官產生，按其遷移率、簇分化抗原和功能的差異可分為T淋巴細胞、B淋巴細胞、自然殺傷細胞(NK細胞)。淋巴細胞亞群的測定是了解人體免疫功能、狀態和平衡水平的主要指標。健康狀態下，人體內各種淋巴細胞及其亞群相互作用，維持機體正常免疫功能。當受其他因素影響，淋巴細胞及其亞群的數量或比例異常時，免疫功能會受到破壞并可能導致一系列疾病的發生。T淋巴細胞(CD3+)負責細胞免疫功能，在抗細胞內感染、腫瘤細胞清除、排斥反應等方面發揮作用，并對體液免疫具有輔助功能。輔助性T細胞(Th，CD4+CD8-)具有輔助其他免疫細胞分化和調節免疫應答的作用；抑制性T細胞(Ts，CD4-CD8+)可以抑制Th細胞的活性，從而間接抑制B細胞的分化以及殺傷性T細胞的功能，達到負向調控體液免疫和細胞免疫功能的作用。因此，CD4+/CD8+比值可協助判斷免疫功能是否處于平衡狀態[14]。NK無需致敏就可以非特異性地殺傷靶細胞， B淋巴細胞可以產生抗體，特異性地結合抗原，擔負體內體液免疫。

本研究中低磷血癥組老年重癥肺炎患者外周血中CD3+T淋巴細胞絕對值、CD4+T細胞絕對值及其百分比、CD8+T細胞絕對值及其百分比、CD4+/CD8+比值、B淋巴細胞絕對值、NK細胞絕對值均顯著低于對照組水平。這說明伴有低磷血癥的老年重癥肺炎患者免疫水平降低，免疫細胞數量減少；CD4+/CD8+比值顯著降低說明該群體免疫功能處于紊亂狀態。

非低磷血癥組老年重癥肺炎患者外周血中CD3+T淋巴細胞絕對值、CD4+T細胞絕對值、CD8+T細胞絕對值、B淋巴細胞絕對值、NK細胞絕對值均顯著低于對照組水平，這表明不伴有低磷血癥的老年重癥肺炎患者外周血主要免疫細胞數量與健康人群相比顯著偏低，雖百分比比較差異無統計學意義，但作為相對數據不如絕對值準確，所以該組人群仍然處于免疫功能低下狀態。

低磷血癥組老年重癥肺炎患者外周血中T淋巴細胞絕對值、CD4+T細胞絕對值及其百分比、CD8+T細胞百分比、CD4+/CD8+比值與非低磷血癥組老年重癥肺炎患者群體水平比較，差異有統計學意義。T淋巴細胞絕對值和CD4+T細胞絕對值的低下是伴有低磷血癥的老年重癥肺炎患者群體較之不伴有低磷血癥的老年重癥肺炎患者群體免疫功能紊亂的根本原因。老年重癥肺炎患者(包括低磷和非低磷組)B淋巴細胞和NK細胞的絕對值和百分比與對照組相比顯著降低，這提示B淋巴細胞和NK細胞的數量下降或許是老年重癥肺炎患者的普遍狀況。另外，對照組的分析中，CD4+/CD8+比值雖然處于參考區間內，但也是低值水平，這也與老年人免疫功能減低的普遍認識一致。研究發現，老年重癥肺炎患者血清無機磷和CD4+/CD8+比值具有相關性(P=0.000)，相關系數為0.626。這說明老年重癥肺炎患者的血清磷水平越低下，CD4+/CD8+比值越低，免疫功能越處于紊亂狀態。

綜上所述，老年重癥肺炎患者免疫功能狀態紊亂，而近來很多研究表明，免疫治療可以提高重癥肺炎患者的免疫功能改善預后[15～17]。本研究顯示伴有低磷血癥的患者免疫功能紊亂更為明顯，筆者今后通過研究糾正低磷血癥促進患者免疫功能的恢復以改善預后。