洋蔥醇提物總多酚含量及其抗氧化活性研究*

李佩儒 ，周春陽，張 譯 ，林 勇 ，李莎莎 ，劉 慧 ，楊春艷 △

（1.川北醫學院藥學院·川北醫學院藥物研究所，四川 南充 637100； 2.川北醫學院預防醫學系，四川 南充 637100）

洋蔥Allium cepaL.，別名玉蔥、蔥頭等，為百合科（Liliaceae）蔥屬Allium草本植物，洋蔥種植和食用已有5 000多年歷史。現代化學成分研究表明，其含有多酚、甾體皂苷、有機硫化物（organosulfur compounds，OSCs）、多糖等次級代謝產物［1-4］，具有降血糖、調血脂、抗血栓、抗動脈硬化、防治冠狀動脈粥樣硬化性心臟病和糖尿病等多方面的生理保健功能［5-9］。多酚類物質最重要的功能是抗氧化和清除自由基［10］。因此，本研究中采用福林酚法測定洋蔥總多酚含量，采用單因素試驗和正交試驗優化最佳顯色條件，并采用2，2′-聯氮雙（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二銨鹽（ABTS）和1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）法評價洋蔥醇提物的抗氧化活性。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

UV-1750型紫外分光光度計（日本島津公司）；FA2004型電子天平（0.000 1 g，上海良平儀器儀表有限公司）；KQ-300DE型臺式數控超聲波清洗器（東莞市科橋超聲波設備有限公司）；HH-9型數顯恒溫水浴鍋（金壇市國旺實驗儀器廠）。

1.2 試藥

洋蔥（市售）；沒食子酸（成都市科龍化工試劑廠，批號為20120227）；蘆丁（成都曼斯特生物科技有限公司，批號為 MUST-16111111）；DPPH（美國 Sigma公司，批號為 034K1071）；ABTS（Aladdin 公司，批號為 201406）；水為自制超純水；鎢酸鈉（上海中秦化學試劑有限公司，批號為20161227），鉬酸鈉（天津市化學試劑四廠，批號為20141119），硫酸鋰（天津市巴斯夫化工有限公司，批號為20160409）等試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 總多酚含量測定

2.1.1 溶液制備

稱取干燥的沒食子酸10.00 mg，精密稱定，加蒸餾水適量，超聲溶解，放冷，以蒸餾水定容至100 mL，制成每1 mL含0.1 mg沒食子酸的溶液，得對照品溶液，4℃冰箱保存備用。

取鮮洋蔥（市售）于60℃恒溫鼓風干燥箱中干燥，粉碎；取洋蔥粉217.5 g，以70%乙醇（料液比為1∶10）溶解，超聲波輔助提取法（UAE）提取3次（每次30 min），得洋蔥醇提物163.5 g，4℃冰箱保存備用；取洋蔥醇提物0.14 g，加水溶解并定容至100 mL，抽濾，得供試品溶液，4℃冰箱保存備用。

稱取鎢酸鈉8g和鉬酸鈉2g置圓底燒瓶中，用56mL蒸餾水溶解，加入4 mL 85%磷酸溶液和8 mL濃鹽酸，文火回流10 h，然后加入1.2 g硫酸鋰及6 mL氫氧化鈉，加熱沸騰15 min至亮黃色，不得帶微藍和綠色。冷卻，移入100 mL容量瓶中，定容，貯于棕色瓶中，得福林試劑，4℃冰箱保存備用。

2.1.2 檢測波長選擇

精密吸取供試品溶液與對照品溶液各0.4 mL，置5 mL容量瓶中，加入1 mL水，搖勻，加入福林試劑0.5 mL，搖勻，放置1 min；加入10%碳酸鈉溶液1 mL，加水稀釋至刻度，充分搖勻后置60℃恒溫水浴鍋中反應60 min，以相應的提取溶劑為空白溶劑，于550～850 nm波長范圍內掃描，記錄紫外光譜圖。結果見圖1。洋蔥醇提物和沒食子酸對照品溶液與福林試劑反應后均在760 nm波長處有穩定的最大吸收峰，故確定檢測波長為760 nm。

2.1.3 方法學考察

線性關系考察：將2.1.1項下所配溶液稀釋5倍，精密吸取對照品溶液 0.30，0.50，0.70，0.90，1.10，1.25 mL，分別置5 mL容量瓶中，各加1 mL水搖勻，再加0.5 mL福林試劑，充分搖勻，加入1.0 mL 10%碳酸鈉溶液，混勻，以蒸餾水稀釋至刻度。分別在60℃下水浴60 min，于760 nm波長處測定各吸光度值。以吸光度值（A）為縱坐標、對照品溶液質量濃度（C）為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程Y＝0.116 6X+0.096 2，R2＝0.999 5（n＝6）。結果表明，沒食子酸質量濃度在 1.2 ～5.0 mg／L范圍內與吸光度值線性關系良好。

圖1 對照品（DZ01212）和洋蔥醇提物（GSP1212）紫外吸收光譜圖

穩定性試驗：分別取同一供試品溶液0.4 mL，按照洋蔥總多酚含量測定的最佳顯色條件，顯色后室溫下放置，分別于 15，30，45，60，90，120 min 時測定吸光度。結果顯色后2 h內總多酚含量為30.606 1 mg／g，RSD為0.1149%（n＝6），表明供試品溶液在室溫下2h內穩定。

精密度試驗：分別精密吸取同一對照品溶液0.4mL，共5份，分別置5mL容量瓶中，按洋蔥總多酚含量測定的最佳顯色條件，測定吸光度。結果含量為30.640 7 mg／g，RSD為0.137 8%（n＝5），表明儀器精密度良好。

重復性試驗：分別稱取洋蔥粉末1.0 g，平行16份，精密稱定，依法制備供試品溶液，按洋蔥總多酚含量測定的最佳顯色條件，測定吸光度。結果洋蔥總多酚平均含量為 29.908 8 mg／g，RSD為 5.169 4% （n＝6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：分別取洋蔥粉末6份，精密稱取每份1.0 g，各加入一定量的沒食子酸對照品，按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，測定沒食子酸含量，計算加樣回收率。結果見表1。

表1 洋蔥總多酚加樣回收試驗結果（n＝6）

2.2 單因素試驗

圖2 各因素對洋蔥總多酚含量測定影響

精密量取供試品溶液 0.4 mL，按 1.2.2項下方法顯色，采用單因素優化法分別對體系中福林酚體積（0.25，0.40，0.50，0.60，0.75 mL），10% 碳酸鈉體積（0.50，0.75，1.00，1.25，1.50 mL），顯色溫度（30，40，50，60，70 ℃），顯色時間（30，40，50，60，70 min）對總多酚含量測定的影響進行考察（以上試驗均平行測定3次）。結果見圖2。

由圖2 A可見，洋蔥醇提物的吸光度值隨反應溫度升高呈先升后降的變化趨勢，當反應溫度為60℃時，洋蔥醇提物的吸光度值最大，反應溫度超過60℃后，吸光度值逐漸降低，說明多酚類化合物在高溫下不穩定。因此，確定最佳的顯色溫度為60℃。

由圖2 B可見，多酚類物質與顯色劑反應需要一個過程，顯色反應60 min內，洋蔥醇提物吸光度值明顯增大，顯色反應迅速；反應60 min后，洋蔥醇提物吸光度值逐漸下降。因此，確定最佳顯色時間為60 min。

由圖2 C可見，隨著福林試劑用量的增加，洋蔥醇提物的吸光度值呈先升后降的趨勢，當福林試劑用量為0.5 mL時，吸光度值達最大值。因此，確定福林試劑的最佳用量為0.5 mL。

由圖2 D可見，10%碳酸鈉溶液是福林酚比色法中反應的緩沖液，能為顯色劑與酚類環境提供堿性環境，使多酚與顯色劑反應后在堿性環境下顯藍色。可見，洋蔥醇提物的吸光度值隨碳酸鈉溶液加入量的增加而升高，但當加入量超過1.0 mL時，吸光度值迅速降低。因此，確定10%碳酸鈉溶液的最佳加入量為1.0 mL。

2.3 正交試驗

在單因素試驗基礎上以顯色溫度（因素A）、顯色時間（因素B）、福林酚體積（因素C）、10%碳酸鈉溶液體積（因素D）為考察因素，測定洋蔥醇提物中總多酚的含量，優化洋蔥醇提物總多酚含量測定的顯色條件。設計正交驗，其因素水平見表2。

表2 洋蔥總多酚含量測定 L9（34）正交試驗因素水平表

由表3及表4可見，洋蔥總多酚含量測定的最佳顯色條件為：顯色溫度60℃，顯色時間60 min，福林酚體積 0.6 mL，10% 碳酸鈉溶液體積 0.75 mL。方差分析結果見表3。

表3 正交試驗結果

表4 方差分析表

2.4 抗氧化活性研究

圖3 洋蔥醇提物抗氧化活性

參考文獻［11］方法進行洋蔥醇提取物的抗氧化活性試驗。結果見圖3。可見，在一定質量濃度范圍內，洋蔥醇提物的抗氧化能力具有濃度依賴性。其中，洋蔥醇提物對 ABTS自由基的半數抑制濃度（IC50）值為（187.7±0.08）mg／L，而 陽 性 對 照 蘆 丁 對 ABTS 和DPPH 自 由 基 的IC50值 為 （12.87±0.21）mg／L 和（10.29 ± 0.17）mg ／L。

3 討論

多酚（polyphenols）包括黃酮、酚酸、芪類和木質素等，是植物界中最豐富的次級代謝產物［12］。福林酚法是利用在堿性條件下，多酚類化合物可以將磷鎢鉬酸還原成藍色的原理，顏色深淺與多酚含量呈正相關，可用分光光度計進行測定［13］。多酚類物質的抗氧化功能與多酚的結構有關，酚羥基中的鄰位酚羥基極易被氧化［14］，是良好的抗氧化劑。酚羥基可提供活潑氫，使自由基滅活，本身被氧化形成含有鄰二酚結構的自由基而具有較高的穩定性［15］。

洋蔥研究較多的為黃酮，而對多酚的研究相對較少。其中，SIRACUSA等［16］報道洋蔥總多酚的含量為123.5 mg／kg（鮮重），且其主要成分為槲皮素 3，4′-二 -O-葡萄糖苷，槲皮素4′-O-葡萄糖苷等。此外，唐遠謀等［17］采用微波輔助提取法（MAE），得到洋蔥總多酚的含量為 12.45 mg ／g。另外，陳晨等［18］研究了鮮切洋蔥貯藏期間多酚成分的變化。本研究中采用UAE法提取洋蔥多酚，并采用正交試驗法優化其含量測定方法。結果表明，洋蔥醇提物具有一定的抗氧化能力，且其抗氧化能力在一定濃度范圍內具有濃度依賴性。

民間洋蔥常用于防治動脈硬化癥［19］，而氧化應激在動脈粥樣硬化病變的發生發展中起著非常重要的作用［20］。因此，本研究為洋蔥在保健食品、藥品領域中的進一步開發利用提供了參考。