逍遙散對脂多糖誘導抑郁樣行為的影響

石博宇， 葉曉林， 羅 杰， 劉小波， 彭 希， 劉 蓉， 曾 南

（成都中醫藥大學藥學院， 中藥資源系統研究與開發利用省部共建國家重點實驗室培育基地， 四川 成都 611137）

抑郁癥是一種臨床常見的精神障礙性疾病， 以持續性情緒淡漠、 悲觀等為主要臨床特征， 大量研究表明炎癥反應與其病理生理機制密切相關。 逍遙散始載于宋代《太平惠民和劑局方》， 是中醫調治情志活動異常的經典名方， 具有疏肝解郁、 養血健脾之功效， 主治肝郁血虛脾弱諸證； 現代藥理研究顯示， 它具有抗抑郁、 調節中樞單胺類神經遞質水平、 調控體內激素水平、 調節免疫等藥理作用。 本實驗基于炎癥可誘發抑郁癥的認識及逍遙散具有一定抗炎作用的基礎， 在體內、 體外實驗采用脂多糖誘導抑郁樣行為， 觀察逍遙散對其影響， 以期為相關臨床應用提供科學依據。

1 材料

1.1 動物 SPF 級C57BL／6J 小鼠， 雄性， 體質量18～22 g； SPF 級新生24 h SD 乳鼠； SPF 級SD 大鼠， 雄性， 體質量180～220 g， 均由成都達碩生物科技有限公司提供， 合格證號 SCXK （川）2013-24。

1.2 藥物 逍遙散藥材飲片（柴胡、 當歸、 白芍、 白術、 茯苓、 薄荷、 生姜、 甘草） 購自成都太極大藥房。 水煎液制備方法為按方劑組成要求[1］取相應量藥材， 8 倍量水浸泡30 min， 加熱煮沸后文火煎煮60 min， 趁熱過濾藥液， 再加6 倍量水同法分別煎煮40、 30 min， 合并3 次濾液，60 ℃下減壓濃縮至所需濃度（1.5 g 生藥／mL），生藥量分別為30、 15 g／kg， 相當于成人臨床日用量的30、 15 倍。 含藥血清制備方法為將大鼠按體質量分層隨機分為空白組和逍遙散高劑量組（30 g／kg）， 連續灌胃給藥7 d， 每天1 次， 末次給藥1 h后麻醉大鼠， 腹主動脈取血， 3 500 r／min 離心10 min， 分 離 血 清， 每 組 混 合， 56 ℃水 浴30 min滅活， 0.22 μm 微孔濾膜過濾分裝， -20 ℃下冷凍保存備用。

1.3 試劑 鹽酸氟西汀膠囊（法國Patheon 公司，20 mg， 國藥準字J20130010， 批號6607A）； 鹽酸氟 西 汀 （批 號 SLBM4298V）、 脂 多 糖 （批 號086M4159V）、 DAPI （批號066M4053V） （美國Sigma 公 司）； Hanks 液 （批 號1752164）、 B-27（批號1813319）、 L-谷氨酰胺 （批號1816803）、Neurobasal-A 培養基（批號1852901） （美國Gibco公司）； 胎牛血清（呼和浩特市草原綠野生物工程材料有限公司， 批號150501）； DMEM 培養基（美國HyClone 公司， 批號AB10134657）； 小鼠IL-6、TNF-α， 大鼠TNF-α ELISA 試劑盒（欣博盛生物科技有限公司， 批號M170221-004a、 M170221-102a、R170110-102a）； 小鼠IL-6、 TNF-α， 大鼠TNF-α、IL-6 ELISA 試劑盒（上海依科賽生物制品有限公司， 批 號21G137、 21G152、 21G128、 21G156）；小鼠IDO、 5-HT， 大鼠5-HT、 IDO ELISA 試劑盒（南京建成生物工程研究所， 批號01／2018、 01／2018、 02／2018、 02／2018）； NO 檢測試劑盒 （批號081216161111）、 乳酸脫氫酶細胞毒性檢測試劑盒（批號112316170306） （上海碧云天生物技術有限公司）； 兔源NeuN 單克隆抗體（美國Cell signaling Technology 公司， 貨號5292S、 24307S）； 山羊抗兔IgG／Cy3 [愛必信（上海） 生物科技有限公司， 批 號10、 AG04017512］； FastQuant RT Kit（Witn gDNase） 100rxn （批號Q5725）、 SuperReal PreMix Plus （SYBR Green） 20 μL×500rxn （批號Q5516） [天根生化科技（北京） 有限公司］。

1.4 儀器 3001 型酶標儀、 3111 二氧化碳培養箱、 ST16R 冷凍離心機、 NanoDrop2000 超微量分光光度計 （美國Thermo Fisher Scientific 公司）；TS-200 小鼠懸尾測試儀 （成都泰盟科技有限公司）； FV1200 激光共聚焦顯微鏡（日本Olympus公 司）； iCycler iOMulticolor Real-Time PCR Dectection System （美國Bio-Rad 公司）。

2 方法

2.1 逍遙散對脂多糖致炎性抑郁樣小鼠的影響 取C57BL／6 J 小鼠， 適應性飼養3 d 后按體質量分層隨機分為空白組、 模型組、 氟西汀組（3.03 mg／kg） 及 逍 遙 散 低、 高 劑 量 組 （15、30 g／kg）， 以0.02 mL／g 劑量連續灌胃給藥12 d，每天1 次， 空白組、 模型組給予等體積蒸餾水， 第11 天除空白組外， 其余各組小鼠腹腔注射脂多糖（1 mg／kg） 造模， 共2 次， 每次間隔30 min， 空白組小鼠腹腔注射等量生理鹽水[2］。 造模后， 所有小鼠于24 h 內完成行為學測試， 分批進行懸尾實驗和強迫游泳實驗， 完成行為學實驗后小鼠取血分離血清， ELISA 法檢測血清IL-6、 TNF-α 水平， 再剖取大腦皮層和海馬組織， 4%多聚甲醛固定后制切片， 尼氏染色法觀察海馬神經元尼氏小體數，Image-Pro plus 圖像分析軟件測定海馬CA3 區尼氏小體（×400） 表達平均光密度； 另取1 批大腦皮層和海馬組織， PBS 緩沖液制備0.1 g／mL 組織勻漿， 離心， 收集上清液， ELISA 法檢測IL-6、 TNFα、 5-HT、 IDO 水平。

2.2 逍遙散含藥血清對脂多糖致海馬神經元細胞炎癥模型的影響

2.2.1 海馬神經元細胞鑒定 將新生24 h 的SD乳鼠頸椎脫臼處死， 75%酒精消毒后置于盛有PBS液的平皿內， 剪開頭部皮膚， 迅速剝離海馬并置于冰冷PBS 液中， 移至盛有少量Hanks 液的小瓶中，眼科剪將組織剪成糜狀， 加入0.25% 胰蛋白酶，37 ℃下消化25 min， 棄上清后用PBS 洗2 次， 每次5 min， 棄上清， 用含10%胎牛血清的DMEM 培養基終止消化， 反復吹打制成細胞懸液， 過150 目網篩， 收集細胞濾液， 離心（1 100 r／min、 4 ℃）5 min， 棄上清液， 加入適量含10% 胎牛血清的DMEM 培養基重懸細胞。 然后， 血球計數板計數細胞， 調節細胞密度5×105／mL， 接種神經細胞懸液于預先用poly-L-lysine 包被的48 孔培養板內，每孔350 μL， 37 ℃、 5% CO2培養箱中培養24 h后， 全量更換為含2% B-27、 1% L-谷氨酰胺的Neurobasal-A 培養液， 以后每3 d 半量換液。 再觀察海馬神經元生長形態[3］， 并將培養12 d 的海馬神經細胞用NeuN （1 ∶50 稀釋） 一抗和Cy3 （1 ∶100 稀釋） 二抗孵育， 1 μg／mL DAPI 染核， 激光共聚焦顯微鏡下觀察鑒定神經元。

2.2.2 含藥血清對脂多糖致海馬神經元細胞損傷模型炎癥和色氨酸代謝通路的影響 按“2.2.1”項下方法體外培養大鼠海馬神經元細胞， 細胞在第7～10 天進入對數生長期， 將細胞隨機分為空白組、 模型組、 氟西汀組 （10 μmol／L） 及空白血清、 含藥血清低、 高劑量組（4%、 8%）， 培養至第10 天， 將含5 μg／mL 脂多糖的培養基加入除空白組以外的各組培養孔中造模， 空白組加入不含B-27 的Neurobasal-A 培養基， 每孔350 μL。 24 h后， 各組細胞給予含氟西汀（10 μmol／L）、 空白血清 （4%、 8%）、 含藥血清 （4%、 8%）， 不含B-27 的Neurobasal-A 培養液， 空白組、 模型組均加入不含B-27 的Neurobasal-A 培養液， 每孔350 μL， 培養至第13 天， 收集上清， 檢測NO、IL-6、 TNF-α 水平； 收集裂解液， ELISA 法檢測5-HT、 IDO 水平； 提取各組海馬神經元細胞總RNA，實時熒光定量PCR 法測定IL-6、 TNF-α、 5-HT1A、IDO1 mRNA 表達， 所有引物由英濰捷基（上海）貿易有限公司設計合成， 引物序列見表1。

表1 引物序列Tab.1 Primer sequences

2.3 統計學分析 通過SPSS 21.0 軟件進行處理，數據以s） 表示， 符合正態分布者， 采用單因素方差分析或獨立樣本t 檢驗； 不符合者， 采用非參數秩和檢驗。 以P＜0.05 為差異有統計學意義。

3 結果

3.1 逍遙散對不動時間的影響 表2 顯示， 與空白組比較， 模型組小鼠2 個實驗中不動時間顯著延長（P＜0.05， P＜0.01）； 與模型組比較， 逍遙散高劑量組2 個實驗中不動時間顯著縮短 （P ＜0.01）， 低劑量組強迫游泳實驗中不動時間顯著縮短（P＜0.01）。

表2 逍遙散對不動時間的影響s， n=6～7）Tab.2 Effect of Xiaoyao Powder on immobility time s， n=6-7）

表2 逍遙散對不動時間的影響s， n=6～7）Tab.2 Effect of Xiaoyao Powder on immobility time s， n=6-7）

注：與空白組比較，#P ＜0.05，##P ＜0.01；與模型組比較，?P ＜0.05，??P＜0.01

空白組 — 178.24±6.82 121.55±13.92模型組 — 213.13±8.51## 141.97±12.17#氟西汀組 3.03 mg／kg 124.80±46.58?? 124.07±9.33?逍遙散組 15 196.69±19.29 98.48±17.27??逍遙散組 30 171.15±4.16?? 74.18±19.44??

3.2 逍遙散對IL-6、 TNF-α 水平的影響 表3 顯示， 與空白組比較， 模型組血清、 皮層IL-6、 TNF-α 水平及海馬IL-6 水平顯著升高（P ＜0.05， P ＜0.01）； 與模型組比較， 逍遙散組血清IL-6 水平顯著降低（P＜0.05）， 皮層TNF-α、 IL-6 水平顯著下調（P＜0.05， P＜0.01）， 并且低劑量組海馬IL-6水平顯著降低（P＜0.05）。

3.3 逍遙散對5-HT、 IDO 水平的影響 表4 顯示， 與空白組比較， 模型組海馬、 皮層5-HT 水平顯著降低（P＜0.05， P＜0.01）， 皮層IDO 水平顯著升高（P＜0.05）； 與模型組比較， 逍遙散組海馬5-HT 水平顯著上調， 皮層IDO 水平顯著下調（P＜0.05， P＜0.01）， 并且高劑量組皮層5-HT 水平顯著上調（P＜0.01）。

表3 逍遙散對IL-6、 TNF-α 水平的影響 n=4～6）Tab.3 Effects of Xiaoyao Powder on IL-6 and TNF-α levels n=4-6）

表3 逍遙散對IL-6、 TNF-α 水平的影響 n=4～6）Tab.3 Effects of Xiaoyao Powder on IL-6 and TNF-α levels n=4-6）

注：與空白組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組比較，?P＜0.05，??P＜0.01

組別 劑量／（g·kg-1）皮層IL-6／（pg·mL-1） TNF-α／（pg·mL-1） IL-6／（ng·g-1） TNF-α／（ng·g-1） IL-6／（ng·g-1） TNF-α／（ng·g-1）血清海馬空白組 — 38.73±10.10 81.31±2.13 0.79±0.10 1.07±0.16 0.57±0.07 0.64±0.18模型組 — 82.23±29.99# 91.84±9.60# 1.00±0.16# 1.14±0.22 1.11±0.19## 1.12±0.15#氟西汀組3.03 mg／kg 39.65±1.95? 84.16±2.30 0.80±0.27 1.02±0.15 0.78±0.09?? 0.74±0.09?逍遙散組 15 48.54±14.14? 88.48±5.30 0.74±0.17? 0.99±0.18 0.65±0.13?? 0.62±0.07?逍遙散組 30 48.41±14.22? 90.15±0.22 0.75±0.34 1.32±0.39 0.59±0.21?? 0.64±0.02?

表4 逍遙散對5-HT、 IDO 水平的影響， n=5）Tab.4 Effects of Xiaoyao Powder on 5-HT and IDO levels ， n=5）

表4 逍遙散對5-HT、 IDO 水平的影響， n=5）Tab.4 Effects of Xiaoyao Powder on 5-HT and IDO levels ， n=5）

注：與空白組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組比較，?P＜0.05，??P＜0.01

空白組 — 708.46±218.79 85.15±20.93 627.02±53.56 63.46±41.28模型組 — 412.67±98.44# 142.52±58.81 353.97±32.86## 127.06±30.13#氟西汀組 3.03 mg／kg 688.66±56.07?? 120.58±42.74 616.72±135.61?? 57.93±35.28?逍遙散組 15 671.32±69.07?? 138.55±54.53 366.62±23.98 86.51±17.25?逍遙散組 30 742.88±105.51?? 126.23±56.25 653.29±132.60?? 65.57±43.17?

3.4 逍遙散對尼氏小體的影響 表5、 圖1 顯示，與空白組比較， 模型組小鼠海馬神經元損傷， 排列不規則， 分層不清楚， 尼氏小體數減少， 呈較明顯空泡狀， 平均光密度顯著降低（P＜0.01）； 與模型組比較， 逍遙散高劑量組平均光密度顯著增加（P＜0.05）。

表5 逍遙散對尼氏小體的影響±s， n=6）Tab.5 Effect of Xiaoyao Powder on Nissl bodies n=6）

表5 逍遙散對尼氏小體的影響±s， n=6）Tab.5 Effect of Xiaoyao Powder on Nissl bodies n=6）

注：與空白組比較，##P＜0.01；與模型組比較，?P＜0.05，??P＜0.01

組別 劑量／（g·kg-1） 平均光密度空白組 — 48.14±5.03模型組 — 28.69±3.40##氟西汀組 3.03 mg／kg 39.37±4.96??逍遙散組 15 31.48±2.34逍遙散組 30 33.03±7.90?

3.5 大鼠原代海馬神經元細胞體外生長形態觀察及鑒定 海馬神經元細胞接種24 h 后， 其中有很多神經膠質細胞， 其胞體較小， 數量較少， 再進行全量更換為Neurobasal-A 培養液培養24 h 后， 神經膠質細胞數量減少， 海馬神經元細胞數目增多，而且胞體飽滿。 隨著培養時間延長， 神經元細胞純度更高， 長出神經突觸， 并呈現聚團生長， 胞體飽滿， 有光澤， 細胞生長到第10 天時細胞聚集成團，神經突觸明顯增長。

NeuN 是神經元特異標記物， 神經元細胞可被NeuN-Cy3 標記為紅色。 圖2 顯示， 經NeuN、 DAPI雙染色后， 培養12 d 的細胞紅色、 藍色熒光分布基本重合， 表明所培養細胞為成熟神經元細胞， 純度可達95%以上。

圖1 逍遙散對尼氏小體的影響（×400）Fig.1 Effect of Xiaoyao Powder on Nissl bodies （×400）

3.6 含藥血清對NO、 IL-6、 TNF-α水平的影響 表6 顯示， 與空白組比較， 模型組NO、 IL-6、 TNF-α 水平顯著升高 （P ＜0.01）； 與模型組比較， 含藥血清高劑量組三者水平顯著下調（P＜0.01）。

圖2 大鼠原代海馬神經元細胞鑒定Fig.2 Identification of primary hippocampalneuron cells in rats

表6 含藥血清對NO、 IL-6、 TNF-α 水平的影響=4～6）Tab.6 Effects of medicated serum on NO， IL-6 and TNF-α levels=4-6）

表6 含藥血清對NO、 IL-6、 TNF-α 水平的影響=4～6）Tab.6 Effects of medicated serum on NO， IL-6 and TNF-α levels=4-6）

注：與空白組比較，##P＜0.01；與模型組比較，??P＜0.01；與空白血清高劑量組比較，△P＜0.05

空白組 — 1.27±0.08 223.45±19.71 18.86±1.70模型組 — 13.74±0.70## 1 671.91±30.74## 40.47±2.62##氟西汀組 10 μmol／L 7.60±1.15?? 268.01±19.58?? 38.36±4.97空白血清組 4 10.04±1.63 1 407.85±173.19 38.65±2.77含藥血清組 4 11.55±1.97 1 635.90±69.67 36.14±7.45空白血清組 8 10.63±2.35 1 641.56±9.92 39.26±6.72含藥血清組 8 8.73±1.31?? 1 312.48±113.83??△ 28.20±7.89??△

3.7 含藥血清對5-HT、 IDO 水平的影響 表7 顯示， 與空白組比較， 模型組5-HT 水平顯著降低（P＜0.05）， IDO 表達顯著增加（P＜0.01）； 與模型組比較， 含藥血清高劑量組5-HT 水平顯著上調， IDO 水平顯著下調（P＜0.01）， 低劑量組IDO水平顯著下調（P＜0.01）。

3.8 含藥血清對IL-6、 TNF-α mRNA 表達的影響 表8 顯 示， 與 空 白 組 比 較， 模 型 組IL-6、TNF-α mRNA 表達顯著增加（P＜0.05， P＜0.01）；與模型組比較， 含藥血清組兩者mRNA 表達顯著下調（P＜0.05， P＜0.01）。

表7 含藥血清對5-HT、 IDO 水平的影響（x±s， n=5～6）Tab.7 Effects of medicated serum on 5-HT and IDO levels±s， n=5-6）

表7 含藥血清對5-HT、 IDO 水平的影響（x±s， n=5～6）Tab.7 Effects of medicated serum on 5-HT and IDO levels±s， n=5-6）

注：與空白組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組比較，??P＜0.01；與空白血清低劑量組比較，▲P＜0.05；與空白血清高劑量組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01

空白組 — 51.66±16.17 1.22±0.21模型組 — 29.77±11.41# 1.65±0.16##氟西汀組 10 μmol／L 57.95±13.24?? 0.79±0.18??空白血清組 4 29.52±5.37 2.04±0.64含藥血清組 4 43.77±14.92 1.12±0.14??▲空白血清組 8 20.21±4.88 2.13±0.66含藥血清組 8 74.82±8.51??△△ 1.25±0.09??△

表8 含藥血清對IL-6、 TNF-α mRNA 表達的影響，n=4～5）Tab.8 Effects of medicated serum on IL-6 and TNF-α mRNA expressions s， n=4-5）

表8 含藥血清對IL-6、 TNF-α mRNA 表達的影響，n=4～5）Tab.8 Effects of medicated serum on IL-6 and TNF-α mRNA expressions s， n=4-5）

注：與空白組比較，#P ＜0.05，##P ＜0.01；與模型組比較，?P ＜0.05，??P＜0.01；與空白血清低劑量組比較，▲▲P＜0.01；與空白血清高劑量組比較，△P＜0.01， △P＜0.05

空白組 — 1.04±0.40 1.20±0.38模型組 — 7.49±1.09## 9.73±2.01#氟西汀組 10 μmol／L 4.43±0.92?? 4.08±1.09空白血清組 4 5.87±1.10 7.17±0.42含藥血清組 4 1.52±0.18??▲▲ 0.86±0.30?▲▲空白血清組 8 6.09±0.58 7.06±0.76含藥血清組 8 2.15±0.14??△△ 1.07±0.03?△

3.9 含藥血清對5-HT1A、 IDO1 mRNA 表達的影響 表9 顯示， 與空白組比較， 模型組5-HT1A mRNA 表達顯著降低（P＜0.01）， IDO1 mRNA 表達顯著升高（P＜0.01）； 與模型組比較， 含藥血清組5-HT1A mRNA 水平顯著上調（P＜0.01）， IDO1 mRNA 水平顯著下調（P＜0.01）。

表9 含藥血清對5-HT1A、 IDO1 mRNA 表達的影響（x±s， n=4～5）Tab.9 Effects of medicated serum on 5-HT1A and IDO1 mRNA expressionss， n=4-5）

表9 含藥血清對5-HT1A、 IDO1 mRNA 表達的影響（x±s， n=4～5）Tab.9 Effects of medicated serum on 5-HT1A and IDO1 mRNA expressionss， n=4-5）

注：與空白組比較，##P＜0.01；與模型組比較，??P＜0.01；與空白血清低劑量組比較，▲▲P ＜0.01；與空白血清高劑量組比較，△P ＜0.01，△P＜0.05

空白組 — 1.04±0.01 0.87±0.39模型組 — 0.34±0.05## 2.17±0.19##氟西汀組 10 μmol／L 0.76±0.05?? 0.99±0.30??空白血清組 4 0.35±0.03 1.92±0.17含藥血清組 4 0.57±0.09??▲▲ 0.74±0.23??▲▲空白血清組 8 0.31±0.03 1.82±0.34含藥血清組 8 0.67±0.13??△△ 1.07±0.42??△

4 討論

炎癥反應參與了抑郁癥的發生發展過程， 細胞因子水平異常與神經精神綜合征發生存在必然聯系[4］， 炎性細胞因子會通過影響大腦神經傳遞和可塑性來觸發氧化應激， 抑制成年神經發生等途徑。 從而誘發抑郁癥[5］。 脂多糖刺激機體誘導產生的炎性細胞因子能激活吲哚胺2， 3-雙加氧酶（IDO）， 它是一種能由IL-6、 IFN -α、 IFN -γ、 TNFα 中1 種或幾種結合的細胞因子激活若干炎癥信號通路激活的酶， 可導致色氨酸（TRP） 更多地代謝為犬尿氨酸（KYN）， 進而引起神經毒性產物的增加， 抑制海馬神經元的可塑性[6-7］， 同時被色氨酸羥化酶 （TrpH） 和1-芳香族氨基酸脫羧酶 （LAADC） 代謝成5-HT 的色氨酸減少， 導致后者合成水平下降， 并引起強迫游泳不動時間延長、 飛濺測試梳洗時間減少等抑郁樣行為， 給予細胞因子抑制劑米諾環素后能間接阻斷IDO 激活， 表現出阻止抑郁癥的發展[8］。 Corona 等[9］報道， LPS 誘導的IDO 激活會導致趨化因子受體缺陷小鼠（CX3CR1-／-小鼠） 產生抑郁樣行為， 小膠質細胞激活和腦內5-HIAA／5-HT 比率增加， 給予IDO 抑制劑1-MT 后可緩解該狀況。 另外， 非甾體抗炎藥物阿司匹林也能在通過下調細胞因子（IL-6、 TNFα） 釋放來減輕炎性反應的同時， 縮短SD 大鼠強迫游泳的不動時間從而緩解抑郁樣行為[10］。

逍遙散具有良好的抗抑郁作用， 方中君藥柴胡有效成分柴胡皂苷抗炎作用明顯[11］， 其機制與抑制炎 癥 介 質 （IL-1、 IL-6、 TNF-α 等） 釋 放 有關[12］； 臣藥當歸、 白芍均具有抗炎作用， 前者所含阿魏酸能提高吞噬細胞功能， 抑制IL-1β、 JNK信號通路來發揮神經保護作用， 而后者所含芍藥苷、 牡丹酚等可抑制IL-6、 TNF-α 等炎性因子分泌； 佐藥白術、 茯苓、 生姜[13］、 薄荷[14］， 以及使藥甘草[15］均可通過抑制炎癥因子釋放來發揮抗炎作用， 有效成分包括白術內酯、 茯苓多糖、 姜黃素、 薄荷酮、 甘草黃酮等。 課題組前期采用二甲苯致小鼠耳腫脹實驗及醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性增高實驗， 也發現逍遙散具有一定抗炎作用， 顯示出其處方藥物抗炎作用的整合表現。

本實驗結果顯示， 脂多糖刺激可引起小鼠出現懸尾、 強迫游泳不動時間延長等抑郁樣行為， 而且小鼠血清、 皮質、 海馬中IL-6、 TNF-α 水平明顯升高， 提示抑郁樣行為與IL-6、 TNF-α 水平升高存在一定相關性； 它也可誘導小鼠皮層、 海馬中IDO水平上調， 5-HT 水平下降， 海馬CA3 區錐體細胞形態不規則， 細胞間隙增大， 排列不齊， 甚至尼氏小體消失， 提示該模型小鼠抑郁樣行為發生與炎性反應有關； 體內實驗顯示， 逍遙散能縮短模型小鼠強迫游泳實驗、 懸尾實驗中不動時間， 降低外周及中樞皮層、 海馬IL-6、 TNF-α、 IDO 水平， 提高5-HT 水平； 體外實驗顯示， 含藥血清可對抗脂多糖誘導的海馬神經細胞炎性因子異常釋放及其mRNA表達， 并提高模型細胞5-HT 分泌水平及5-HT1A mRNA 的表達。

綜上所述， 逍遙散對脂多糖誘導的神經炎癥抑郁樣模型有對抗作用， 其機制可能與直接上調5-HT 水平及其受體功能， 或通過阻斷炎性因子誘導的IDO 激活途徑來抑制TRP-KYN 代謝途徑， 促使更多TRP 向5-HT 轉化， 并同時降低KYN 及其下游神經元毒性代謝物的產生， 或保護神經元、 促神經元增殖分化有關。 同時也進一步表明， 逍遙散的抗抑郁作用是多途徑、 多靶點模式。