鼻咽癌中MACC-1 的表達與臨床病理特征和預后間的關系

韋妹艷 陳輝 段智 許奇美 汪砥

鼻咽癌（Nasopharyngeal carcinoma，NPC）是最常見的頭頸部惡性腫瘤之一，并且我國是世界上鼻咽癌發病率最高的國家[1]，據一項流行病學調查研究[2]顯示，世界其他國家和地區鼻咽癌的發病率不到1/10萬，而我國南方幾個省份鼻咽癌的發病率高達30/10 萬；據不完全統計世界上大約80%鼻咽癌發生于中國[3]。鼻咽癌的早期癥狀不典型，可表現為涕中帶血、單側的耳鳴、耳閉塞感、聽力下降或頭痛等不典型癥狀[4]；正是由于鼻咽部解剖結構的復雜性及臨床癥狀的不典型性，使得鼻咽癌的早期臨床診斷比較困難，甚至需要進行反復活檢才能夠確診，且確診時大多已發生頸部淋巴結的轉移[5]。而目前公認的鼻咽癌治療的首選方案為放射治療[6]，盡管近幾年放化療技術不斷成熟，但是鼻咽癌治療后的總生存率仍保持在50%左右，局部復發和遠處轉移是治療失敗的最終原因[7]。目前關于鼻咽癌局部浸潤和轉移機制的研究尚不明確，因此，探究與鼻咽癌局部浸潤、轉移及復發有關的生物學指標顯得尤為重要。結腸癌轉移相關基因（Metastasis-associated in colon cancer-1，MACC-1）是于2009年對人類結腸癌組織、轉移腫瘤組織及人體正常組織進行全面掃描時發現的一個新的基因[8]，并且已有研究[9]證實MACC-1基因在結腸癌、肝癌、食管癌中高表達，并與腫瘤的浸潤、局部復發及遠處轉移相關，且其高表達與生存期存在一定關系。本研究采用免疫組化法測定結腸癌轉移相關基因（MACC-1）在NPC腫瘤組織中的表達，探討其與鼻咽癌腫瘤的病理學特征及預后的關系。

1 材料與方法

1.1 一般資料選取我院2006年1月～2012年12月間確診并放化療的初治鼻咽癌患者標本90 例及同期送檢的慢性炎癥鼻咽黏膜組織標本75例，分別為鼻咽癌組和慢性炎癥組，所有患者均經病理學檢查確診，并具有完整的住院病歷資料。鼻咽癌組中男54 例，女36 例，年齡28～74 歲，平均（52.4±13.8）歲，慢性炎癥組中男40例，女35例，年齡27～78歲，平均（53.8±15.4）歲。兩組患者在年齡、性別比例等方面比較，差異無統計學意義，具有可比性。

鼻咽癌組患者病理診斷符合《中國常見惡性腫瘤診治規范》中的關于鼻咽癌的診斷標準[10]，且于我院接受放化療的初治患者，病史資料詳細，無嚴重的心腦血管疾病及其他系統腫瘤病史?；颊呷朐航邮苤委熐靶醒Ｒ帯⒛虺Ｒ?、肝腎功能、鼻咽部MR、頭顱及胸部CT、腹部B 超及骨掃描檢查，而鼻咽癌的TNM分期采用1992年制定的福州分期標準[11]。鼻咽癌組中患者的病理組織學檢查結果：低分化鱗癌84 例，未分化鱗癌5 例，腺癌1 例；TN 分期中T1～T237 例，T3～T453 例，N034 例，N1～N356 例；臨床分期Ⅰ～Ⅱ14 例，Ⅲ～Ⅳ76 例；治療方式：單純放療患者21 例，同步放化療患者69 例；三維調強放療患者34 例，二維常規放療患者56 例；鼻咽癌組患者隨訪采用門診隨訪和電話隨訪，隨訪頻率為放療后2年內每季度1 次，2～5年內每半年1 次，5年以上每年隨訪1 次，隨訪內容主要包括鼻咽部MR、頭顱和胸部CT、腹部B超及骨掃描。

1.2 免疫組化S-P 法鼻咽癌組及慢性炎癥組標本在取材后首先使用10%中性甲醛固定，隨后脫水和石蠟包埋，以厚度為4μm 進行切片，之后進行MACC-1（結腸癌轉移相關基因）染色。具體步驟：切片在60℃烤箱內過夜后進行脫蠟水化，隨后使用3%的過氧化氫室溫孵育，蒸餾水沖洗，PBS 沖洗3次，之后滴山羊血清封閉液，不洗，直接滴加兔抗人MACC-1多克隆抗體，37℃孵育60～90min，PBS漂洗3次，滴加生物素標記的二抗，37℃孵育，PBS漂洗后滴加S-P試劑，37℃孵育，PBS漂洗后，DAB顯色，蘇木素復染，封片，鏡檢。結果判定：采用半定量法對MACC-1的染色結果進行判定：①染色強度的計分：0 分為不染色，1 分為淺黃色，2 分為黃色，3 分為棕黃色；②染色細胞評分：取10個高倍鏡視野（×400），每個高倍鏡視野中隨機選擇100 個細胞，總計1000個細胞，計算染色細胞的比例，0分為染色細胞比例＜5%，1 分為5%～25%，2 分為25%～50%，3 分為50%～75%，4 分為＞75%；免疫組化評分=染色強度計分×染色細胞評分，0 分為（-），1～3 分為（+），4～6分為（++），＞6 分為（+++），（-）為陰性，（+）、（++）、（+++）為陽性。

1.3 統計學方法使用Excel 建立數據庫，將數據庫導入SPSS 13.0軟件進行統計學分析，計量資料使用均數±標準差（±s）表示，計數資料使用頻數表示，計量資料比較采用t檢驗，率的比較采用χ2檢驗，有序等級資料采用秩和檢驗，單因素生存分析采用K-M檢驗，多因素生存分析采用COX多因素分析，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 MACC-1 的表達情況鼻咽癌組與慢性炎癥組患者MACC-1免疫組化評分分別為（6.25±1.43）分、（2.13±0.67）分，差異有統計學意義（P＜0.05）；鼻咽癌組與慢性炎癥組患者MACC-1的陽性表達率分別為70.0%、45.3%，鼻咽癌組MACC-1的陽性率顯著高于慢性炎癥組，經有序資料秩和檢驗結果顯示，兩組間比較差異具有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組MACC-1的表達情況

2.2 MACC-1 的表達與臨床特征及病理特征關系將MACC-1 的表達情況與臨床及病理組織學特征間關系進行統計學分析顯示，鼻咽癌組中MACC-1的表達與年齡沒有相關性，在不同年齡間表達的陽性率差異不具有統計學意義（P＞0.05）；MACC-1 的表達與性別無相關性，不同性別之間MACC-1表達陽性率的差異不具有統計學意義（P＞0.05）；MACC-1的表達與T分期、N分期及臨床分期有相關性，T3～T4期患者的MACC-1表達的陽性率高于T1～T2期患者，差異具有統計學意義（P＜0.05）；N1～3期患者MACC-1表達的陽性率高于N0期患者，差異具有統計學意義（P＜0.05）；臨床分期中Ⅲ～Ⅳ期患者MACC-1陽性率顯著高于Ⅰ～Ⅱ期患者，差異具有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 MACC-1與鼻咽癌臨床及病理特征關系[n（%）]

2.3 MACC-1 表達情況與患者預后的關系入選鼻咽癌患者隨訪由首次放療結束時開始，至2016年6月隨訪結束，隨訪時間43～107 個月，平均（72.3±12.7）個月，失訪1 例。截至隨訪結束時，總計有15例患者復發，復發部位7例為鼻咽部，5例為顱底復發，3 例為淋巴結復發；37 例患者死亡，均為鼻咽癌的復發或遠處轉移；隨訪結束時，MACC-1表達陽性患者的總生存率為50.8%，MACC-1 表達陰性患者的總生存率為77.8%，經Log-Rank 檢驗顯示，MACC-1表達陽性患者生存率低于MACC-1表達陰性患者，差異具有統計學意義（χ2=8.094，P＜0.05）。生存曲線見圖1。

3 討論

圖1 生存曲線

我國是全世界范圍內鼻咽癌發病率最高的國家之一，據不完全統計我國南方省份中鼻咽癌的患者占到世界范圍內的80%左右，同時鼻咽癌作為耳鼻喉科最常見的惡性腫瘤，選擇合理的治療方式一直是臨床中需要解決的問題。由于鼻咽部隱窩解剖位置隱蔽、鼻咽部周圍重要的血管神經、豐富的淋巴結構等原因，不僅給手術治療鼻咽癌帶來了困難，同時導致鼻咽癌極易發生遠處轉移[12]；鼻咽癌早期的臨床表現不具有特異性，鼻咽癌患者確診時大多已到達中晚期甚至發生遠處轉移，為有效的治療帶來了困難[13]。鼻咽癌最為常見的病理組織學類型為低分化型鱗癌，其對放療較為敏感[14]，且目前放療已經成為治療鼻咽癌常規同時也是較為有效的方式，隨著三維放療、調強放療等放療方式的不斷進步成熟，鼻咽癌的治療也逐漸規范[15]，然而目前鼻咽癌患者的病死率仍較高。鼻咽癌放射治療失敗的主要原因為局部復發和遠處轉移。MACC-1基因最早是于人類結腸癌腫瘤組織、轉移瘤及正常組織的掃描中所發現的新基因，后來發現其不僅在結腸癌組織中常見，而且參與包括食管癌、肝癌、腎癌等多種腫瘤的發生發展過程[16]。有研究[17]顯示，MACC-1在結腸癌腫瘤組織中表達水平最高，提示其與結腸癌的發生發展相關，同時可以此為靶點作為靶向治療的突破。此外有報道[18]顯示，MACC-1在肝癌、食管癌中的表達顯著高于其他人體正常組織中的表達水平，其與腫瘤的淋巴結轉移及高TNM分期密切相關，同時有研究[19]證實，MACC-1高表達的食管癌患者的5年生存率明顯低于MACC-1 低表達的患者，且將食管癌中MACC-1表達情況作為提示患者預后的指標。一項有關鼻咽癌的研究[20]顯示，MACC-1 高表達通過促進Akt（Serr473）和β-catenin的表達來促進腫瘤細胞的增殖、侵襲和轉移，提示高表達MACC-1預示鼻咽癌患者的不良預后，可考慮將靶向MACC-1 作為治療鼻咽癌的新的治療方向。但目前對于MACC-1 與信號轉導之間關系的研究較少，對MACC-1的信號轉導及調控途徑的研究有利于以MACC 作為靶點的基因治療。本研究中，通過免疫組化S-P 法對比鼻咽癌組和慢性炎癥組中MACC-1的表達情況發現，鼻咽癌組的MACC-1顯著高于慢性炎癥組，與文獻報道相符；同時對鼻咽癌患者TN 分期、臨床分期的MACC-1 的表達分析發現，高表達的MACC-1與高TN 分期、高臨床分期顯著相關，且MACC-1陽性患者的總生存率要顯著低于陰性患者，此與其他腫瘤中關于MACC-1的生存研究相符合。

綜上所述，鼻咽癌組織中MACC-1 的表達情況可作為判定鼻咽癌患者預后的一個獨立指標，且積極研究MACC-1 基因的信號轉導及調控方式有助于發現新的鼻咽癌的靶向治療方式。