整合素-β3與雌、孕激素受體在子宮腺肌病中的表達及臨床意義

賀凌云 朱煒 羅君玲

子宮腺肌病廣義上是指子宮內膜的腺體及部分間質侵入子宮肌層，進行性生長，合并出血，致子宮肌層局部或廣泛增大的一種預后良好的疾病，臨床表現為經量持續增多、經期延長和或繼發性、進行性加劇的痛經，痛經率甚至高達64.8%～77.8%[1]。其具有粘附、侵襲及轉移等類似于惡性腫瘤的生物學特性。目前該病發病率呈上升趨勢，但發生原因與機制并不十分清楚。本研究擬探討整合素-β3及ER、PR在子宮腺肌病中的表達并分析其意義。

1 材料與方法

1.1 研究對象選取我科2013年6月～2014年12月因子宮腺肌病行子宮切除或腺肌病病灶切除的患者46 例，年齡42～47 歲，平均（44.58±3.82）歲；另選取同時期宮頸CINⅢ及宮頸原位癌全子宮切除后宮體部獲取的正常子宮組織的患者20 例，年齡44～49歲，平均（46.55±2.86）歲。病理診斷均為我院兩名副主任醫師以上醫生診斷。全部研究對象的病理及臨床資料完整，術前6 個月內未使用過甾體類藥物。該研究經倫理學委員會批準，患者知情同意。

1.2 研究方法

1.2.1 標本收集及處理 子宮腺肌病患者在子宮切除及腺肌病病灶切除后隨即切取病灶組織1cm×1cm×1cm 大??；宮頸CINⅢ及宮頸原位癌患者在子宮切除后，在宮體部切取1cm×1cm×1cm大小的正常子宮肌層組織。取材后立即放入4%中性甲醛中固定72h 后脫水包埋，每一個組織塊均先進行HE 染色，進行篩選，明確診斷后進行免疫組化染色，分別用于檢測整合素-β3及ER、PR的表達。

1.2.2 免疫組織化學染色 采用鏈菌素親生物素-過氧化物酶法（streptavidin peroxidase，SP 法）檢測標本中整合素-β3及ER、PR的表達。鼠抗人整合素-β3單克隆抗體及兔抗人ER、PR單克隆抗體均購自福州邁新生物技術有限公司。以PBS 液代替一抗做陰性對照。具體操作步驟嚴格按照說明書進行。

1.3 結果判定整合素-β3 的陽性表達呈現黃色及棕黃色顆粒，在腺肌病病灶中主要定位于腺上皮細胞及間質細胞的胞漿中；而正常子宮肌層中主要表達于間質細胞的胞漿中，肌細胞中較少表達。ER及PR的陽性表達呈現棕黃色顆粒，在腺肌病病灶中主要定位于腺上皮細胞及間質細胞核中；在正常子宮肌層中僅間質細胞中表達。

應用Leica QW550 圖像分析系統并采用陽性單位（positive unit，PU）對免疫組化染色的標本進行量化分析。在排除切片底色因素后，按灰度值將純免疫組化反應的程度分為0～255 個等級，共計256個等級，每一個等級即為一個PU。PU 值的大小與陽性反應程度成正比[2]。

1.4 統計學方法采用SPSS 統計軟件對數據進行處理。整合素-β3、ER 及PR 陽性表達的PU 值采用均數±標準差（±s）表示，兩組間比較采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

在子宮腺肌病病灶及正常子宮肌層中整合素-β3 及ER、PR 均呈現陽性表達，表現為黃色或棕黃色顆粒，其中，整合素-β3主要在腺肌病病灶中的上皮及間質細胞漿中，肌組織少見。但是，正常子宮肌層中表達于間質細胞胞漿，肌組織細胞中較少表達。ER及PR在腺肌病病灶中主要定位于腺上皮細胞及間質細胞核中，在正常子宮肌層中僅間質細胞中表達。

應用Leica QW550 圖像分析系統并采用陽性單位（positive unit，PU）對免疫組化染色的標本進行量化分析，結果顯示各部位表達的PU值不一致，見表1。整合素-β3、ER、PR與正常子宮肌層中表達均可見差異有統計學意義（P＜0.05）。

表1 整合素-β3及ER、PR在子宮腺肌病病灶及正常子宮肌層中的表達（±s）

表1 整合素-β3及ER、PR在子宮腺肌病病灶及正常子宮肌層中的表達（±s）

組織子宮腺肌病病灶正常子宮肌層P整合素-β3 13.58±4.08 19.80±8.54＜0.05 ER 32.62±5.37 27.93±4.96＜0.05 PR 30.98±4.94 37.46±8.50＜0.05

3 討論

子宮腺肌病（adenomyosis）是子宮內膜腺體及間質組織侵入子宮肌層并在其中粘附、種植、浸潤同時伴隨新生血管的增生最終呈現彌漫性生長的一種疾病，其組織學形態表現為良性，但卻具有惡性腫瘤的生物學特性。然而，有關子宮腺肌病發生的原因與機制仍不十分清楚。子宮肌層內的各種細胞因子、免疫因子、激素及其受體、酶及酶的抑制劑等，對其發生與發展均起著重要作用。有學者通過聲脈沖輻射力成像技術診斷子宮腺肌病，認為超聲聲脈沖輻射力成像技術能實時敏感檢測子宮腺肌病，可重復性好，同時能體現子宮腺肌病肌層病變隨月經周期性的改變，有望成為子宮腺肌病診斷手段之一[3]。當前，對于該病的治療包括曼月樂（左炔諾孕酮宮內緩釋系統）、病灶切除、高強度聚焦超聲刀治療、腹腔鏡輔助下陰式子宮全切術、LNG-IUS 治療、芳香烴酶抑制劑、子宮動脈栓塞等治療方法[4～12]，但對于其與整合素之間的關系的研究較少，有學者認為子宮動脈栓塞治療該病痛經的有效率為77.2%[13]，同時，高強度聚焦超聲消融治療能改善有生育要求的子宮腺肌病患者的臨床癥狀，且不增加妊娠及分娩時并發癥的發生率[14]，聯合GnRH-a和（或）LNG-IUS能提高高強度聚焦超聲消融治療子宮腺肌病的療效，降低復發率[15]。

子宮內膜腺體與間質脫離原來位置進入子宮肌層導致子宮腺肌病的發生，除內膜腺體與間質自身的因素，細胞外組織基質的異常對疾病的發生起著決定性的作用。在組織基質中存在著一種細胞因子即整合素。整合素是由α、β兩個亞單位以非共價鍵連接組成的異二聚體跨膜糖蛋白，屬于層粘連蛋白受體，存在于細胞表面，可粘附其他細胞和細胞外基質，它是細胞與細胞外基質間相互連接并傳遞多種生物學信號的通道，并在細胞粘附、生長、增殖與遷移中發揮重要作用[16]。當整合素合成不足或降解加速使其表達下降，即可影響其功能的有效發揮。本研究顯示，子宮腺肌病與正常子宮肌層中整合素-β3均呈現陽性表達，其PU值為13.85±4.08與19.80±8.54，兩組比較差異有統計學意義（P＜0.05），表明子宮腺肌病病灶中整合素-β3 的表達下調，其功能減弱并由此導致細胞外基質降解及重建失調，出現細胞外基質疏松，粘附能力降低，內膜細胞間的連接減弱，穩定性發生紊亂，導致腺肌病病灶擴散而加速疾病進一步發展。子宮腺肌病為一種進行性加重的疾病，此機制也符合子宮腺肌病的臨床特征。

子宮腺肌病是一種雌激素依賴性疾病，高水平雌激素是子宮腺肌病發生的重要危險因素[17]。雌激素可以使子宮內膜腺體與間質組織向肌層逆向生長，導致子宮腺肌病的發生，在此過程中雌激素需要通過與特異性的雌激素受體結合而發揮生物學效應[18]。孕激素作為一種維持子宮內膜周期性變化的重要激素，對子宮腺肌病的發生與發展起著重要作用，同樣孕激素也需要與孕激素受體結合才能發揮作用。當子宮內膜腺體異位進入子宮肌層后也同樣受到雌、孕激素的影響而產生相應的變化。本研究顯示，子宮腺肌病病灶及正常子宮肌層中雌激素受體表達的PU值為32.62±5.37與27.93±4.96（P＜0.05），表明子宮腺肌病病灶中雌激素受體的表達高于正常子宮肌層，而雌激素受體是反映雌激素調控狀態與效能的重要指標[19]。高水平的雌激素受體可以結合高水平的雌激素而發揮作用，當子宮內膜腺體進入肌層后，在這種高水平雌激素環境的影響下增生更加活躍，移動、種植與生長加速，從而促進子宮腺肌病的發展。而孕激素受體在子宮腺肌病病灶及正常子宮肌層中也呈現陽性表達，其PU 值為30.98±4.94與37.46±8.50（P＜0.05），表明在子宮腺肌病病灶中仍有較高水平的孕激素受體表達，提示異位進入肌層的內膜腺體也同樣受到孕激素的影響而產生相應的變化。異位的子宮內膜腺體在雌、孕激素的共同作用下依然出現增生、分泌并出血的改變，繼而加速子宮腺肌病的發展。同時，免疫組化分析結果也提示在子宮腺肌病病灶及正常子宮肌層中整合素-β3及ER、PR均呈現陽性表達，表現為黃色或棕黃色顆粒，其中，整合素-β3主要在腺肌病病灶中的上皮及間質細胞漿中，肌組織少見。但是，正常子宮肌層中表達于間質細胞胞漿，肌組織細胞中較少表達。ER及PR在腺肌病病灶中主要定位于腺上皮細胞及間質細胞核中，在正常子宮肌層中僅間質細胞中表達。說明3者可能在子宮腺肌病中相互作用，相關性機制需進一步探討。

研究認為，整合素-β3在子宮內膜的表達受雌、孕激素的調控，雌激素對整合素-β3 的表達有抑制作用，而孕激素則誘導其表達，兩者呈反向調節，相互協調平衡整合素-β3 在子宮內膜的正常表達[20]。本研究也顯示，雌激素受體在子宮腺肌病病灶中的表達較正常子宮肌層上調，而整合素-β3 的表達則下調。當雌激素與受體結合后通過相應機制抑制整合素-β3的表達，使細胞間粘連松動，異位腺體細胞容易移動為子宮肌腺病的發生與發展提供了病理學基礎。而孕激素受體的表達在子宮腺肌病病灶中的表達下調，對整合素-β3的促進作用減弱，整合素-β3 不能有效發揮作用，也促進子宮腺肌病的發展。

綜合分析，我們認為，整合素-β3 與ER、PR 在子宮腺肌病的發病中起著相互促進的作用。研究該機制有助于我們采取更有效的治療方案。