慢性乙型肝炎后肝硬化患者血清中HBV-DNA 病毒載量表達水平與肝纖維化肝纖四項關系的研究

魯惠

慢性乙型肝炎（chronic Hepatitis B）是嚴重威脅我國人民健康的重大傳染性疾病[1]。HBV的持續感染即HBV-DNA病毒載量的持續增高引起的病理損傷是導致肝硬化最主要原因。而肝纖四項即透明質酸（HA）、層粘連蛋白（LN）、Ⅲ型前膠原N端肽（PⅢNP）、Ⅳ型膠原（CⅣ）已被認為是理想的診斷慢性肝病、衡量肝病患者炎癥活動度以及纖維化嚴重程度的重要指標[2，3]。因此，我們根據上述特點，研究鄂爾多斯地區慢性乙型肝炎后肝硬化患者血清中HBVDNA病毒載量表達水平與肝纖維化主要指標肝纖四項的關系，為臨床診斷及治療提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 研究對象收集2013～2015年在鄂爾多斯市中心醫院住院的、確診為慢性乙型肝炎患者75例為研究對象。年齡46～65歲，平均（59.3±2.5）歲。入選標準：①HBsAg陽性超過6個月以上，乙肝病毒標志物HBsAg、HBeAg、HBcAb 陽性，HBsAb、HBeAb 陰性，HBV-DNA定量測定陽性。②研究對象既往半年內未接受過任何抗病毒、腎上腺皮質激素等免疫抑制劑及降酶藥物治療。排除標準：HAV、HCV、HDV、HEV 感染以及藥物性肝炎、酒精性肝炎、自身免疫性肝炎、肝硬化、肝癌等疾病[4]。按照HBV-DNA 病毒載量的高低分為兩組，其中≥105copies/ml 為高病毒載量組，＜105copies/ml為低病毒載量組。

1.2 試劑和儀器AutoLumo A2000全自動化學發光測定儀及其相關肝纖四項檢測配套試劑盒（HA、LN、PⅢNP、CⅣ）和標準品購于鄭州安圖股份有限公司（儀器編號為7011001553）；質控品購于美國伯樂公司；臺式離心機購于美國貝克曼公司。HBVDNA 病毒載量檢測儀器購自羅氏公司的LightCycler480實時熒光定量PCR儀，試劑由湖南圣湘生物有限公司提供。

1.3 標本采集及要求均于入院后立即按照無菌要求空腹抽取靜脈血，并將血置于黃色蓋子含有分離膠的真空采血容器中，采血后立即與抗凝劑混勻，在試管外壁貼上單據號等信息或檢驗聯號后，放置室溫立即送檢，以5 000r/min，離心5min后取患者血清進行肝纖四項及HBV-DNA病毒載量的檢測。

1.4 肝纖四項檢測采用AutoLumo A2000 全自動化學發光測定儀分析系統，嚴格按照微粒子化學發光分析法的標準操作規程，檢測血清中HA、LN、PⅢNP、CⅣ表達水平。

1.5 HBV-DNA 病毒載量檢測采用湖南圣湘生物有限公司提供的HBV-DNA提取試劑盒及羅氏公司生產的LightCycler480 實時熒光定量PCR 檢測系統進行檢測。

1.6 統計學方法采用SPSS 15.0 軟件進行統計分析，計量資料以均數±標準差表示，差異性比較采用t檢驗，并進行相關分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 纖維化主要指標肝纖四項檢測結果兩組患者肝纖四項結果均高于正常參考值上限（P＜0.05）。高病毒載量組明顯高于低病毒載量組，差異均具有統計學意義（P＜0.05），見表1。

2.2 肝纖四項與HBV-DNA 病毒載量相關性分析HBV-DNA病毒載量水平與血清肝纖維化主要指標肝纖四項之間存在明顯相關性，差異均具有統計學意義（P＜0.05），但不存在明顯直線趨勢的相關關系，見表2。

表1 纖維化主要指標肝纖四項檢測結果（±s）

表1 纖維化主要指標肝纖四項檢測結果（±s）

肝纖四項（ng/ml）HA LN PⅢNP CⅣ高病毒載量組（n=37）207±60.1 272±66.5 147±38.4 260±47.5低病毒載量組（n=38）160±24.2 192±41.9 63±22.2 155±50.1正常值（ng/ml）0～120 0～130 0～15 0～95

表2 肝纖四項與HBV-DNA病毒載量相關性

3 討論

肝纖維化是各種急慢性肝炎的病理發展過程，部分患者還可能發展為肝硬化，甚至癌變。但是在肝硬化之前，有一個較長的可逆轉的肝纖維化過程。如何及早發現肝纖維化，并進行干預，從而延緩病情進展，對各種肝炎患者的治療具有指導作用[5]。肝纖維化的診斷主要有肝活檢樣本的組織學檢查、影像學檢測和血清學檢測。目前評價肝纖維化程度及其活動度的指標，最可靠的仍是肝活檢樣本的組織學檢查，被稱為診斷肝纖維化的“金標準”。但血清學檢測可以對肝組織纖維化不同階段做出相對準確而且早期的診斷，反映肝臟纖維化的發展變化情況，也可大致反映抗纖維化治療的臨床效果。

Ⅳ型膠原（CⅣ）是最早反映肝纖維化程度的指標；層粘連蛋白（LN）主要反映炎性細胞浸潤程度及肝纖維化程度的指標；透明質酸（HA）主要反映肝細胞生成的纖維量及受損情況；Ⅲ型前膠原N端肽（PⅢNP）是反映肝內Ⅲ型膠原的合成水平的指標，PⅢNP水平越高，肝纖維化程度越強[6]。因此，肝纖四項可從不同角度反映患者肝細胞炎癥活動、損害程度及肝纖維化程度[7]。基于此，本研究應用微粒子化學發光分析法對75例乙型肝炎患者進行檢測，發現兩組患者所有肝纖四項結果均明顯高于正常參考值上線，而且高病毒載量組明顯高于低病毒載量組，差異均具有統計學意義（P＜0.05）。提示肝纖維化持續存在，而且高病毒載量的患者更易導致肝硬化。

同時，本研究發現HBV-DNA 病毒載量水平與血清肝纖維化主要指標肝纖四項之間存在明顯相關性，差異均具有統計學意義（P＜0.05），但不存在明顯直線趨勢的相關關系。因此，提示抗感染的治療，降低體內病毒的含量，有助于延緩肝纖維化的進展甚至逆轉肝纖維化情況[8]。