腦梗死后血管性認知障礙與載脂蛋白E基因多態性及胱抑素C的關系

何茜 穆瓊 郝晟赟 劉富億 劉晗琳 袁媛 邵丹丹

(貴州醫科大學附屬醫院 1全科醫學科，貴州 貴陽 550002；2急診科；3貴州省腫瘤醫院重癥醫學科)

梗死后血管性認知障礙(VCI)系指腦血管病及其危險因素引起輕度認知損傷到癡呆的認知損傷綜合征，包括血管性認知功能障礙非癡呆(VCIND)、血管性癡呆(VD)及混合性癡呆。VCI的高發病率、高致殘率及高致死率給人們的健康及生命帶來了嚴重的威脅〔1〕。研究顯示〔2〕：VCI的發病及嚴重程度與載脂蛋白(ApoE)基因多態性關系密切。本研究旨在探討VCI與ApoE基因多態性關系及血清胱抑素(Cys)C對VCI監測的臨床應用價值。

1 對象與方法

1.1研究對象 以2016年1月至2018年6月貴州醫科大學附屬醫院神經內科327例腦梗死住院患者為研究對象，其中158例AMI患者設為VCI組，梗死后認知功能正常患者169例設為腦梗死認知功能正常(CIND)組，兩組在性別、年齡及高血壓、冠心病、糖尿病、飲酒、吸煙構成比例上無統計學差異(P>0.05)，具有可比性。見表1。研究對象均為首次發病，注意排除嚴重心、肝、腎內科疾患，排除腦梗死外其他系統疾病或腦部疾患所致的認知障礙，排除無法遵從配合患者。研究對象或家屬均簽署知情同意書，享有知情權。

1.2診斷標準 研究對象均符合1995年全國第4次腦血管疾病會議制定的診斷標準，臨床有相關頭顱CT及磁共振成像(MRI)檢查診斷支持，并根據蒙特利爾認知評估量表(MoCA)測試結果進行分組：MoCA總分30分，≥26分為CIND組，<26分為VCI組，受教育年限≤12年加1分校正教育偏差。

1.3研究方法

表1 兩組基本情況比較(n)

1.3.1ApoE基因多態性檢測 取靜脈血乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-2Na)抗凝，改良碘化鈉法提取白細胞基因組DNA，PCR擴增儀為ABI7500，引物序列P1：5′-AACAACTGACCCCGGT-FFCG-3′，P2：5′-ATGGCGCTGAGGCGCTC-3′。反應條件：95℃預變性15 min，冰浴加Taq DNA聚合酶2 U，10 000 r/min離心30 s，95℃1 min→75℃3 min循環5次，95℃1 min→65℃→75℃1 min循環20次，75℃10 min凝膠糖瓊脂電泳。ApoE基因酶切10%聚丙烯酰胺凝膠電泳、銀染。ApoE等位基因頻率計算公式PA=x/2n，其中PA：等位基因的頻率，n：患者總數，x：A 等位基因的數目。

1.3.2CysC、血脂血清檢測 取靜脈血肝素鈉抗凝離心分離血清檢測CysC及血脂〔三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)〕，全自動生化分析儀為HITACH7600，試劑由寧波美康生物有限公司提供，當日室內質控保證結果的有效性。

1.4統計學處理 采用SPSS22.0進行χ2檢驗、方差分析、SNK-q檢驗。

2 結 果

2.1兩組研究對象ApoE基因型頻率及等位基因頻數比較 ε4/4基因型頻率VCI組顯著高于CIND組(P<0.05)，ApoE等位基因頻數VCI組ε4顯著高于CIND組(P<0.05)。見表2。

2.2各組CysC及血脂水平比較 各組CysC、TC、LDL水平比較差異均有統計學意義(P<0.05)，組間兩兩比較，CysC在ε4基因攜帶者、VCI組、非ε4基因攜帶者及CIND組依次降低，任意組間比較均有統計學差異(P<0.05)；ε4基因攜帶者血清TC顯著高于其他三組(P<0.05)，其他三組TC水平差異無統計學意義(P>0.05)；CIND組及非ε4基因攜帶者LDL水平顯著低于VCI組，ε4基因攜帶者LDL水平顯著高于其他三組(P<0.05)。見表3。

表2 兩組ApoE基因型頻率及等位基因頻數分布比較〔n(%)〕

表3 各組CysC及血脂水平比較

與VCI組比較:1)P<0.05；與CIND組比較:2)P<0.05；與非ε4基因攜帶者比較:3)P<0.05

3 討 論

ApoE為一種多態性蛋白，主要參與脂蛋白的代謝及轉化，臨床研究顯示〔3〕：ApoE蛋白的多態性主要由其基因多態性所決定。ApoE編碼基因位于第19號染色體長臂13區2帶，其多態性源于第4號外顯子編碼112位、158位氨基酸密碼子表達ε2 、ε3、ε4 3種等位基因及ε2/2，ε2/3，ε3/3，ε2/4，ε3/4，ε4/4 6種基因型。ApoE基因多態性具有重要的生物學意義，目前在心腦血管病領域逐漸成為臨床研究的熱門課題。有研究證明〔4～6〕：多種常見的心腦血管疾病諸如：動脈粥樣硬化、冠心病、腦血管的淀粉樣變性等均與ApoE基因多態性關系密切。VCI為血管及其相關因素引起認知功能障礙，與老年性癡呆綜合征比較，VCI為一更為廣闊的定義，其涵蓋了血管源性認知損傷的整個漸進性過程〔7〕。VCI的早期診治對老年性癡呆的預防及延緩均有重要的臨床意義，有學者認為〔8〕：VCI的發病風險與ApoE基因的多態性密切相關。

ApoE生理功能主要在于作為乳糜微粒殘基受體及低密度脂蛋白受體的配基介導細胞對脂蛋白的攝取。ApoEε3基因編碼112位為半胱氨酸，158位為精氨酸，ApoEε2 158位則被半胱氨酸取代，ApoEε4第112位為精氨酸。氨基酸表達的差異性決定了ApoE蛋白N端對受體結合的活性改變，其中以ApoEε4活性最高〔9〕，ApoEε4活性增高，可造成大量脂質內吞，增加機體的膽固醇水平，并加重血管硬化〔10〕。本研究數據支持上述觀點，ε4基因攜帶者血清TC及LDL均高于其他三組。有研究證明〔11〕：ε4等位基因攜帶者罹患易損斑塊的概率相對其他等位基因更高，其體內的慢性炎性狀態也更為顯著。

CysC為半胱氨酸蛋白酶抑制劑，廣泛地存在于體液及組織的有核細胞中，調節機體蛋白水解酶的活性，對組織蛋白酶B有強烈的抑制作用。Ghidoni等〔12〕研究認為CysC老年人的認知功能關系密切，其血清水平的升高為VCI的獨立危險因子。有研究證明〔13〕：ε4基因與CysC均能增加血清TC、LDL而加重動脈粥樣硬化，增加VCI風險，早期VCI患者僅表現為輕度的認知功能下降，早期隱匿性臨床癥狀易導致VCI患者發生漏診，未形成癡呆的早期VCI具有可逆性，早期的診斷尤為重要，CysC水平的監測對于VCI的早期診斷及發病概率的預測有重要的臨床應用價值。

綜上，ApoEε4腦梗死患者更容易發生VCI，CysC水平的監測對于VCI的早期診斷及發病概率的預測有重要的臨床應用價值。