他莫昔芬引發潮熱大鼠模型建立與評價

唐佳 徐川 唐勇 尹海燕 薛紅 魏大能 何建才 周奇志

(成都中醫藥大學針灸推拿學院，四川 成都 610075)

他莫昔芬是絕經前乳腺癌患者術后輔助內分泌治療的最常用藥物〔1〕，潮熱是他莫昔芬的嚴重不良反應之一。有研究發現，超過70%的患者服用他莫昔芬后出現潮熱〔2〕，且潮熱發作時間不定，以夜間發作較多，干擾患者的睡眠質量和精神狀態，嚴重者可導致抑郁的發生〔3〕，使大多數患者難以忍受，甚至終止治療〔4〕。潮熱的主要表現為胸部及頸面部皮膚溫度升高、潮紅，甚至大量出汗，常持續數秒至數分鐘消退，隨后中心體溫下降，全身畏寒發冷，同時伴隨著心悸、焦慮、急躁甚至恐慌感。目前針對乳腺癌內分泌治療引發的潮熱，臨床上多選用選擇性5-羥色胺再吸收抑制劑、加巴噴丁、可樂定等藥物，但均出現不同程度的口干、食欲減退、嗜睡、便秘、眩暈、皮膚瘙癢等不良反應，使患者接受程度降低〔5〕，故目前缺乏理想的有效治療方法。現有研究發現針刺可以很好改善乳腺癌內分泌治療引發的潮熱，且副作用小〔6～8〕，但治療機制尚未明確。因此，構建一個理想的他莫昔芬引發潮熱的大鼠模型，對尋求針對潮熱的干預措施及其機制研究有重要意義。本研究采用他莫昔芬灌胃大鼠建立潮熱模型，通過觀察大鼠尾部皮膚溫度及血清雌二醇(E2)水平，對該模型效果進行綜合評價。

1 材料與方法

1.1實驗動物及喂養 11周齡清潔級SD雌性大鼠30只，體重(240±10)g，由四川達碩動物實驗中心提供，動物合格證號:SCXK(川)2015-030。所有大鼠成對飼養，適應性馴養1 w，自由進食、飲水，濕度55%～65%，溫度(23±1)℃。設置隔離單元自動光照和通風控制系統參數，光暗周期為12 h/12 h，光照期設置為9∶00～21∶00，黑暗期設置為21∶00～9∶00，通風設置為每隔30 min通風30 min。

1.2主要試劑與儀器 他莫昔芬(揚子江藥業集團有限公司，批號:國藥準字H32021472)，蒸餾水；酶聯免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒(Rat E ELISA KIT，批號:20180112，茁彩生物公司)；熱電偶測溫儀 (型號SH-64，深圳市深華軒科技有限公司)。

1.3方法

1.3.1實驗分組及模型制備 在安靜、溫度恒定和濕度適宜的實驗室內，馴養1 w后，將大鼠置于尾部固定的特定裝置中每天4 h、適應1 w，再檢測大鼠基礎尾溫1 w，將1 w尾溫的平均值作為基線溫度，即第0天的溫度，并剔除超過基線溫度的大鼠。最后共納入符合條件的大鼠20只。將20只大鼠隨機分為對照組、模型組各10只。每日上午8點，對照組予蒸餾水灌胃，模型組給予他莫昔芬懸濁液(以蒸餾水為溶劑)灌胃，灌胃劑量為10 mg/kg。兩組均持續灌胃28 d后停止。

1.3.2測溫 每日上午灌胃后按照灌胃順序將各大鼠裝入固定裝置中，暴露尾部，在鼠尾背面距尾根1～2 cm已剃毛處做好十字標記，將熱偶探測頭固定在標記處，持續監測鼠尾溫度4 h〔9〕，熱電偶測溫儀每1 min自動讀取一次溫度值，并自動記錄于存儲器，4 h溫度的平均值作為每只大鼠當天的尾溫。整個測溫過程室溫保持在(23±1)℃。

1.3.3E2水平檢測 在灌胃第28天后取各組大鼠的腹主動脈血，分離血清，采用ELISA方法檢測各組大鼠的血清E2濃度。

1.4統計數據 采用SPSS25.0軟件，采用重復測量資料的方差分析檢驗及獨立樣本t檢驗。

2 結 果

2.1大鼠尾溫結果 兩組大鼠的尾溫平均值經重復測量方差分析，球形度檢驗P<0.05，多變量檢驗結果顯示測溫天數的P=0.056,測溫天數*組別的P=0.024，表示總體上隨著測溫天數的增加，兩組大鼠的尾溫變化趨勢有明顯差異，即隨著時間增加，模型組較對照組大鼠尾溫明顯升高。從0～28 d的分段變化趨勢看，從第12天開始，模型組尾溫有了上升趨勢，但第12、16天兩組比較無統計學差異；而到第20、24、28天，模型組與對照組比較有明顯差異(P<0.05)。見圖1。第20～28天，模型組的尾溫(27.90±0.40)℃明顯高于對照組(26.13±0.06)℃，差異具有統計學意義(P<0.05)。

兩組在第0～19天和第20～28天自身前后比較，對照組的鼠尾溫度在兩個時間段自身前后比較無明顯差異〔第0～19天：(26.54±0.24)℃，第20～28天：(26.13±0.06)℃，P>0.05〕，而模型組在第20～28天(27.90±0.40)℃明顯高于第0～19天(26.48±0.56)℃，差異具有統計學意義(P<0.05)。

兩組造模前及造模結束第28天相互比較，造模前基礎尾溫比較無明顯差異〔對照組(26.36±1.03)℃，模型組(26.72±1.01)℃,P>0.05〕，而在造模第28天時，模型組尾溫〔(28.31±1.41)℃〕較對照組〔(26.20±2.55)℃〕有明顯升高(P<0.05)。

2.2血清E2濃度對比結果 與對照組〔(56.65±17.69)pg/ml〕比較，模型組的血清E2濃度明顯下降〔(35.89±7.68)pg/ml，P<0.05〕。

與對照組比較:1)P<0.05圖1 兩組尾溫變化的曲線圖

3 討 論

現有研究觀察了圍絕經期婦女潮熱發生的生理學改變，發現在潮熱開始時手指和腳趾的皮膚溫度大幅度升高，并證明這種皮膚溫度的升高與潮熱的發生有關〔10〕。因此，皮溫升高成為潮熱發生的最顯著特征。大鼠尾部是唯一無毛皮覆蓋且表面積較大的部分，能消散大約20%的總產熱量，類似于人類的面部及四肢〔11〕，所以用大鼠尾溫判斷模型動物是否發生潮熱是可靠的。Opas等〔9〕曾用他莫昔芬(每天5 mg/kg)對正常大鼠連續灌胃10 d并監測大鼠尾部皮膚溫度變化，發現從第7天開始大鼠尾溫有了明顯的升高，在第10天與以甲基纖維素灌胃的對照組比較有顯著差異。才開始本研究中，模型組尾溫在第20天與對照組相比有明顯的統計學差異，并持續到第28天灌胃結束。考慮與上述實驗中大鼠尾溫升高時間不同的原因，可能是研究目的不同、灌胃溶劑和大鼠年齡不同及個體差異等所致，且本實驗灌胃溶劑采用的蒸餾水與臨床患者服藥用水相似，與實際更相符；但本研究與Opas等〔9〕研究的最后結果一致，即他莫昔芬可引起大鼠皮膚溫度升高，產生類似于圍絕經期潮熱的癥狀。

他莫昔芬是第一代選擇性雌激素受體調節劑，能夠與細胞膜上雌激素受體結合，形成復合物，從而切斷了雌激素的來源，降低雌激素水平，進而導致潮熱的癥狀出現。在本研究中，經過28 d他莫昔芬灌胃后，模型組的血清E2濃度明顯低于對照組，與國內外多篇文獻〔2,12，13〕中提到的“低雌激素可能引發體溫調定點下移而導致潮熱”的研究理論一致。結合鼠尾溫度結果，此造模方法能很好地模擬人類潮熱時的主要癥狀，故可判定他莫昔芬引發潮熱的動物模型造模成功。 本研究在測溫前將大鼠適應性馴養1 w，再放入測溫裝置適應1 w，有助于緩解大鼠的焦慮緊張情緒，避免對尾部溫度產生影響，提高溫度數據檢測的準確性。且測溫部位剃毛并做好標記，將熱電偶探頭固定在標記處，采用連續監測尾溫4 h的測溫方式，相較于紅外線測溫儀等瞬間測尾溫的方式，能夠確保每日測溫部位的一致性，且數據量較大，能夠減少溫度之間的誤差。由于該實驗固定制動時間相對較長，也存在極少數大鼠測溫脫落現象，在后續的測溫實驗中可考慮采用在鼠尾植入皮膚溫度傳感器24 h監測大鼠尾溫的方法，進一步減少誤差。

綜上，用10 mg/kg的他莫昔芬連續灌胃28 d，能成功地復制出乳腺癌內分泌藥物他莫昔芬所致潮熱的動物模型。此模型填補了國內外抗癌內分泌藥物導致潮熱的實驗動物模型研究的空缺，為研究該類潮熱發生的中樞等機制提供了新的途徑，為有效、基本無副作用的非藥物替代療法如針刺緩解乳腺癌他莫昔芬等抗癌內分泌藥物所致潮熱癥狀〔14～16〕機制研究提供了理想的動物模型和研究平臺。