建立直觀的潔凈區潔凈度浮游菌控制標準

文優芬

（廣州白云山光華制藥股份有限公司 廣東 廣州 510285）

潔凈區是在藥品生產企業最為常見的生產廠房設施，一般用于原輔料的取樣、產品的生產、產品的微生物限度檢驗等。2010年版《藥品生產質量管理規范》[1]中潔凈區的定義為“需要對環境中塵粒及微生物數量進行控制的房間（區域），其建筑結構、裝備及其使用應當能夠減少該區域內污染物的引入、產生和滯留。”，第二百二十一條條款中還規定“必要的環境監測操作規程、記錄和報告”、“（三）宜采用便于趨勢分析的方法保存某些數據（如檢驗數據、環境監測數據、制藥用水的微生物監測數據）；”。因此有必要建立相關的操作規程及控制標準對潔凈區環境進行監測，一般稱潔凈區潔凈度監測。

在2015年版中國藥典四部《9205藥品潔凈實驗室微生物監測和控制指導原則》[2]和2010年版《藥品生產質量管理規范》指南中，也提到潔凈區潔凈度監測的項目和周期要求，一般包括懸浮粒子、沉降菌、浮游菌、表面微生物檢測的全部項目或部分項目檢測。

浮游菌的監測執行中華人民共和國國家標準GB/T16293-2010《醫藥工業潔凈室（區）浮游菌的測試方法》[3]和2015年版中國藥典四部《9205藥品潔凈實驗室微生物監測和控制指導原則》。浮游菌的監測規程及控制標準應包括采樣、檢測、計算和評定、注意事項等等。

1.采樣

一般使用空氣浮游菌采樣儀和培養皿進行采樣，培養皿規格需與采樣儀匹配、合適，培養基為胰酪大豆胨瓊脂培養基，按要求配好后備用。潔凈區不同潔凈度級別的最小采樣量法規也有相應規定，見表1，應根據浮游菌檢測的潔凈區潔凈度級別選擇相應的采樣量，并設置合適的采樣儀空氣流量。采樣操作者應注意消毒采樣儀的頂蓋、轉盤以及罩子的內外面，應檢查培養皿的質量，放入和取出過程要注意人員衛生并避免粗放操作，以免影響檢測結果。

表1 不同潔凈度級別的浮游菌的最小采樣量

2.檢測

浮游菌的檢測是將取樣后的培養皿倒置于恒溫培養箱中進行培養，在30～35℃培養不少于72小時。培養完后，取出，用計數方法得出各個培養皿的菌落數。注意每批培養基應有對照實驗，一般每批可選定3只培養皿作對照培養。

3.計算和評定

3.1 法規規定

中華人民共和國國家標準GB/T16293-2010《醫藥工業潔凈室（區）浮游菌的測試方法》規定的浮游菌的評定指標為浮游菌平均濃度，而不同潔凈度級別有不同的判定標準，見表2，評定標準為每個測點的浮游菌平均濃度必須低于所選定評定標準（即相應潔凈度級別）中的界限。

表2 不同潔凈度級別的浮游菌平均濃度評定標準

每個測點的浮游菌平均濃度的計算公式見公式1：

浮游菌平均濃度（cfu/m3）=菌落數/采樣數×1000…………公式1。

示例1：某檢測點為潔凈度D級的潔凈區，按表1規定采樣量為250L，培養皿檢測出的菌落數為3，套用公式1，該檢測點浮游菌平均濃度則為：浮游菌平均濃度（cfu/m3）=3/250×1000=12cfu/m3。

該結果按表2評定，結果符合D級潔凈度要求。

3.2 存在不足

通過以上的計算和評定過程，可以看出此過程較為復雜，存在一些不足。

（1）不能直接從培養皿檢測出的菌落數判斷檢測結果是否符合評定標準（即表2），不夠直觀；

（2）對于每個檢測點，都需要套用表1、公式1計算，再判斷結果是否符合表2，計算工作量大，容易出錯；

（3）計算和評定過程較為復雜，不利于人員培訓，檢測人員難以掌握，出錯率增大。

（4）使用浮游菌平均濃度數據進行趨勢分析，不夠直觀，不便于指導日常檢測工作。

4.評定方法優化

為了減少計算工作，減少出錯率，提高工作效率，本作者思索是否可以建立一個從每個培養皿的菌落數結果直接判斷是否符合規定的控制標準呢？而不同潔凈度級別的最小采樣量（表1）和評定標準（表2）及計算公式（公式1）都已固定，每次采樣為一個培養皿，經過思考和探索，可以將這些因素套入公式，進行轉換，將浮游菌結果轉換為cfu/皿，見示例2，得出一個新的、直觀的不同潔凈度級別的浮游菌菌落數判斷標準，見表3。

示例2：

某檢測點為潔凈度D級的潔凈區，按表1規定采樣量為250L，按表2規定浮游菌平均濃度≤200（cfu/m3），套用公式1后如下公式2，計算出每個培養皿可檢測出的菌落數限度為≤50cfu/皿。

菌落數/250×1000=浮游菌平均濃度（cfu/m3）≤200（cfu/m3）…………公式2。

表3 不同潔凈度級別的浮游菌菌落數判斷標準

5.結論

浮游菌控制標準將浮游菌平均濃度轉化為每個培養皿可檢測出的菌落數限度后，潔凈度檢測人員可以從每個培養皿的菌落數，直接判斷該檢測點是否符合相應的潔凈度級別，不需要再套入公式計算，直觀、便捷。且在年度潔凈度趨勢分析時，使用浮游菌菌落數數據進行趨勢分析，在日常檢測時能初步判斷菌落數是否偏離趨勢，更有利于指導潔凈區潔凈度監測，也符合2010年版《藥品生產質量管理規范》條款“宜采用便于趨勢分析的方法保存某些數據”的要求。