甲硫氨酸合成酶還原酶（MTRR）基因多態性與GDM關系

于天龍

妊娠期糖尿病（gestational diabete mellitus，GDM）可使產婦妊娠期高血壓疾病、胎膜早破等的幾率增加，且圍生期巨大兒，胎兒窘迫等的發生明顯高于正常孕婦[1]。GDM的發生與多種因素有關，包括一般因素（孕婦超重或肥胖、體重增長過快、高齡、血清血脂水平等）[2-4]、遺傳因素、炎癥因子、脂肪因子（瘦素、脂聯素等）[5-7]。但是，GDM的發病機制尚未完全明確。本文擬研究MTRR基因（rs1801394，rs1532268，rs162036）基因多態性與GDM易感性的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月—2018年6月來我院就診的孕婦60例作為研究對象，將孕婦分為GDM組（27例）和血糖正常組（33例）。根據國際妊娠糖尿病研究協會（IADPSG）推薦的GDM診斷標準為75 g OGGT：空腹血糖 ≥ 5.1 mmol/L；1小時≥10.0 mmol/L；2小時≥8.5 mmol/L。

1.2 血糖和血清HCY檢測

采集空腹靜脈血5 mL于BD真空生化管中，靜止10 min后離心15 min分離血清，在日立7600-020生化分析儀上進行血糖和血清HCY水平檢測。

1.3 血清DNA提取

用EDTA抗凝管采集空腹靜脈血2 mL，進行DNA提取，用凝膠電泳進行質量檢查。

1.4 多重PCR反應

PCR引物序列見表1。

1.5 多重PCR產物純化

在20μl PCR產物中加入5 U SAP酶和2 U，Exonuclease I酶，37 ℃溫浴1 h，然后75 ℃滅活15 min。

1.6 連接反應

連接引物：連接引物序列見表2。

1.7 測序

將連接產物在ABI3730XL測序儀上進行測序，將ABI3730XL測序儀上收集的原始數據用 GeneMapper 4.1（AppliedBiosystems,USA） 分析。

1.8 統計學分析

用 SPSS 17.0 統計軟件進行數據處理，兩組間的基因型頻率和等位基因頻率的比較用 χ2檢驗。孕婦基本資料及血清HCY 濃度采用兩個獨立樣本的t檢驗, 以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 GDM組與非GDM組血糖及血清HCY水平結果

見表3。GDM組血清HCY水平明顯高于非GDM組，差異有統計學意義（P=0.037）。

2.2 基因分型結果

見圖1-9。rs1801394，rs1532268，rs162036各基因多態性GDM組和非GDM組比較無顯著差異。

3 討論

近年來，GDM的發生逐漸增多，關于GDM的研究亦逐漸增多，近年有學者研究發現GDM患者血清同型半胱氨酸（homocysteine，HCY）水平高于正常妊娠孕婦，且妊娠期糖尿病患者A2級血清HCY水平明顯高于A1級，而且，GDM患者血清高HCY者妊娠結局不良事件發生率明顯高于對照組，可見，血清Hcy水平與GDM及妊娠結局密切相關。

同型半胱氨酸（homocysteine，HCY）是一種含硫氨基酸，是蛋氨酸代謝過程中的重要產物，大量研究表明，GDM患者血清Hcy水平增高，是影響GDM妊娠結局的獨立因素[8]。HCY代謝受幾種關鍵酶：亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）、胱硫醚β合成酶（CBS）、蛋氨酸合成酶（MTR）及蛋氨酸合成酶還原酶（MTRR）[9]、葉酸、多種維生素共同作用。當HCY代謝依賴的酶缺陷和（或）葉酸及B族維生素缺乏時，可引起高同型半胱氨酸血癥（hyperhomoeysteinemia，HHCY）。

表1 SNP位點PCR引物序列

表2 SNP位點連接引物序列

表3 兩組年齡、孕周、血糖及血清HCY水平（s）

表3 兩組年齡、孕周、血糖及血清HCY水平（s）

分組 n 年齡（歲） 孕周（周） 血糖（mmol/L） HCY（μmol/L）GDM組非GDM組P 值27 33-33±5 29±3 0.003 26±1 25±1 0.332 6.32±1.40 4.24±0.43 0.000 5.40±4.20 3.49±2.03 0.037

圖1-3分別為rs1801394（G/G），rs1801394（G/A）,rs1801394（A/A）基因

圖4-6分別為rs1532268（T/T），rs1532268（C/C），rs1532268（C/T）基因型

圖7-9分別為rs162036（G/G），rs162036（A/A），rs162036（G/A）基因

近年來，影響HCY代謝的酶引起廣大學者的重視。甲硫氨酸合成酶（MTR）是同型半胱氨酸代謝的關鍵酶，而蛋氨酸合成酶還原酶（MTRR）協同維生素B12用于維持甲硫氨酸合成酶（MTR）的還原活性。編碼蛋氨酸合成酶還原酶的基因位點變異不能維持甲硫氨酸合成酶（MTR）的活性，可引起血清Hcy升高。MTRR基因（rs1801394，rs1532268，rs162036）位點突變是常見的主要突變位點。近年來，關于MTRR基因多態性與胎兒先天缺陷，腦梗死，心血管疾病，兒童淋巴細胞白血病，多囊卵巢綜合征，神經管畸形等疾病的相關研究較多[10-12]。而MTRR基因（rs1801394，rs1532268，rs162036）位點突變與妊娠糖尿病的關系，目前國內外尚未見到報道。因此，本研究擬了解產婦HCY代謝酶相關基因MTRR基因（rs1801394，rs1532268，rs162036）的多態性，探討MTRR基因（rs1801394，rs1532268，rs162036）多態性與GDM易感性的關系。本研究結果顯示GDM組與非GDM組比較，GDM組血清HCY水平明顯高于非GDM組（P＜0.05），但rs1801394，rs1532268，rs162036各基因多態性差異無統計學意義，可能與GDM發生的易感性無明顯相關性（P＞0.05），但仍需擴大樣本量進行進一步證實。