9種生物殺菌劑對櫻桃莖腐病菌的室內毒力測定

林霞 于曉麗 王群青 王培松 王英姿

摘要[目的]測定不同生物殺菌劑對櫻桃莖腐病菌的毒力。[方法]采用平皿法，分析3%多抗霉素WP、0.3%丁子香酚SL、1.5%苦參堿AS、2%蛇床子素EC、4%寧南霉素AS、80%乙蒜素EC、6%春雷霉素WP、0.5%香芹酚AS、10%井岡霉素AS對櫻桃莖腐病菌的抑菌效果。[結果]除多抗霉素外，其余8種供試殺菌劑均對櫻桃莖腐病菌表現出一定的毒力效果，但不同殺菌劑間的毒力差別較大。丁子香酚、乙蒜素、蛇床子素、春雷霉素、香芹酚、寧南霉素、苦參堿和井岡霉素對櫻桃莖腐病菌煙草疫霉的EC50分別為0.015 3、1.292 5、10.630 9、50.993 2、117.472 0、286.009 2、413.905 0和587.767 4 mg/L。丁子香酚對櫻桃莖腐病菌的抑制效果最好，其次為乙蒜素和蛇床子素，春雷霉素、香芹酚、寧南霉素、苦參堿和井岡霉素的抑制效果較差，多抗霉素對櫻桃莖腐病菌沒有抑制效果。[結論]該研究為田間防治莖腐病和有效藥劑的篩選提供理論依據。

關鍵詞櫻桃莖腐病;煙草疫霉;生物殺菌劑;毒力

中圖分類號S482.2文獻標識碼A

文章編號0517-6611（2019）02-0129-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2019.02.038

煙臺是我國甜櫻桃的主要產區，種植最早、面積最大，種植面積約為1.2萬hm2，年產最高約24萬 t，分別占全國總量的70%、80%以上[1-3]。櫻桃莖腐病是由煙草疫霉（Phytophthora nicotianae）引起的病害，主要危害葉片和新生枝條的莖部，導致葉片和新生枝條干枯死亡[4]。調查發現，夏季感染莖腐病菌的苗木出現大批死亡的現象，尤其是在多雨年份的夏季表現更為明顯，發病嚴重的苗圃幾乎毀園[4-5]。但目前未見報道防治櫻桃莖腐病的相關藥劑。對櫻桃莖腐病流行規律和因素、抗性機理、品種資源抗性與評價等方面展開了一系列研究[6]。化學殺菌劑是防治植物病害的重要手段。早期針對煙草疫霉引起的煙草黑脛病進行防治的方法是使用銅制劑，但銅制劑長期使用會積累于土壤中，并污染環境[7]。隨后又出現了以代森錳鋅為代表的保護性殺菌劑，這類殺菌劑具有表面保護作用，可對病菌進行多位點抑制且不易產生抗藥性，但這類殺菌劑在使用過程中用藥量大、效果差，對環境污染極其嚴重，代森錳鋅還被WHO、EPA、IARC等機構認定為易于致癌的一類化學物質[8-10]。20世紀70年代研制出了具有內吸活性的殺菌劑，如乙磷鋁、甲霜靈、噁霉靈、烯酰嗎啉等，為煙草疫霉引起的煙草黑脛病的防治提供了更多的選擇[11]，但研究表明煙草疫霉對甲霜靈產生了抗藥性[12-16]，且長期使用還會造成環境污染。為了使櫻桃產業可持續發展需要尋找安全有效、可交替輪換使用、毒副作用小的殺菌劑。生物殺菌劑具有安全、高效、無污染的優點，對食品安全具有重要作用[17]。為了篩選更多防治櫻桃莖腐病安全有效的生物殺菌劑，筆者研究3%多抗霉素WP、0.3%丁子香酚SL、1.5%苦參堿AS、2%蛇床子素EC、4%南寧霉素AS、80%乙蒜素EC、6%春雷霉素WP、0.5%香芹酚AS、10%井岡霉素AS 9種生物殺菌劑對櫻桃莖腐病菌的抑菌效果。

1材料與方法

1.1試驗藥劑3%多抗霉素WP，廣東省東莞市瑞德豐生物科技有限公司;0.3%丁子香酚SL，山東省億嘉農化有限公司;1.5%苦參堿AS，成都新朝陽作物科學有限公司;2%蛇床子素EC，武漢天惠生物工程有限公司;4%南寧霉素AS，四川金珠生態農業科技有限公司;80%乙蒜素EC，天津市漢邦植物保護劑有限責任公司;6%春雷霉素WP，山西省臨猗中晉化工有限公司;0.5%香芹酚AS，成都新朝陽作物科學有限公司;10%井岡霉素AS，浙江省桐廬匯豐生物科技有限公司。

1.2試驗方法

1.2.1含藥培養基配制。1 L 10% V8汁固體培養基：100 mL V8汁中加入CaCO3 1 g，與水1∶9稀釋，加入15 g瓊脂粉，121 ℃高壓滅菌15 min。

用Eppendorf微量可調移液槍取1 mL 10 000 mg/L殺菌劑母液，用滅菌去離子水將供試藥劑配成一定濃度的稀釋液，取1 mL稀釋液加入49 mL 10% V8汁固體培養基中，混合均勻后倒入培養皿中制成含藥平板。

1.2.2平皿法。

在無菌環境下，用接種針挑取6 mm的菌絲塊，放置于含藥平板中央，以不加藥平板作為對照，每個濃度重復3次。26 ℃恒溫培養5 d，應用十字交叉法垂直測量平板菌落直徑，計算藥劑對櫻桃莖腐病菌菌絲生長的抑制率[18]。

抑制率=（對照菌落直徑-處理菌落直徑）/對照菌落直徑×100%

1.3數據分析回歸分析各處理濃度的對數值（X）和菌絲生長抑制率幾率值（Y），求毒力回歸方程和相關系數，得出生物殺菌劑對櫻桃莖腐病菌的抑制中濃度值（EC50）。

2結果與分析

2.1 9種生物殺菌劑對櫻桃莖腐病菌菌絲生長的抑制作用

9種生物殺菌劑對櫻桃莖腐病菌菌絲生長的抑制效果見表1。由表1可知，丁子香酚的抑制效果最好，在濃度0.007 812 5～1.000 000 0 mg/L時抑制率為50%～100%;乙蒜素的抑制率次之，濃度0.25～8.00 mg/L時抑制率為10.00%～93.75%;蛇床子素濃度在1.562 5～50.000 0 mg/L時抑制率為10%～90%;春雷霉素濃度在6.25～200.00 mg/L時抑制率為2.5%～95.0%;香芹酚濃度在12.5～400.0 mg/L時抑制率為2.5%～87.5%;寧南霉素濃度在31.25～1 000.00 mg/L時抑制率為3.75%～88.75%;苦參堿濃度在31.25～1 000.00 mg/L時抑制率為0～81.25%;井岡霉素濃度在31.25～1 000.00 mg/L時抑制率為0～57.5%;多抗霉素濃度在31.25%～1 000.00 mg/L時抑制率為1.25%～7.50%。

2.2毒力測定結果

室內毒力測定結果表明，除多抗霉素外，其余8種供試殺菌劑均對櫻桃莖腐病菌表現出一定的毒力效果，但不同殺菌劑間的毒力差別較大（表2）。經EC50分析表明，丁子香酚對櫻桃莖腐病菌具有很好的抑制作用，其EC50僅為0.015 3 mg/L，其次為乙蒜素和蛇床子素，EC50分別為1.292 5和10.630 9 mg/L，春雷霉素、香芹酚、寧南霉素、苦參堿和井岡霉素的抑制效果較差，EC50為50.993 2～587.767 4 mg/L。

3結論與討論

該試驗的9種生物殺菌劑中，除多抗霉素外，其余8種供試殺菌劑均對櫻桃莖腐病菌煙草疫霉表現出一定的毒力效果，但不同殺菌劑間的毒力差別較大。其中，丁子香氛的抑菌效果最佳，其EC50僅為0.015 3 mg/L。丁子香酚是霜疫霉溶解劑，對霜霉、灰霉均有很好的治療作用。乙蒜素和蛇床子素也有較好的防治效果，EC50分別為1.292 5和10.630 9 mg/L。乙蒜素和蛇床子素屬于植物仿生農藥，來源于安全的天然物，具有低毒、低殘留的優點。丁子香酚、乙蒜素和蛇床子素等生物藥劑也是研配防治櫻桃莖腐病復配藥劑的最佳選擇，能夠減少化學農藥用量，降低對化學藥劑產生抗藥性風險。春雷霉素、香芹酚、寧南霉素、苦參堿和井岡霉素對櫻桃莖腐病菌的抑制效果較差，其EC50在50.993 2～587.767 4 mg/L。

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