ＱｕＥＣｈＥＲＳ－氣相色譜法快速測定蔬菜中的咪鮮胺及２，４，６－三氯苯酚殘留量

張彥軍 錢瀅文 柴宗龍 石瑞瑞 張楠 尤毅娜 劉琦 洪霞

摘要：建立了QuEChERS-氣相色譜快速測定蔬菜中咪鮮胺及其代謝物2，4，6-三氯苯酚殘留量的方法。樣品經(jīng)乙酸酸化乙腈提取后，以無水硫酸鎂和N-丙基乙二胺（PSA）凈化，并利用氣相色譜進(jìn)行檢測。結(jié)果表明，在最佳條件下，咪鮮胺及其代謝物2，4，6-三氯苯酚分別在0.005～1.000和0.002～1.000 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)分別為0.998 6和0.999 3，檢出限分別為0.001 0和0.000 6 mg/kg;在0.02、0.10、0.50 μg/mL 3個添加水平下回收率分別為92.1%～107.9%和91.4%～105.7%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為2.4%～10.4%和2.6%～11.3%。該方法具有快速、便捷、安全、清潔和成本低等特點，可用于蔬菜中咪鮮胺及其代謝物2，4，6-三氯苯酚殘留的快速測定。

關(guān)鍵詞：QuEChERS;氣相色譜;咪鮮胺;2，4，6-三氯苯酚;蔬菜

中圖分類號：O657.63? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：0439-8114（2019）01-0103-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.01.025? ? ? ? ? ?開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）：

Rapid Determination of Residues of Prochloraz and 2，4，6-Trichlorophenol in Vegetables by QuEChERS-Gas Chromatogarphy

ZHANG Yan-jun1，2，QIAN Ying-wen1，2，CHAI Zong-long1，2，SHI Rui-rui1，2，

ZHANG Nan1，2，YOU Yi-na1，2，LIU Qi1，2，HONG Xia1，2

（1.Gansu Institute of Business and Technology Co.，Ltd.，Lanzhou 730010，China;

2.Gansu Zhongshang Food Quality Test and Detection Co.，Ltd.，Lanzhou 730010，China）

Abstract： To developed a rapid method for the determination of residues of prochloraz and its metabolite 2，4，6-trichlorophenol in vegetables by QuEChERS and gas chromatography（GC）. The samples were extracted with acetonitrile-acetic acid， purified by PSA，and determined by GC. The results showed that prochloraz and its metabolite 2，4，6-trichlorophenol had a good linearity in the range of 0.005～1.000 μg/mL and 0.002～1.000 μg/mL， the correlation were 0.998 6 and 0.999 3 under the optimal conditions. The limit of detection for prochloraz and its metabolite 2，4，6-trichlorophenol were 0.001 0 mg/kg and 0.000 6 mg/kg， respectively. Their average recoveries at spiked levels of 0.01， 0.10 and 0.50 μg/mL were 92.1%～107.9% and 91.4%～105.7% with relative standard deviations of 2.4%～10.4% and 2.6%～11.3%， respectively. This method was simple， efficient， quick， convenient， safe， clean， low-cost， and can be suitable for the analysis of prochloraz and 2，4，6-trichlorophenol residues in fruit vegetables.

Key words： QuEChERS; gas chromatography; prochloraz; 2，4，6-trichlorophenol; vegetables

咪鮮胺（Prochloraz，PCZ）是一種咪唑類廣譜高效殺菌劑，其作用機(jī)理主要是通過抑制麥角甾醇的生物合成，破壞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)功能，從而達(dá)到殺菌目的，對蔬菜多種子囊菌和半知菌引起的病害具有很好的保護(hù)和治療作用，廣泛用于防治蔬菜的白粉菌、葉斑病、炭疽菌等多種病害[1]。PCZ在環(huán)境中最終都降解為2，4，6-三氯苯酚（TCP）[2]，雖然PCZ屬低毒殺菌劑，但最終產(chǎn)物TCP生物降解性差，易造成嚴(yán)重的環(huán)境污染，并被疑為強(qiáng)致癌物，對人類的健康造成潛在威脅[3]，其殘留問題受到越來越多的關(guān)注。因此，在進(jìn)行PCZ殘留研究時應(yīng)同時檢測PCZ和TCP的含量。

國內(nèi)外對于PCZ和TCP檢測的前處理大多數(shù)是在210～240 ℃下樣品提取液與吡啶鹽酸鹽發(fā)生水解反應(yīng)，將PCZ及其代謝物全部轉(zhuǎn)化為TCP，經(jīng)萃取后采用磺化法凈化，檢測TCP的含量[4]。該方法操作復(fù)雜費(fèi)時，且吡啶鹽酸鹽毒性較大，對試驗人員的健康和環(huán)境安全造成威脅。QuEChERS方法為這一問題提供了新的解決途徑，該方法是一種快速、簡單、便宜、可靠和安全的樣品前處理方法，用N-丙基乙二胺（PSA）去除組分中的色素，以無水硫酸鎂去除水分，適用于蔬菜中PCZ和TCP殘留的提取和凈化，實用性強(qiáng)[5]。目前，對PCZ和TCP的檢測方法有氣相色譜法（GC）[6]、液相色譜法（LC）[7]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS）[8]、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（LC-MS）[9，10]等，主要涉及的樣品有水果[11]、谷物[12]、油料作物[13]、中藥材[14]和土壤[15]等，對于蔬菜中PCZ和TCP殘留分析的方法較少。基于質(zhì)譜法儀器昂貴，LC靈敏度相對GC低，本研究采用GC法，結(jié)合QuEChERS凈化技術(shù)建立了一種安全簡便的分析方法，測定蔬菜中PCZ和TCP殘留量，以期達(dá)到快速、便捷、環(huán)保的目的。

1? 材料與方法

1.1? 材料與儀器

無水硫酸鎂（分析純，使用前650 ℃下灼燒4 h，備用），天津市凱信化學(xué)工業(yè)有限公司;乙酸鈉（分析純），天津市光復(fù)精細(xì)化工研究院;PSA，天津博納艾杰爾科技有限公司;乙酸（分析純），國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;甲醇、乙腈（色譜純），北京百靈威科技有限公司;丙酮（色譜純），西隴科技股份有限公司;甲醇中PCZ溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（25165XM，純度98.4%，濃度為100 μg/mL）、甲醇中TCP溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（26233XM，純度99.5%，濃度為100 μg/mL），北京振翔科技有限公司。

2010 Plus氣相色譜儀（μECD），日本島津公司; J-TDL-60B型離心機(jī)，無錫市瑞江分析儀器有限公司;JJ500型電子天平，常熟市雙杰測試儀器廠。

1.2? 方法

1.2.1? 氣相色譜條件? SH-Rtx-1701毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）;進(jìn)樣口溫度280 ℃，檢測器溫度300 ℃;升溫程序：初始溫度100 ℃保持1 min，以25 ℃/min升至200 ℃保持1 min，再以25 ℃/min升至270 ℃保持12 min;載氣流量3 min/L，進(jìn)樣量1.0 μL，分流比10∶1。

1.2.2? 樣品處理? 稱取10.00 g樣品于50 mL離心管，加10 mL 乙酸酸化乙腈（1∶99，V/V），搖勻，加3.0 g無水硫酸鎂，1.0 g乙酸鈉，渦旋1 min，4 000 r/min離心5 min。取上清液5 mL于15 mL離心管，加1.0 g 3∶1無水硫酸鎂∶PSA混合液，渦旋1 min，? ? 4 000 r/min離心5 min，取1 mL上清液過膜，待測。

1.2.3? 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制? 分別準(zhǔn)確移取1 mL 100 μg/mL的PCZ和TCP標(biāo)準(zhǔn)品溶液至10 mL容量瓶中，用甲醇定容，配成兩種10.0 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，分別吸取以上兩種標(biāo)準(zhǔn)儲備液適量，并用“1.2.2”萃取液稀釋至質(zhì)量濃度為0.002、0.005、0.010、0.020、0.050、0.100、0.200、0.500、1.000 μg/mL系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 萃取溶劑的選擇

以辣椒、黃瓜、結(jié)球甘藍(lán)、豇豆為基質(zhì)添加0.1 μg/mL PCZ和TCP混合標(biāo)準(zhǔn)溶液按照“1.2.2”方法處理，考察乙腈和乙酸酸化乙腈對樣品中PCZ和TCP回收率的影響。由表1可知，PCZ在乙腈和乙酸酸化乙腈中的回收率為95.4%～107.3%，兩者對PCZ均有較好的提取效果，而TCP在乙腈中的回收率為80.6%～90.2%，在乙酸酸化乙腈中的回收率為92.6%～105.3%，說明TCP在乙酸酸化乙腈中的回收率比乙腈好。這是由于TCP具有較強(qiáng)的極性和酸性，其羥基上的H+與環(huán)境中的Na+進(jìn)行交換從而生成2，4，6-三氯苯酚鈉，而2，4，6-三氯苯酚鈉在水相中的溶解度大于在有機(jī)相中的溶解度，有機(jī)相無法對樣品基質(zhì)中的2，4，6-三氯苯酚鈉進(jìn)行有效萃取，加入乙酸酸化乙腈，存在大量的H+，促進(jìn)樣品基質(zhì)中2，4，6-三氯苯酚鈉形成TCP，從而提高提取率。因此，本研究選擇乙酸酸化乙腈溶液作為PCZ和TCP的提取劑。

2.2? 無水硫酸鎂和PSA用量的優(yōu)化

本研究中使用3∶1的無水硫酸鎂和PSA凈化萃取液，PSA可去除萃取液中色素和其他干擾物質(zhì)，無水硫酸鎂去除萃取液中少量的水分，有助于加強(qiáng)PSA的凈化效果。為了獲得最佳的凈化效果，按“1.2.2”方法在結(jié)球甘藍(lán)、辣椒、黃瓜、豇豆中添加0.1 μg/mL PCZ和TCP混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別以0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 g無水硫酸鎂和PSA凈化萃取液，觀察不同用量的無水硫酸鎂和PSA對萃取液的凈化效果。結(jié)果表明，隨無水硫酸鎂和PSA用量的增加萃取液凈化效果越好，回收率為79.4%～104.7%。由圖1可知，當(dāng)無水硫酸鎂和PSA的量達(dá)到1.0 g后TCP和PCZ的回收率基本不變。綜合凈化效果和回收率，本研究選擇1.0 g無水硫酸鎂和PSA凈化萃取液。

2.3? 線性范圍和檢出限

取“1.2.3”配制的PCZ和TCP標(biāo)準(zhǔn)混合工作液，在最佳的試驗條件下檢測PCZ和TCP（圖2）。以進(jìn)樣質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)，得到PCZ和TCP的線性方程分別為Y=3 256 600X-5 393.7和Y =6141 770X-4 616.3，其相關(guān)系數(shù)分別為0.998 6和0.999 3，表明PCZ和TCP分別在0.005～1.000 μg/mL和0.002～1.000 μg/mL范圍內(nèi)的線性關(guān)系均良好（圖3）。以3倍信噪比（S/N=3）確定PCZ和TCP檢出限分別為0.001 0 mg/kg和0.000 6 mg/kg，滿足殘留定量分析要求。

2.4? 回收率和精密度

按照“1.2.2”方法分別對結(jié)球甘藍(lán)、辣椒、黃瓜、豇豆添加0.02、0.10、0.50 μg/mL 3個水平的PCZ和TCP標(biāo)準(zhǔn)溶液。由表2可知，在3個添加水平下PCZ和TCP的回收率分別為92.1%～107.9%和91.4%～105.7%，RSD分別為2.4%～10.4%和2.6%～11.3%，表明該方法具有較高的準(zhǔn)確度和精密度。因此，試驗中開發(fā)的方法滿足TCP和PCZ分析的要求，可用于結(jié)球甘藍(lán)、辣椒、黃瓜和豇豆等樣品中TCP和PCZ殘留的檢測。

2.5? 實樣分析

按“1.2.2”樣品處理步驟，以市售的結(jié)球甘藍(lán)、辣椒、黃瓜、豇豆、山藥、西紅柿、韭菜、花椰菜等8種40個代表性蔬菜樣品進(jìn)行定性定量分析。由表3可知，辣椒和西紅柿2個樣品檢出PCZ和TCP 殘留，其余樣品均未檢出，對樣品重復(fù)檢測5次，PCZ和TCP分別為0.018～0.092 mg/kg和0.049～0.131 mg/kg。

3? 結(jié)論

本研究采用QuEChERS-GC法對蔬菜中咪鮮胺及其代謝物2，4，6-三氯苯酚殘留量檢測技術(shù)進(jìn)行了分析。該方法前處理簡便快速、選擇性好、靈敏度高、抗干擾能力強(qiáng)，分別在0.005～1.000 μg/mL和0.002～1.0 μg/mL具有良好的線性響應(yīng)，且在0.02、 0.10、0.50 μg/mL添加水平下，兩種農(nóng)藥均有較好的回收率，表明該方法符合農(nóng)藥殘留分析的要求，可作為大批量蔬菜中咪鮮胺及其代謝物2，4，6-三氯苯酚殘留檢測的可靠方法。

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