青海省共和縣藏羊住肉孢子蟲感染情況調查

(青海大學農牧學院,青海西寧 810016)

住肉孢子蟲病是由肉孢子蟲科肉孢子蟲屬(Sarcocystis)原蟲引起的一種食源性人獸共患寄生蟲病,呈現世界性分布,感染率較高[1]。住肉孢子蟲具有致病性,寄生在宿主肌肉中形成包囊,可引起貧血、厭食、消瘦、發熱、肌肉炎癥、乳產量下降、流產,甚至死亡。蟲體包囊在肌肉中寄生使大量肉品廢棄,造成畜牧業經濟損失,同時也危及到人類肉食品安全。青海地區住肉孢子蟲病流行情況較為嚴重,感染率為53.7%～100%,每0.1 g 肉樣中包囊感染強度為1～997 個[2];共和縣為青海省海南藏族自治州州屬五縣之一,是青海藏區人口較多、地域遼闊、畜牧業經濟比重較大的一個縣,為了解共和縣藏羊住肉孢子蟲感染情況,為今后共和縣藏羊住肉孢子蟲病的防控、肉品質量安全工程及防治工作提供基礎數據。

1 材料與方法

1.1 材料 2017 年10 -12 月,隨機采集共和縣屠宰場藏羊食道肌、膈肌、心肌3 個部位肉樣各10 g,共收集食道肌512 份,膈肌32 份,心肌32 份。編號分裝于自封袋中,-20 ℃保存待檢。

1.2 方法

1.2.1 壓片鏡檢 剝離肉樣(膈肌、心肌、食道肌)表面肌膜、脂肪,肉眼觀察肌肉表面是否存在白色米粒狀或點狀疑似蟲體存在。隨機稱取各肉樣1 g,順肌纖維方向剪碎,用載玻片壓至半透明狀態,光學顯微鏡下進行住肉孢子蟲包囊檢查,計數。任何肉樣中發現住肉孢子蟲包囊則判定為陽性,未發現包囊則判定為陰性。

1.2.2 染色切片 根據壓片鏡檢結果,選擇感染率較高的肉樣進行H.E.染色,切片觀察蟲體形態,大小。

甲醛固定→組織修塊→50%乙醇溶液脫水→75%乙醇溶液過夜→梯度乙醇溶液脫水→二甲苯脫乙醇→樣品浸蠟→組織包埋→切片→攤片→烘片→二甲苯脫蠟→梯度乙醇溶液二甲苯→自來水脫乙醇→蘇木素浸染→流水沖洗→伊紅染色→梯度乙醇脫水→二甲苯脫乙醇→封片。

1.2.3 數據統計 感染率=(樣品陽性數/受檢樣品總數) ×100%

2 結果

2.1 壓片鏡檢結果 本次調查的青海省共和縣藏羊食道肌512 份,膈肌32 份,心肌32 份。肉眼可發現食道肌中存在明顯的住肉孢子蟲包囊,如中插彩版圖1 中箭頭所示;蟲體包囊壓較大(平均大小4.47 mm×2.59 mm),為白色橢圓狀或米粒狀。壓片鏡檢藏羊膈肌、心肌中住肉孢子蟲包囊,如中插彩版圖2、圖3 中箭頭所示,視野中住肉孢子蟲包囊順肌纖維寄生,大多呈長梭形、柳葉形,顏色呈乳白色或者灰白色,內部為顆粒狀。

圖1 食道住肉孢子蟲(肉眼觀察)

圖2 膈肌住肉孢子蟲 (100 ×)

圖3 心肌中住肉孢子蟲 (100 ×)

2.2 藏羊住肉孢子蟲感染情況 青海省和縣藏羊住肉孢子蟲感染情況如表1 所示。此次隨機抽樣調查的576 份肉樣中172 份判斷為陽性,感染率為29.86%。不同部位感染率由高到低依次為心肌(96.88%)、膈肌(87.5%)、食道肌(22.07%); 172份樣品中123 份輕度感染(包囊數<200),占檢出總數的71.51%;48 份為中度感染(包囊數為200～500),占檢出總數的27.91%;僅有1 份為重度感染(包囊數>500),占檢出總數的0.58%。說明共和縣屠宰藏羊的住肉孢子蟲感染普遍,多為輕度與中度感染。

表1 食道肌、膈肌、心肌住肉孢子蟲感染情況

2.3 膈肌、心肌H.E.染色結果 陽性樣品膈肌、心肌經H.E.染色,結果如中插彩版圖4、5 所示。圖中肌肉呈紅色,蟲體為藍色,蟲體呈橢圓形或柳葉狀,與肌肉纖維方向平行,外部包被肌肉纖維,內部呈顆粒狀。中插彩版圖4 所示為藏羊膈肌住肉孢子蟲包囊,平均大小150 mm ×30 μm。中插彩版圖5 所示為藏羊心肌住肉孢子蟲包囊;平均大小120 mm×35 μm。

圖4 膈肌住肉孢子蟲 (40 ×)

圖5 心肌中住肉孢子蟲 (40 ×)

3 討論

此次調查結果顯示,青海省共和縣藏羊住肉孢子蟲感染率高,感染情況嚴重,陽性檢出率為29.86%;不同部位感染率由高到低依次為心肌(96.88%)、膈肌(87.5%)、食道肌(22.07%);韓樂等[3]對青海六縣綿羊住肉孢子蟲感染情況調查結果(共和縣感染率55%、感染強度35 個/g)比較發現感染率下降;馮成蘭等[4]對共和地區屠宰牲畜住肉孢子蟲感染情況調查結果心肌(69.76%)、膈肌(68.90%)、食道肌(76.79%)相比較,發現心肌與膈肌的感染率增高,食道肌感染率下降。劉永蘭等[5]調查發現共和地區羊住肉孢子蟲感染率為13.24%,感染強度40 個/g,與之相比感染率升高。巨金玲等[6]對青海部分地區藏羊膈肌住肉孢子蟲檢測結果(感染率70.73%、感染強度31 個/g)相比感染率下降。本調查被檢的172 份樣品中輕度感染占71.51%;中度感染為27.91%;重度感染為0.58%。從多個調查研究結果可分析得出,共和縣屠宰藏羊的住肉孢子蟲感染普遍,藏羊或綿羊感染率并不相同;不同時間、不同部位感染率出現波動,此情況為正常現象;其調查結果與被檢飼養羊群是否投喂驅蟲藥物,中間宿主數目的變化等有關。

本次調查僅通過肉眼及光學顯微鏡觀察肉樣中蟲體形態,測量蟲體由大到小分別為食道肌(4.47 mm×2.59 mm)、膈肌(150 mm ×30 μm)、心肌(120 mm ×35 μm)。該方法只適于蟲體形態結構的初步觀察,無法根據其特點鑒定種屬;需通過組織學方法結合分子生物學對蟲體進行鑒定。2016年Damboriaenna[7]發現綿羊食道中有大量白色橢圓形巨型住肉孢子蟲包囊,與本次調查的藏羊食道住肉孢子蟲形態、大小相似,但本次試驗僅通過肉眼觀察蟲體形態,無法以此為依據判定該蟲為巨型住肉孢子蟲。膈肌、心肌中住肉孢子蟲在光學顯微鏡下觀察,視野中蟲體形態呈紡錘形、圓柱形、卵圓形等,顏色呈灰白色、乳白色,且膈肌蟲體較大于心肌(150mm×30 μm>120mm×35 μm)。

目前,住肉孢子蟲病無特效治療藥物,因此該病的防治主要依靠預防。青海共和地區牛羊住肉孢子蟲感染率高與當地農牧民生活習慣和飲食習慣有關;如食用開鍋肉、將屠宰牛羊臟器直接喂終末宿主犬,終末宿主與中間宿主牛羊接觸,使住肉孢子蟲形成完整的生活史,進行傳播,造成惡性循環。所以生活衛生和飲食衛生方面應引起足重視并加強對牧場的管理。