FAME全自動酶免分析儀吐板后不同處理方式的結果探討

虞莉，黎金風

揚州市中心血站，江蘇 揚州 225007

引言

Microlab FAME全自動酶免分析儀是瑞士HAMILTON公司生產的全自動酶免分析系統，因操作過程更加規范化、標準化、自動化程度較高、重復性好等特點，實驗關鍵環節受到嚴格控制，大大提高實驗的精密度和特異性，避免了人為因素造成的偶然誤差，被廣泛應用于全國各采供血機構的血液篩查。但是，使用過程中經常會碰到因為設備本身感應故障，吸液量不足，標本血清含有纖維蛋白造成吸液針堵塞，洗液或管道內有結晶等造成注液針堵塞等問題而造成實驗中斷，從而使酶標板被吐出[1-3]，即發生吐板現象。最終的實驗結果與不同的吐板原因沒有直接關系，而實驗中斷后剩余步驟的處理方式會直接影響實驗結果。正常情況下，操作人員會把未完成的實驗按照未完成的程序，繼續插入FAME系統的工作計劃表，繼續使用FAME完成實驗，所得結果優于手工操作[3]。在實際工作中，往往會由于FAME內的酶標板比較多、洗板時間靠近等原因，使得后插入FAME系統的酶標板由于時間上錯不開，儀器不允許立刻插入剩余實驗程序，等待時間較長。由于孵育時間是ELISA的關鍵因素之一，酶標板孵育時間過長，整板結果都會受到影響。如何能最大程度地減少因吐板對實驗結果的影響，提高結果的準確度和可信度，成為當前各采供血機構實驗室關注的熱點。本文通過對FAME系統吐板后的幾種不同處理方法進行實驗研究，旨在探索一種較為科學、實用的處理方法，取得了較好的效果，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源

所有檢測樣本均來自我站商品化標準物質及試劑內部對照質控品，均在有效期內使用。

1.2 儀器與設備

Microlab STAR CH-8全自動加樣系統（瑞士HAMILTON生產），Microlab FAME24/20全自動酶免系統（瑞士HAMILTON公司生產），Zenyth340全自動酶標分析儀（美國伯樂公司生產），BIO-RAD1575全自動洗板機（美國伯樂公司生產）等。

1.3 試劑與方法

1.3.1 試劑

ELISA法TP試劑由珠海麗珠生物科技有限公司提供（批號：2018010208）；血篩四項J標準物質由北京康徹思坦生物技術有限公司提供（批號：201801001），濃度為6 mIU；陰、陽性對照采用試劑盒配套內部對照品。

1.3.2 方法

按FAME吐板的不同階段，處理方法分A、B兩組，A組為在第1次孵育實驗結束后，實施人工干預吐板；B組為在第2次孵育實驗結束后，實施人工干預吐板（通過FAME操作軟件進行“中斷實驗”操作，模擬吐板的發生）；每組吐板后的處理均采用方法1～3進行。方法1：在FAME中選擇相應的程序，重新插入后續實驗步驟，完成實驗。方法2：使用洗板機洗板后放入FAME孵育塔，手工完成后續實驗步驟。方法3：使用洗板機洗板，放入帶有濕盒的恒溫水浴箱，手工完成后續實驗步驟。對照組為FAME正常的孵育、洗板、讀板過程。所有操作均嚴格按照試劑操作說明書進行。具體加樣及實驗過程如下。

（1）加樣。利用STAR全自動加樣儀對ELISA法TP酶標板分別加16份陰性對照、16份陽性對照，16份質控標準物質和8份標準物質倍比稀釋（1:1～1:128）進行加樣，其他陰陽性對照和室內質控品按試劑盒說明書要求加樣，共加4塊酶標板。

（2）A組試驗。將上述4塊酶標板加樣完成后立即放入FAME內進行實驗。第1次孵育實驗結束后，實施人工干預，模擬3塊板全部吐出，然后按上述方法1～3完成實驗，未吐板的酶標板自始自終在FAME中完成所有實驗步驟，作為對照組。

（3）B組試驗。加樣步驟與A組實驗相同，共加3塊酶標板，在第2次孵育實驗結束后，實施人工干預，模擬3塊板全部吐出，然后用與A組相同的3種方法完成剩余實驗步驟。

以上實驗連續檢測5天，所有操作均嚴格按照試劑說明書的要求進行。

1.4 計算方法

靈敏度（真陽性率）＝真陽性/（真陽性+假陰性）×100%；特異度（真陰性率）＝真陰性/（真陰性+假陽性）×100%；精密度以變異系數（CV）表示，CV=（標準偏差SD/平均值Mean）×100%。分別計算上述各組試驗靈敏度、特異度、精密度、最低檢出濃度等指標。

1.5 統計學分析

采用SPSS 18.0統計軟件包進行統計學分析，計量資料采用表示，組間項目均數比較采用t檢驗，定量資料采用χ2檢驗進行比較，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 實驗結果

按照FAME吐板的不同階段，分A、B兩組實驗，每組再分別利用方法1～3完成后續實驗，然后分別計算各組實驗結果均值、精密度、特異度、靈敏度和最低檢出濃度。A、B兩組分別與對照組比較，A、B兩組的方法3與對照組比較有明顯差異（P＜0.05）。A、B兩組相比較，指標差異均無統計學意義（P＞0.05），但A組方法3特異度未達100%。檢測ELISA法TP試驗結果，見表1。

表1 FAME不同階段吐板后不同方法檢測ELISA法TP試驗結果

3 討論

全自動酶免分析系統在獻血者血液篩查中應用，極大地提高了工作效率，保證了血液檢測質量，其高通量、規范化、自動化的操作優點，也越來越受到各采供血機構檢測實驗室的信賴[1-4]，降低了失控率，提高了結果的精確性和可信性，同時解放了勞動力。但在實際工作中時常會出現吐板等問題，若處理不當或不及時則會對結果造成影響，甚至失控，造成結果不可信或實驗失敗，既浪費了試劑，又影響了實驗結果的及時發布。所以，正確、及時地處理FAME系統吐板后的操作是保證實驗結果準確可靠的前提和基礎，也是檢驗工作者應具備的操作技能。

本文結果顯示，A、B兩組相比較，指標差異均無統計學意義（P＞0.05）。A組中方法3特異度為98.75%（符合國家規定的≥95%），檢測陰性標本時發生假陽性結果，說明在洗板機洗板和手工加樣過程中，易發生洗板不徹底引起的假陽性結果。A、B兩組分別與對照組比較，在檢測結果均值、精密度方面，A、B兩組方法1和方法2均與對照組差異無統計學意義（P＞0.05），A、B兩組方法3結果均值較對照組明顯偏低，精密度較差，差異有統計學意義（P＜0.05），說明酶標板在FAME孵育塔中孵育較恒溫水浴箱孵育效果好，孵育時間精確，溫度控制更加穩定，而溫度對ELISA實驗是一個很重要的影響因素。最低檢出濃度方面，A、B兩組方法1和方法2均較方法3檢出濃度更低，靈敏度更高，可能與方法3在恒溫水浴箱的孵育時間、溫度以及手工洗板、加樣等[4-5]人為因素影響較多有關。王宏[6]報道，儀器法質控指標均優于手工法，且質控值的擺動范圍窄，SD和CV均小于手工法，且在控率也明顯高于手工法，雖然與本文結結果基本一致，但該報道未明確FAME的吐板階段和具體的處理方法。影響實驗結果的因素除與上述有關外，還與操作人員素質、操作技能、設備的定期維護、實驗環境、標本、振蕩方式等[7-16]多方面有關，在實際工作過程中應綜合考慮，以達到實驗的最佳效果。

需特別說明的是，由于實驗室條件限制，未能采用試劑確認評價專用血清盤，最低檢出濃度的檢測使用的是倍比稀釋的質控標準物質，其理論值與實際檢測值存在一定的誤差，還有待今后的進一步研究。

綜合上述，FAME全自動酶免系統吐板后，盡可能首選在FAME中進行后續實驗，假如儀器操作系統允許立即進行剩余實驗，則直接插入到FAME中進行后續實驗。在實際工作中，往往會由于FAME內的酶標板比較多，洗板時間靠近，后插入FAME系統的酶標板由于時間上錯不開，儀器不允許立刻插入剩余實驗程序，則等待時間過長（超過10 min），可先選用洗板機洗板，手工加試劑后再放入FAME孵育槽孵育。手工加試劑時，盡量標準化操作，避免人為因素的影響，保證實驗結果的準確、可靠，從而確保血液質量和輸血安全。