Fascin-1蛋白與HSPB1蛋白在直腸癌組織中的表達特點及意義

雷哲，高改云，倪猛，楊旭

(南陽市中心醫院，河南 南陽 473400)

隨著人們飲食習慣的改變，結直腸癌的發生率明顯的上調，流行病學研究證實，結直腸癌的發病率接近373～482/10萬人左右[1]。臨床上結直腸癌治療后的五年內病死率仍然超過35%，治療后的無瘤生存時間仍然不足48個月[2]。

不同的腫瘤相關蛋白能夠影響結直腸上皮黏膜腺體細胞的異常病變，促進了消化系統惡性腫瘤的發生。Fascin-1蛋白是重要的肌動蛋白相關因子，其能夠提高癌細胞的變形能力，進而提高癌細胞對于臨近正常上皮組織的浸潤風險；HSPB1蛋白是熱休克蛋白家族成員，其表達濃度的改變能夠影響癌細胞的增殖和耐藥過程，提高癌細胞對于基底膜組織的浸潤風險。部分研究者報道了Fascin-1蛋白在卵巢癌或者食管癌患者病灶組織中的表達情況，認為高表達的Fascin-1蛋白能夠顯著促進卵巢癌患者臨床分期的進展，降低放化療的敏感性[3，4]，但對于 Fascin-1與 HSPB1蛋白與結直腸癌的關系研究不足。為了揭示Fascin-1與HSPB1蛋白與結直腸癌發病的關系，本次研究收集了相關結直腸癌病例，探討了Fascin-1與HSPB1蛋白的表達特點及與患者臨床病理特征的關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取我院2015年3月-2017年5月收集的100例結直腸癌術后組織 （病灶組）、50例符合標準的為癌旁組織標本（癌旁組）。病灶組，年齡 39～79歲，平均為 56.5±12.8歲，男 60例、女40例，TNM分期：Ⅰ期18例、Ⅱ期30例、Ⅲ期38例、Ⅳ期14例；淋巴結轉移63例；組織分化：高分化26例、中分化37例、低分化37例；結腸癌57例、直腸癌43例。癌旁組，年齡42～77歲，平均為57.8±13.0歲，男28例、女22例。兩組研究對象的年齡、性別比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。納入標準：⑴結腸癌、直腸癌的診斷以病理學檢查結果作為標準[5]；⑵結直腸癌患者獲取癌組織標本前未進行放化療、免疫治療；⑶本次研究獲得的病理學標本均來源于術后；⑷患者年齡＜80歲。排除標準⑴未經病理學證實；⑵轉移性腫瘤；⑶既往伴有風濕免疫系統疾病；⑷既往具有開腹手術病史或長期炎癥病史。

1.2 免疫組化檢測方法 所有組織標本經石蠟包埋后作連續切片，厚度約為4mm，采用免疫組化鏈霉卵白素一生物素復合體法 (strep avidin-biotin complex，SABC法)染色，二氨基聯苯胺(diamionben zidene，DAB)顯色。Fascin-1蛋白與HSPB1蛋白通用型二抗以及SP試劑盒和DAB顯色盒均購自北京中杉金橋生物技術開發公司。以陽性片及PBS代替一抗分別作為陽性及陰性對照，高倍顯微鏡下觀察Fascin-1蛋白與HSPB1蛋白的表達情況，具體染色步驟嚴格按照SP試劑盒說明書進行操作。

1.3 免疫組化判斷標準 免疫組化結果判定：Fascin-1蛋白陽性著色定位于細胞質、HSPB1蛋白陽性著色定位于細胞質及細胞膜，陽性著色呈黃色、棕黃色、褐色表達，⑴根據著色強度：0分為無色、1分為淡黃色、2分為棕黃色、3分為褐色、黑色；⑵根據陽性細胞比例：陽性細胞數目所占比例≤10%為1分、陽性細胞所占比例11%～50%為2分、陽性細胞數51%～75%為3分、陽性細胞數所占比例＞75%為4分，兩種積分相乘總分＜3分為陰性、≥3分為陽性。

2 結果

2.1 兩組標本中的Fascin-1蛋白與HSPB1蛋白檢測結果比較 病灶組中的Fascin-1蛋白與HSPB1蛋白陽性表達率56.00%、78.00%均顯著的高于癌旁組的5.00%、15.00%，差異具有統計學意義（P＜0.05）；見表 1。

表1 兩組標本中的Fascin-1蛋白與HSPB1蛋白檢測結果比較[n（%）]

2.2 結直腸癌組織中的Fascin-1蛋白與HSPB1蛋白相關關系 結直腸癌組織中的Fascin-1蛋白與HSPB1蛋白陽性表達呈顯著的正相關關系（Spearman R=0.502，P＜0.000）；見表 2。

表2 Spearman秩相關分析結果

2.3 結直腸癌組織中的Fascin-1蛋白與HSPB1蛋白表達與患者臨床病理學特征的關系 結直腸癌組織中的Fascin-1蛋白在不同TNM分期、是否發生淋巴結轉移組織中陽性表達率差異具有統計學意義（P＜0.05）；見表 3。

表3 Fascin-1蛋白表達與結直腸癌患者臨床病理學特征的關系

結直腸癌組織中的HSPB1蛋白在不同TNM分期、不同分化程度、是否發生淋巴結轉移組織中陽性表達率差異具有統計學意義 （P＜0.05）；見表4。

表4 HSPB1蛋白表達與結直腸癌患者臨床病理學特征的關系

3 討論

在持續性的病理性因素刺激下，結直腸腺體細胞的異常增殖風險可以顯著上升。特別是在合并有家族性腸道息肉的人群中，結直腸癌的發生風險更高，臨床病死率等生存預后指標更差[6]。長期的臨床隨訪觀察研究認為，結直腸癌的五年生存率不足35%[7]，手術、放化療等綜合性治療措施治療后的無瘤生存時間不足48個月[8]。免疫治療或者靶向治療近年來被認為能夠顯著改善惡性腫瘤患者的生存預后，改善結直腸癌患者的病情轉歸。而本次研究對于相關腫瘤相關蛋白的研究，能夠對于結直腸癌的發生和發展的相關標記物的篩選提供一定的參考。

Fascin-1能夠通過提高肌動蛋白的活性，促進癌細胞的粘附和轉移過程。Fascin-1蛋白還能夠通過激活多種腫瘤相關生物學信號通路，提高癌細胞DNA上游的轉錄活性，增強癌細胞的浸潤能力。相關文獻研究者認為，Fascin-1能夠顯著提高結直腸癌患者的發病風險，導致腫瘤患者放化療治療敏感性的下降[9]，但對于其與患者臨床病理特征的關系研究不足；HSPB1是熱休克蛋白家族的重要成員，HSPB1的高表達能夠通過影響到癌細胞的周期調控，提高癌細胞G1/S期的細胞比例，進而影響到早期惡性腫瘤的發生過程。基礎方面的研究也認為，HSPB1的高表達能夠誘導癌細胞的分化成熟障礙，導致低分化或者中低分化的細胞比例的提高[10]。部分研究探討了HSPB1蛋白的表達與鼻咽癌的關系，認為HSPB1蛋白表達濃度的上升能夠顯著促進鼻咽癌患者淋巴結轉移或者臨床分期的進展[11]，但缺乏對于HSPB1與結直腸癌的關系研究。

免疫組化的結果分析可見，Fascin-1與HSPB1在結直腸癌患者病灶組織中的表達陽性率均明顯的上升，高于癌旁組織，差異較為明顯，提示了Fascin-1與HSPB1蛋白均可能參與到了結直腸癌的病情進展過程，通過回顧分析相關的臨床文獻，筆者認為Fascin-1與HSPB1的高表達對于結直腸癌的發生影響可能與下列幾個方面的因素有關[12-14]：⑴Fascin-1蛋白的上升能夠提高癌細胞的浸潤能力，導致癌細胞對于腸道黏膜基底膜組織的突破風險的上調；⑵HSPB1蛋白的高表達能夠提高癌細胞DNA的擴增速度，增加癌細胞的持續性異常核分裂的發生。戚峰等[15]研究者也認為，在結直腸癌患者中，Fascin-1基因表達水平可平均上升35%以上，特別是在短期內腫瘤臨床分期進展較快或者病灶明顯增大的患者中，Fascin-1基因表達水平可進一步的上升。相關關系分析可見，Fascin-1與HSPB1的表達具有一定的相關關系，提示二者在促進結直腸癌的發生發展過程中可能發揮了一定的協同作用，但具體的內在機制仍然需要后續基礎研究的探索。臨床病理特征的分析研究可見，在發生了淋巴結轉移或者臨床分期較晚的患者中，Fascin-1蛋白的表達陽性率可顯著的上升，提示了Fascin-1蛋白與結直腸癌患者的臨床病理特征密切相關，這主要由于Fascin-1蛋白的高表達能夠影響到癌細胞對于臨近正常組織的浸潤能力，提高癌細胞對于淋巴結內皮細胞的粘附能力等有關。而在發生了淋巴結轉移、臨床分期較晚或者癌細胞分化程度較差的患者中，HSPB1的表達陽性率可進一步的上升，提示了HSPB1蛋白的表達與結直腸癌患者的臨床病理特征同樣具有密切的關系，這主要由于HSPB1蛋白的表達能夠影響到癌細胞生物學特征的改變，導致癌細胞的分化成熟異常等病理機制的進展。

綜上所述，Fascin-1與HSPB1在結直腸癌患者中表達明顯上升，同時二者的表達與腫瘤患者的臨床病理特征密切相關。