牛奶中氯霉素殘留量LC-MS/MS 快速測定方法

李 琴 王宇坤 仵軍紅

（鄭州市食品藥品檢驗所，河南鄭州 450006）

氯霉素屬胺苯醇類抗生素，在我國養(yǎng)殖行業(yè)濫用現(xiàn)象比較嚴(yán)重，而氯霉素在畜禽體內(nèi)殘留，給食品安全帶來很大隱患，同時對人類健康構(gòu)成了潛在的危害。因此研究一種快速、準(zhǔn)確的檢測氯霉素殘留量的方法具有重大意義。目前動物源性食品中氯霉素殘留量的測定方法有多種，如液相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法等，而液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)因其靈敏度高、適用范圍寬、易確證而被廣泛應(yīng)用在有害物質(zhì)殘留分析中。

本方法采用液質(zhì)聯(lián)用的方法直接分析牛奶中氯霉素的殘留量，無需衍生化，采用內(nèi)標(biāo)法二級質(zhì)譜定性定量，能準(zhǔn)確快速的對牛奶中氯霉素殘留量進(jìn)行分析。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

氯霉素標(biāo)樣，Dr.GmbH 德國；甲醇、乙酸乙酯、乙腈、正己烷，均為色譜級，美國賽默飛公司；娃哈哈純凈水，杭州娃哈哈有限公司；氯化鈉，分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

Waters TQ-S 液質(zhì)聯(lián)用儀，色譜柱為Waters ACQUITY UPLCBEH C18（2.1 mm×50 mm×1.7 μm），美國Waters；TD4Z-WS 高速離心機，湖南湘立科學(xué)儀器有限公司；Thermo Scientific Dionex ASE 350 加速溶劑萃取儀；MS204S 精密電子天平，METTLER TOLEDO 公司。

1.3 儀器工作條件

色譜條件：流動相乙腈∶水=50∶50，流速0.2 mL/min，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量10 μL，采集時間5 min。

質(zhì)譜條件：LC-MS 接口為電噴霧接口（ESI）負(fù)離子模式，多反應(yīng)監(jiān)測（MRM），毛細(xì)管電壓1.8 kV，錐孔電壓20V，脫溶劑溫度500 ℃，錐孔流速150 L/h，霧化器流速450 L/h，掃描以m/z 321/152、m/z 321/257 離子對定性，以m/z 321/152定量，駐留時間0.3 s。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的配制

準(zhǔn)確稱取10 mg 氯霉素標(biāo)樣于燒杯中，用甲醇溶解并定容至100 mL，得到100 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液，逐步稀釋，得100 ng/mL 標(biāo)準(zhǔn)儲備液。

氯霉素氘代內(nèi)標(biāo)（氯霉素-D5）儲備溶液：100 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液。

1.5 樣品前處理

稱取牛奶試樣約10 g 于50 mL 離心管中，加乙酸乙酯20 mL，振蕩10 min，4 500 r/min 離心10 min，取乙酸乙酯層于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)管中，反復(fù)提取2 次，合并提取液，于45 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，用4%氯化鈉溶液5 mL 溶解殘留物，加正己烷重復(fù)提取2次，取下層水相過水相濾膜后進(jìn)樣分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線及相關(guān)系數(shù)

配制成氯霉素質(zhì)量濃度為0.5 ng/mL、1.0 ng/mL、2.0 ng/mL、5.0 ng/mL、10 ng/mL，氯霉素-D5 最終質(zhì)量濃度為5 μg/L 系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。將氯霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液及內(nèi)標(biāo)物氯霉素-D5注入離子源，找到與之相對應(yīng)的分子離子峰，掃描二級質(zhì)譜找到特征離子碎片信息，以氯霉素和氯霉素-D5特征離子響應(yīng)值比值為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（見圖1），回歸方程為y=0.736 097x+0.007 425 1，相關(guān)系數(shù)為0.999，說明線性良好。

圖1 氯霉素標(biāo)準(zhǔn)工作曲線圖

2.2 精密度和回收率試驗

取均質(zhì)后的空白牛奶試樣，分別進(jìn)行了1 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL 3 個水平的空白加標(biāo)樣品，做回收率試驗，每個水平做5 次平行試驗，得到平均回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差見表1。

表1 方法的精密度和回收率試驗結(jié)果（n=5）

2.3 牛奶樣品中氯霉素的測定

共檢測牛奶樣品120 批次，檢出氯霉素的共5批次，不合格率為4.2%。氯霉素標(biāo)樣和樣品的總離子色譜圖見圖2。從圖2 中可以看出，牛奶樣品中的氯霉素很好地被分離，無干擾峰，5 min 即可完成一次分析，大大縮短了檢測時間。

圖2 氯霉素標(biāo)樣和樣品的總離子色譜圖

3 結(jié)論

本試驗建立了牛奶中氯霉素殘留量的快速檢測方法，簡化了提取步驟，縮短了檢測時間。該方法具有精密度較高，重現(xiàn)性較好、分離度高等優(yōu)點，能滿足對牛奶中氯霉素殘留量的檢測要求，極大的提高了檢測效率。