基于中藥整合藥理學計算平臺的小柴胡湯抗膿毒癥的分子機制研究Δ

楊清鑫，呂紅君，王小博，任勁松，曾南#（.成都中醫(yī)藥大學藥學院藥理教研室，成都637；.四川中醫(yī)藥高等專科學校藥學院，四川綿陽 6000）

膿毒癥（Sepsis）是機體對感染的反應失調(diào)而引起的器官功能障礙[1]，其早期表現(xiàn)為高炎癥反應狀態(tài)，但應用抗細胞因子和抗炎癥介質(zhì)的治療在臨床上基本無效[2]。研究表明，膿毒癥在發(fā)生過程中促炎反應與抗炎反應同時存在，即機體在發(fā)生炎癥反應綜合征（SIRS）同時存在代償性抗炎反應綜合征（CARS）[3]，二者之間失衡導致的免疫紊亂可能是膿毒癥的主要致病機制。膿毒癥的發(fā)病率、病死率高[2]，亟需重視，故尋求新的治療方法勢在必行，調(diào)節(jié)免疫可能是其新的治療方向[3]。現(xiàn)代藥理學研究表明，小柴胡湯具有抗炎和增強人體免疫功能的作用，特別是對機體免疫反應具有雙向調(diào)節(jié)性[4]，這為治療膿毒癥提供了一個新的契機。小柴胡湯方出自東漢張仲景的《傷寒論》，由柴胡、黃芩、人參、半夏、（炙）甘草、生姜、大棗7味藥材組成，用于治療傷寒少陽證。該方組方精良、配伍嚴謹，在長期的醫(yī)療實踐中，被廣泛應用于肝膽、消化、內(nèi)分泌、血液、免疫等系統(tǒng)疾病的治療[5-6]。

中藥復方常用于中醫(yī)臨床治療中，但其物質(zhì)基礎(chǔ)與機體活動以及疾病靶標之間的關(guān)系尚不明確，仍然是亟待突破的關(guān)鍵科學問題，應從多層次、多環(huán)節(jié)對中藥復方與機體的相互作用關(guān)系進行系統(tǒng)解析。整合藥理學作為中藥現(xiàn)代化研究的新方法，為傳統(tǒng)方劑的現(xiàn)代研究與應用提供了新的思路。中藥復方的現(xiàn)代研究，需要加強整合，包括整體與局部的整合，宏觀與微觀的整合，體內(nèi) ADME（Absorption，distribution，metabolism，excretion）過程與活性評價的整合，計算與實驗的整合，也就是進行整合藥理學研究[7]。借助相關(guān)整合藥理學的平臺，可構(gòu)建小柴胡湯的“多成分-潛在作用靶標-疾病靶標-相互作用網(wǎng)絡”的多維網(wǎng)絡關(guān)聯(lián)性聯(lián)系，為其后續(xù)的開發(fā)提供參考。

1 資料與方法

1.1 資料來源

中藥整合藥理學計算平臺[TCMIP，網(wǎng)址：http：//www.tcmip.cn/，共有4大數(shù)據(jù)庫，包括中藥方劑數(shù)據(jù)庫、中藥材數(shù)據(jù)庫、中藥成分數(shù)據(jù)庫、疾病/癥狀靶標數(shù)據(jù)庫；其中中藥方劑數(shù)據(jù)庫依據(jù)《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準-中藥成方制劑》，收錄了由中醫(yī)傳承輔助系統(tǒng)整理的4 052種中成藥，主要記載方劑名稱、劑型、服用方法、方劑功效、治療中醫(yī)疾病名稱、方劑組成（包括藥材名稱、用量、方劑地位）等信息；中藥材數(shù)據(jù)庫依據(jù)2015年版《中國藥典》，收錄了400余味常用中藥材，包括每一味藥材的中文名稱、拉丁名稱、性味歸經(jīng)、基原、產(chǎn)地、采集期、功效等信息；中藥成分數(shù)據(jù)庫收錄了中藥材數(shù)據(jù)庫中中藥材所含的1.3萬余個化學成分信息，包括成分名稱、CAS號、中文名稱、英文名稱、分子式、相對分子質(zhì)量、理化性質(zhì)、藥物代謝性質(zhì)、藥理作用等；疾病/癥狀靶標數(shù)據(jù)庫整合了Drugbank（https：//www.drugbank.ca/）、OMIM（http：//www.omin.org/）、HPO（http：//human-phenotype-ontology.github.io/）、TTD（http：//bidd.nus.edu.sg/group/cjttd/）、京都基因與基因組百科全書（KEGG，http：//www.kegg.jp/）、基因本體（GO）數(shù)據(jù)庫（http：//www.geneontology.org）等數(shù)據(jù)庫資源，提供治療疾病或癥狀的藥物名稱、藥物療效和臨床應用，以及藥物靶標的基因和蛋白質(zhì)相關(guān)信息，并可按照疾病或者癥狀關(guān)鍵詞進行檢索] 由北京大品種聯(lián)盟科技咨詢有限公司搭建。

1.2 化學成分的搜集

在TCMIP中建立任務列表，在“中藥信息”項中添加“半夏”“柴胡”“大棗”“甘草”“黃芩”“人參”“生姜”7 味藥材，搜集中藥成分數(shù)據(jù)庫中收載的相關(guān)化學成分，建立小柴胡湯的化學成分數(shù)據(jù)庫。

1.3 候選靶標的搜集

進入TCMIP，在“疾病靶標信息”項中，輸入膿毒癥的英文“Sepsis”作為關(guān)鍵詞進行檢索，在疾病/癥狀靶標數(shù)據(jù)庫中收集膿毒癥的已知治療靶標。所得結(jié)果作為小柴胡湯候選靶標來源。

1.4 共有靶標的預測

進入TCMIP，然后在“中藥靶標預測”界面選取相似性分數(shù)≥0.8的所有靶標作為小柴胡湯的潛在靶標。TCMIP可采用二維結(jié)構(gòu)進行相似性搜索，并采用Tanimoto系數(shù)定義的相似度計量方法，通過與美國FDA批準的所有藥物進行化學結(jié)構(gòu)（“1.2”項篩選出的）相似性比對，進行小柴胡湯中半夏、柴胡、大棗、甘草、黃芩、人參、生姜7味藥材的共有靶標預測，并進行共有靶標分析[8-9] 。

1.5 蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的網(wǎng)絡建立

在TCMIP上進行“1.2”和“1.3”項下操作后可直接獲得小柴胡湯治療膿毒癥的候選靶標與膿毒癥靶標之間的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（PPI）信息。TCMIP主要整合了 Reactome、HAPPI、HPRD、OPHID、InAct、PDZBase、MINT、DIP等數(shù)據(jù)庫中的PPI[10]。此步驟可獲取小柴胡湯作用候選靶標與膿毒癥靶標之間的互作關(guān)系，進一步通過TCMIP的網(wǎng)絡分析模塊，計算小柴胡湯作用的候選靶標與膿毒癥靶標之間互作關(guān)系的網(wǎng)絡特征數(shù)據(jù)。

1.6 小柴胡湯的“中藥-化學成分-核心靶標-關(guān)鍵通路”的多維網(wǎng)絡的構(gòu)建

利用String數(shù)據(jù)庫進行蛋白質(zhì)之間及與預測蛋白質(zhì)之間相互作用的搜索。將小柴胡湯的蛋白靶標導入String數(shù)據(jù)庫，限定物種為“人”，獲取小柴胡湯抗膿毒癥的潛在靶標間的相互關(guān)系。利用Cytoscape軟件，繪制PPI網(wǎng)路，用Cytoscape的工具Network Analyzer進行網(wǎng)絡分析，設(shè)置節(jié)點大小和顏色用于反映Degree（連接度，即在網(wǎng)絡中通過該點的邊的個數(shù)）值的大小，設(shè)置邊的粗細用于反映結(jié)合分數(shù)的大小，并進行GO功能、KEGG通路富集分析，構(gòu)建“中藥-化學成分-核心靶標-關(guān)鍵通路”多維網(wǎng)絡[11]。

1.7 基因功能和通路富集分析

在TCMIP的信息設(shè)定頁面，添加中藥“半夏”“柴胡”“大棗”“甘草”“黃芩”“人參”“生姜”，以上述 7 味藥作為分析對象，進行藥物靶標預測，選擇相似性分數(shù)≥0.8的成分靶標作為候選靶標，共277個。將上述靶標導入DAVID 6.7，基于KEGG和GO數(shù)據(jù)庫分別對上述277個靶標進行通路富集和基因功能分析。

2 結(jié)果

2.1 小柴胡湯化學成分與候選靶標來源預測及分析

通過TCMIP，收集得到小柴胡湯所含7味中藥共647個化學成分，其中半夏41個、柴胡62個、大棗72個、甘草133個、黃芩54個、人參158個、生姜127個。小柴胡湯共有5 368個“成分-靶標”信息，其中半夏、柴胡、大棗、甘草、黃芩、人參、生姜的候選靶標數(shù)量分別為241、748、1 212、360、537、2 013、257個。

2.2 小柴胡湯共有靶標預測及分析

通過分析單味中藥兩兩之間的共有靶標，得到小柴胡湯中單味中藥間的共有靶標，見表1。

表1 小柴胡湯中單味中藥間共有靶標分析Tab 1 Common targets of single herbs in Xiaochaihu decoction

由表1可見，7味中藥之間均有不同數(shù)目的共有靶標，說明彼此之間存在某些協(xié)同或拮抗作用；其中人參與其他6味中藥之間共有靶標最多，暗示佐藥人參能夠協(xié)助君藥（柴胡）和臣藥（黃芩）發(fā)揮較強的協(xié)同作用。

2.3 小柴胡湯抗膿毒癥的PPI網(wǎng)絡的構(gòu)建

篩選出小柴胡湯抗膿毒癥的候選靶標277個、直接靶標6個、通用靶標1個。直接靶標包括血小板因子（PF）4、髓樣分化因子（MYD）88、Toll樣家族受體（TLR）4、CD14、一氧化氮合酶（NOS）3等。小柴胡湯抗膿毒癥的候選靶標網(wǎng)絡見圖1。

圖1 小柴胡湯抗膿毒癥的候選靶標網(wǎng)絡Fig 1 The candidate target network of Xiaochaihu decoction for sepsis

2.4 小柴胡湯抗膿毒癥的“中藥-化學成分-核心靶標-關(guān)鍵通路”的多維網(wǎng)絡分析

為將小柴胡湯抗膿毒癥的復雜作用機制以網(wǎng)絡的形式具體表現(xiàn)出來，TCMIP生成的小柴胡湯抗膿毒癥的“中藥-化學成分-核心靶標-關(guān)鍵通路”多維網(wǎng)絡關(guān)系圖，見圖2。

由圖2可見，小柴胡湯抗膿毒癥的作用主要與224個化學成分相關(guān)聯(lián)，作用于30條主要作用通路的118個核心靶標，這是該方發(fā)揮抗膿毒癥藥效的核心所在，也體現(xiàn)了多成分與多靶點之間共同作用的機制，符合中藥復方作用的特點。

2.5 小柴胡湯候選靶標的基因功能及通路富集分析

對小柴胡湯候選靶標進行GO基因功能分析，取P值越小的前20排名得到候選靶標具有的功能信息，發(fā)現(xiàn)小柴胡湯涉及的基因功能多與線粒體有氧呼吸過程相關(guān)，線粒體不僅是細胞能量的代謝中心，而且是細胞命運調(diào)控的信號樞紐[12]，提示小柴胡湯對于能量代謝障礙相關(guān)的疾病具有調(diào)控作用；對小柴胡湯20個候選靶標進行KEGG通路富集分析，取P排名前20得到候選靶標參與的通路信息，發(fā)現(xiàn)其主要作用于能量代謝、氨基酸代謝和糖代謝。小柴胡湯20個候選靶標具有的基因功能信息見表2，小柴胡湯20個候選靶標參與的通路信息見表3（表中的“條目”只列出英文，中文略）。

圖2 小柴胡湯抗膿毒癥的“中藥-化學成分-核心靶標-關(guān)鍵通路”多維網(wǎng)絡關(guān)系Fig 2 The multidimensional network relationship of“TCM-chemicalcomponent-core targets-key pathways”of Xiaochaihu decoction for sepsis

表2 小柴胡湯抗膿毒癥20個候選靶標具有的基因功能信息Tab 2 The gene function information of 20 candidate targets of Xiaochaihu decoction for sepsis

表3 小柴胡湯抗膿毒癥20個候選靶標參與的通路信息Tab 3 The pathway information of 20 candidate targets of Xiaochaihu decoction for sepsis

2.6 小柴胡湯抗膿毒癥的關(guān)鍵靶標基因功能及通路富集分析

通過富集分析，針對小柴胡湯的關(guān)鍵潛在靶標，將P排名前20的通路顯示出來。結(jié)果發(fā)現(xiàn)其基因功能涉及胞質(zhì)溶膠、腺嘌呤核苷三磷酸（ATP）結(jié)合、線粒體、線粒體基質(zhì)、線粒體內(nèi)膜、胞外體、蛋白激酶活性、輔酶Ⅰ結(jié)合、三羧酸結(jié)合、蛋白結(jié)合、酶結(jié)合等多個與能量代謝相關(guān)的條目，推測膿毒癥可能與人體能量代謝有較大關(guān)聯(lián)。根據(jù)P值越小的前20排名得到小柴胡湯抗膿毒癥的KEGG通路，結(jié)果顯示，其主要作用通路有嘌呤代謝、核苷酸代謝、碳代謝、丙酮酸鹽代謝、氨基酸代謝等多條代謝途徑以及內(nèi)分泌系統(tǒng)、雌激素受體信號轉(zhuǎn)導通路、內(nèi)分泌和代謝性疾病、趨化因子信號通路、促性腺激素釋放激素信號轉(zhuǎn)導通路、神經(jīng)系統(tǒng)等。小柴胡湯抗膿毒癥20個關(guān)鍵靶標的基因功能信息見表4，KEGG通路富集分析結(jié)果見表5（表中的“條目”只列出英文，中文略）。

3 討論

3.1 小柴胡湯抗膿毒癥的理論依據(jù)

小柴胡湯為漢代張仲景所創(chuàng)，療效肯定，應用廣泛，被歷代奉為經(jīng)典，目前仍是臨床使用概率最高的方劑之一。該方是治療少陽證的經(jīng)典名方，少陽證的主要癥狀為往來寒熱，而發(fā)熱亦是膿毒癥的主要臨床癥狀，故利用該方治療膿毒癥具有一定的依據(jù)。文獻記載，在小柴胡湯主治病癥中，以發(fā)熱最多[13]。有文獻調(diào)查了1984－2002年間關(guān)于小柴胡湯治療發(fā)熱的報道[14]，顯示小柴胡湯所治療的發(fā)熱以高熱居多，適合疾病種類廣泛，其中感染性發(fā)熱較多，同時對非感染性發(fā)熱（包括癌性發(fā)熱、免疫系統(tǒng)等引起的發(fā)熱）和不明原因發(fā)熱亦有效。實驗研究[15]也表明，小柴胡湯可明顯降低肺炎鏈球菌感染模型動物死亡的發(fā)生率及內(nèi)毒素致發(fā)熱模型動物各時間段體溫的升高水平。此外，少陽證多由免疫功能失調(diào)所致，而免疫功能失調(diào)也是膿毒癥的主要致病機制之一[16]，表明小柴胡湯抗膿毒癥也具有一定的理論依據(jù)。

表4 小柴胡湯抗膿毒癥20個關(guān)鍵靶標具有的基因功能信息Tab 4 The gene function information of 20 key targets of Xiaochaihu decoction for sepsis

表5 小柴胡湯抗膿毒癥20個關(guān)鍵靶標所參與的通路信息Tab 5 The pathway information of 20 key targets of Xiaochaihu decoction for sepsis

3.2 小柴胡湯抗膿毒癥的靶點預測

目前小柴胡湯抗膿毒癥的應用效果尚未被發(fā)現(xiàn)，而且其活性成分和作用機制的研究亦較為匱乏。本文借助整合藥理學方法，從多成分、多靶標角度揭示該方抗膿毒癥的潛在分子機制，為其臨床開發(fā)提供參考。結(jié)果表明，小柴胡湯抗膿毒癥主要與224個化學成分相關(guān)，其活性成分可針對多個靶點、多條通路發(fā)揮抗膿毒癥的作用，作用可能與神經(jīng)系統(tǒng)、嘌呤代謝、核苷酸代謝等代謝相關(guān)通路，T細胞信號通路、趨化因子信號通路、FcεRI信號通路等炎癥相關(guān)通路，促性腺激素釋放激素信號通路、雌激素受體信號傳導通路、催乳激素信號通路、催產(chǎn)素信號通路等與內(nèi)分泌系統(tǒng)相關(guān)的通路及循環(huán)系統(tǒng)有關(guān)，上述靶點及通路與文獻報道[17]中的膿毒癥的發(fā)病機制研究具有一定的吻合性，涉及到膿毒癥發(fā)病機制的各個環(huán)節(jié)，同時表明TCMIP在預測中藥及復方作用機制方面具有較高的準確性。綜上，本研究基于TCMIP進行預測，發(fā)現(xiàn)小柴胡湯抗膿毒癥作用的發(fā)揮可能與調(diào)控神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)及各種代謝等密切相關(guān)，即其可從“神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫-代謝”等多個層面、多種途徑來干預膿毒癥，研究結(jié)果可為小柴胡湯抗膿毒癥的相關(guān)研究提供一定參考，但該方抗膿毒癥的作用機制研究以及臨床開發(fā)仍需通過進一步的實驗研究進行驗證。此外，預測結(jié)果提示小柴胡湯在乙型肝炎、非酒精性脂肪肝、阿爾茨海默病等疾病治療中存在一定的應用價值，與其現(xiàn)有的一些臨床應用相關(guān)，且為小柴胡湯的后續(xù)研究與開發(fā)提供了借鑒。

3.3 小柴胡湯各單味中藥抗膿毒癥的分析

現(xiàn)代藥理研究亦提示，小柴胡湯中的各味中藥具有一定抗膿毒癥作用，其中柴胡的主要化學成分包括皂苷類、揮發(fā)油類、黃酮類、糖類、香豆素類等，柴胡皂苷、揮發(fā)油是柴胡的主要活性成分，具有良好的抗炎作用，柴胡多糖通過對骨髓間充質(zhì)細胞（BMCs）的免疫再分布的影響作用，能有效恢復膿毒癥晚期的免疫平衡，具有很好的免疫調(diào)節(jié)作用[18]。黃芩具有清熱燥濕、瀉火解毒等功效，臨床上廣泛用于多種急性感染性疾病[19]；黃芩中含有黃酮類化合物、揮發(fā)油及多糖等各種成分，且具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗腫瘤、抗過敏[20]、抗內(nèi)毒素等藥理作用，黃芩苷是黃芩抗內(nèi)毒素作用的有效成分之一[21]。膿毒癥屬中醫(yī)“血證”范疇，病機多為氣陰兩虛、陽脫陰竭，故治療以補氣固脫為主。人參大補元氣，對人體有滋補強壯作用[22]；人參中含有人參皂苷、多糖等多種化學成分，人參多糖作為人參發(fā)揮藥效的活性成分，具有明顯的增強免疫的作用；人參多糖主要通過阻止特異性免疫細胞凋亡和提高機體免疫防御來治療膿毒癥[23]；人參皂苷中的人參皂苷Rg5和人參二醇型皂苷（PDS）可改善膿毒癥損傷[22]。甘草具有補脾益氣、清熱解毒、祛痰止咳、緩急止痛、調(diào)和諸藥的功效，主要化學成分有三萜類、黃酮類、生物堿類及多糖類[24]；其三萜類成分甘草甜素作為高遷移率族蛋白B1（HMGB1）的抑制劑，可在膿毒癥模型小鼠中發(fā)揮有效作用[25]。甘草多糖對小鼠機體免疫有增強作用[26]。大棗含有大量成分復雜的糖類物質(zhì)，大棗多糖具有增強免疫的作用[27]。生姜醇提物具有顯著的抗腫瘤作用和免疫調(diào)節(jié)活性[28]。中醫(yī)學認為膿毒癥的病機還包括氣機紊亂，臨床常采用調(diào)氣和胃來治療膿毒癥，半夏苦辛燥，具有散結(jié)除痞、降逆和胃的功效，故半夏在膿毒癥的治療上也具有較好的開發(fā)前景[29]。

3.4 小柴胡湯抗膿毒癥的作用機制

膿毒癥的發(fā)病機制較為復雜，包括炎癥感染、免疫失調(diào)、凝血功能活化、代謝紊亂、神經(jīng)-內(nèi)分泌系統(tǒng)-免疫調(diào)節(jié)系統(tǒng)失調(diào)等，涉及機體的多系統(tǒng)、多器官的病理改變[30]。研究表明發(fā)生膿毒癥時，血小板作為炎癥反應、凝血激活和血栓形成的核心因素，其參與到膿毒癥的各個環(huán)節(jié)。PF4作為血小板活化的標記物及活化后釋放的含量最豐富的活性因子之一[31]，會通過正反饋加強炎癥反應，并促進炎癥介質(zhì)的大量釋放，同時，炎癥介質(zhì)又加重炎癥反應，最終引起多器官功能障礙綜合征[32]。研究發(fā)現(xiàn)TLRs介導的信號傳導通路與膿毒癥的發(fā)病有關(guān)，TLRs通過識別病原相關(guān)分子模式與細胞外受體結(jié)合啟動炎癥信號通路的激活[33]，TLR4是革蘭氏陰性菌脂多糖（LPS）信號轉(zhuǎn)導的主要受體，TLR4介導的信號轉(zhuǎn)導通路是膿毒癥中炎性因子產(chǎn)生的重要途徑。研究表明，LPS首先與LPS結(jié)合蛋白（Lipopolysaccharide bindingprotein，LBP）結(jié)合，再傳遞給CD14分子，形成LPS/LBP/CD14復合物，然后與TLR4/MD2相互作用[34]，TLR4被激活后通過MyD88依賴型信號轉(zhuǎn)導途徑和MyD88非依賴型信號通路引起炎性細胞因子的高表達，并激活核轉(zhuǎn)錄因子κB（NF-κB），從而促進各種炎癥介質(zhì)大量分泌釋放，如白細胞介素（IL）-1、IL-6、IL-8等，導致膿毒癥的進一步加重[35]。其中共有靶標是緩激肽B2受體（BDKRB2），其作為G蛋白偶聯(lián)受體（G protein-coupled receptors，GPCRs）超家族成員，緩激肽（BK）可通過B2受體活化磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/AKT）通路[36]，而PI3K/AKT通路在炎癥反應過程中發(fā)揮重要作用，發(fā)生膿毒癥時PI3K/AKT活化并激活其下游的NLRP3炎性小體，使其釋放量明顯增加，從而加重機體的炎癥反應[37]。本研究涉及的通路包括纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸降解等氨基酸代謝通路，碳水化合物代謝、碳代謝、糖酵解/糖異生、丙酸代謝、丙酮酸鹽代謝、檸檬酸循環(huán)等糖代謝通路。膿毒癥早期處于呼吸加快，ATP生成增加、激素分泌增多的高代謝狀態(tài)，后期表現(xiàn)為ATP生成減少和激素分泌下調(diào)、代謝率降低、線粒體功能出現(xiàn)紊亂的狀態(tài)，且研究發(fā)現(xiàn)線粒體利用氧的能力降低是膿毒癥發(fā)病的關(guān)鍵[38]；亮氨酸、異亮氨酸和纈氨酸作為重要的生糖氨基酸都可以調(diào)節(jié)血糖水平，為機體活動提供能量，膿毒癥患者中高血糖問題普遍存在，血糖的高低不僅反映病情嚴重程度，也與病情預后關(guān)系密切。膿毒癥發(fā)生時，巨噬細胞的有氧糖酵解為巨噬細胞快速釋放大量炎癥介質(zhì)和細胞因子提供能量，并促進乳酸的進一步聚集，這是介導巨噬細胞免疫功能過度激活的關(guān)鍵機制。由此，推測小柴胡湯是通過影響線粒體活動，影響機體能量代謝，保證線粒體有氧呼吸過程的正常進行，從而緩解膿毒癥引起的微循環(huán)障礙及多器官功能衰竭；以及調(diào)節(jié)機體氨基酸代謝和糖代謝的紊亂，降低膿毒癥患者的病死率及改善預后。

此外文獻研究[39]表明，膿毒癥發(fā)生時，因患者激素分泌呈晝夜節(jié)律性改變，繼而內(nèi)分泌代謝發(fā)生變化，膿毒癥時過度炎癥反應可抑制促腎上腺皮質(zhì)激素（Adreno-cortico-tropic-hormone，ACTH）對腎上腺皮質(zhì)醇的促分泌作用，引起“相對性腎上腺皮質(zhì)功能不全”，最終導致組織損傷和器官功能障礙[39]。已有文獻報道[40]表明，小柴胡湯對內(nèi)分泌具有顯著調(diào)節(jié)作用，具有類似激素的作用，能促進垂體-腎上腺-皮質(zhì)功能，增加糖皮質(zhì)激素的分泌及其與受體的結(jié)合，發(fā)揮間接的抗炎作用。而且，小柴胡湯對促腎上腺皮質(zhì)激素（ATCH）的分泌具有雙向調(diào)節(jié)作用，不僅能促進ATCH的分泌，也會抑制ATCH的分泌。由此推測小柴胡湯抗膿毒癥可能與代謝、內(nèi)分泌系統(tǒng)密切相關(guān)。亦可見小柴胡湯抗膿毒癥是從多層面協(xié)同發(fā)揮作用，具有多靶點性，符合中醫(yī)學的整體觀。

總之，小柴胡湯抗膿毒癥的相關(guān)通路涉及神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、細胞生長與死亡、循環(huán)系統(tǒng)等多個方面，主要包括促性腺激素釋放激素信號通路、雌激素受體信號傳導通路、催乳激素信號通路、催產(chǎn)素信號通路等與內(nèi)分泌系統(tǒng)相關(guān)的通路；以及T細胞信號通路、趨化因子信號通路、FcεRI信號通路等炎癥相關(guān)通路，以及嘌呤代謝、核苷酸代謝等代謝相關(guān)通路；以及血管內(nèi)皮細胞生長因子信號通路等循環(huán)系統(tǒng)相關(guān)通路；以及內(nèi)分泌和代謝性疾病、神經(jīng)退行性疾病、前列腺癌、乙型肝炎等疾病相關(guān)通路。不同化學成分的作用靶點分布于不同的信號通路，相互協(xié)調(diào)，再次表明小柴胡湯抗膿毒癥的作用發(fā)揮與調(diào)控內(nèi)分泌系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、代謝密切相關(guān)，小柴胡湯可以從“神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫-代謝”等多層面、多途徑、多通路來干預膿毒癥。