枳椇飲對急性酒精中毒小鼠醒酒作用的實驗研究*

葉 勇 李俊賢 吳 英 萬春平 汪子君 趙 淳△

（1.云南中醫學院第一附屬醫院，云南 昆明 610000；2.云南省曲靖市中醫醫院，云南 曲靖655000）

急性酒精中毒是指短時間內攝入過量酒精造成機體機能的損害，嚴重者引起中樞神經系統興奮或抑制狀態，使患者出現昏迷、休克、甚至呼吸衰竭［1］。中醫學對酒精中毒有較為詳細的描述，有 “酒悖”“酒毒”“酒厥”“酒脹”“酒臌”等病名［2］。本研究旨在觀察枳椇飲對急性酒精中毒小鼠解酒作用，為其臨床應用提供實驗依據。現報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 昆明小鼠50只，雌雄各半，7～8周齡，體質量 20～25 g，許可證號 SCXK（川）2008-24；用 SPF級動物房飼養實驗動物，實驗動物至少飼養1周后使用。動物飼養在云南省中醫醫院中心實驗室SPF級動物房，實驗動物至少飼養1周后使用。溫度（22±1）℃，濕度（55±5）%，12 h光暗循環。飼料和水均在消毒后由動物自由攝取。所有實驗均嚴格按照《實驗動物管理條例》以及動物實驗學的“3R”原則進行。

1.2 試藥與儀器 1）試藥：枳椇飲系本文通信作者，云南省名老中醫趙淳教授經驗方，其組方為：枳椇子20 g，葛根 10 g，豆蔻 10 g，青橄欖 10 g，玉米肽 8 g，柚皮 10 g，烏梅 10 g，虎杖 10 g，鹿仙草 10 g，枸杞子 10 g。按劑量制成顆粒劑 （由云南麥谷農業科技有限公司提供）備用；牡蠣大豆肽肉堿口服液（海王金樽牌）；56°食用白酒（北京紅星二鍋頭）。2）儀器：YLS-1A自主活動測試儀（山東益延科技發展有限公司生產）。

1.3 造模及分組 實驗前將昆明小鼠禁食不禁水12 h，然后將50只昆明小鼠隨機分為模型組及枳椇飲低劑量組、中劑量組、高劑量組和陽性對照組，每組10只。各組均以10 mL/kg為標準給小鼠灌酒，誘導急性酒精中毒小鼠模型。

1.4 干預方法 枳椇飲低劑量組、中劑量組、高劑量組分別灌胃給藥0.25 g/kg、0.5 g/kg和1 g/kg枳椇飲。模型組以相同劑量給0.9%氯化鈉注射液0.4 mL。陽性對照組予牡蠣大豆肽肉堿口服液給予10 mL/kg牡蠣大豆肽肉堿口服液口服液。灌胃1次。

1.5 小鼠翻正反射記錄 灌胃白酒和藥物以后，即將小鼠背向下輕輕放在動物籠里，若仰位姿勢保持30 s以上，則認為翻正反射消失，記錄小鼠從灌酒到翻正反射消失的潛伏時間 （從造模到翻正反射消失時間）和翻正反射的恢復時間（從造模到翻恢復翻正反射的時間）。

1.6 小鼠自主活動記錄 使用自主活動儀分別記錄各組小鼠5、30、150 min自主活動次數。

1.7 統計學處理 應用SPSS17.0統計軟件。計量資料以（±s）表示。均值間差異比較采用t檢驗或單因素方差分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 各組小鼠翻正反射比較 見表1。與模型組比較，枳椇飲高劑量藥物干預組顯著提高了翻正反射消失潛伏時間（P＜0.05）；與模型組比較，陽性組、枳椇飲低、高劑量組翻正反射的恢復時間顯著縮短（P＜0.05）。

表1 各組小鼠翻正反射比較（min，±s）

表1 各組小鼠翻正反射比較（min，±s）

與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01下同

組 別 n 翻正反射消失潛伏時間 翻正反射的恢復時間模型組 10 18.16±10.98 169.67±50.12陽性對照組 10 19.67±7.63 100.83±29.67*枳椇飲低劑量組 10 26.17±15.63 139.00±33.51枳椇飲中劑量組 10 36.17±18.53 111.16±23.26*枳椇飲高劑量組 10 28.80±6.45* 73.00±46.11**

2.2 各組小鼠自主活動比較 見表2。給予酒精后，隨著時間的推移，實驗小鼠由興奮變為安靜。5 min時，與模型組比較，枳椇飲高劑量組自主活動顯著減少（P＜0.05）；30 min時，與模型組比較，各組實驗小鼠自主活動無顯著性差異。150 min時，與模型組比較，陽性組及枳椇飲低、中、高劑量組自主活動顯著增加（P＜0.01）。

表2 各組小鼠自主活動比較（次，±s）

表2 各組小鼠自主活動比較（次，±s）

組 別 n 5 min 30 min 150 min正常組 10 147.50±38.55 148.00±46.99 155.25±38.78模型組 10 162.37±33.87 138.16±35.50 53.42±33.21**陽性對照組 10 176.50±36.80枳椇飲低劑量組 10 161.50±38.85枳椇飲中劑量組 10 143.57±46.73枳椇飲高劑量組 10 88.00±31.36**146.83±32.40 132.28±50.50**102.33±58.70 145.55±46.01**108.33±58.10 149.33±48.21**121.50±50.62 145.71±38.20**

3 討 論

急性酒精中毒主要表現在對中樞神經系統的抑制作用上，作用于小腦時主要表現為走路不穩、共濟失調等運動障礙；作用于腦干網狀結構，則進入昏睡期，最后會因為抑制延髓而出現休克、呼吸衰竭進而導致死亡。小鼠翻正反射、攀附實驗和轉棒實驗及自主活動評價是主要評價大鼠醉酒后肌力和運動協調能力的有效方法［3-4］。故本實驗通過翻正反射消失潛伏時間和恢復時間來驗證枳椇飲對急性酒精中毒中樞抑制的解酒療效。實驗結果顯示，與模型組比較，枳椇飲高劑量藥物干預組顯著提高了翻正反射消失潛伏時間；與模型組比較，陽性組、枳椇飲低、高劑量組翻正反射的恢復時間顯著縮短，表明枳椇飲能有效改善急性酒精中毒小鼠的中樞抑制狀態。

本實驗在給予小鼠酒精后，隨著時間的推移，乙醇在腦內劑量的逐漸蓄積，小鼠先后經歷興奮期、共濟失調期和昏睡期，故實驗小鼠由興奮變為安靜，實驗結果提示，灌酒后5 min，與模型組比較，枳椇飲高劑量組自主活動顯著減少，表明枳椇飲能減少小劑量乙醇中毒的神經興奮狀態；150 min時，與模型組比較，陽性組、枳椇飲低、中、高劑量組自主活動顯著增加，表明枳椇飲能改善急性酒精中毒小鼠昏睡期的中樞抑制狀態。

枳椇子作為本方的主要藥物，具有清熱利尿、解酒毒之功效，主治酒醉、煩熱、口渴、嘔吐、二便不利等癥。早在《千金要方》和《本草綱目》中就均有記載，枳椇子和葛根是最為經典的解酒藥物［5-6］，葛根和枳椇子具有的解酒護肝作用也在現代研究中得到了證實［7-8］。

現代研究表明，過多的乙醇可導致乙醇脫氫酶活性下降，而枳椇子可逆轉這種過程，提高該酶的活性，讓中間產物乙醛的產生與積累達到一種平衡［9］。任發政等［10］通過動物實驗發現，長期攝入酒精的小鼠可引起肝臟超氧化物歧化酶（MDA）和谷胱甘肽巰基轉移酶活性降低，從而導致丙二醛含量升高和谷胱甘肽含量下降，而枳椇子對上述變化具有拮抗作用。時濤等［11］研究發現枳椇子乙酸乙酯能夠提高急性酒精中毒小鼠中血液谷丙轉氨酶活性，降低小鼠肝臟丙二醛（MDA）含量，升高小鼠肝臟乙醇脫氫酶（ADH）活性和超氧化物歧化酶（SOD）活性，升高肝臟谷胱甘肽（GSH）含量，因此枳椇子具有顯著的解酒效果。嵇揚等通過研究提出枳棋子能顯著縮短急性酒精中毒小鼠的醒酒時間，降低血液中乙醇濃度，有治療急性酒精中毒的作用［12］；藥理研究發現葛根可以解酒毒，通過抑制酒精自主攝入、增加乙醇耐受 、降低血液乙醇濃度。有利于乙醇在體內的分解代謝，從而可以解酒毒。影響中樞神經系統興奮與抑制過程是葛根具有解酒作用的重要原因之一［13］。虎杖中提取的活性成分-虎杖苷能減少肝損害，具有保護肝細胞，降低脂肪肝，改善胰島素抵抗的作用［14］，這對急性酒精中毒時發生的肝臟功能損害起到了保護肝臟的作用。枸杞對酒精性肝損傷大鼠具有保護作用，能有效地阻止酒精所致肝損傷脂質過氧化物的終產物MDA的升高，具有抗脂質過氧化及保護肝細胞的作用［15］。鹿仙草也具有解酒毒的作用。通過提高ADH和ALDH的活性，加快了乙醇在體內的代謝，增強SOD和GSH-Px的活性，清除自由基，保護細胞膜的結構和功能［16］。玉米肽可以促進乙醇代謝 ，減低血液乙醇水平的作用。

本方中枳椇子清熱利尿、解酒毒，葛根既解酒毒，又善醒脾生津，共為君藥；虎杖、鹿仙草、肉豆蔻、余甘子、玉米肽解酒毒；柚子皮和烏梅消食、醒酒、化痰、健脾、生津止渴、增食欲，助君藥共奏解酒毒之功效，為臣藥；菊花清熱解毒，平肝明目，沙棘、桑葚、枸杞滋養肝腎，護肝共為佐藥。合而用之，共奏解酒毒、清熱護肝、健脾生津、利濕之效，則酒毒諸癥自消。