海藻糖鑒別（3）、有關物質、含量的測定方法驗證

李寧 劉昶 李鎮宏

摘 要：建立一個用高效液相色譜法測定海藻糖鑒別（3）、有關物質和含量測定的方法。方法：以磺化交聯的苯乙烯-二乙烯基苯共聚物為填充劑的強陽離子氫型色譜柱 ;以水為流動相 ;檢測45℃，柱溫80℃，流速0.4ml/min。結果：海藻糖在1.0027472～15.04419mg/ml濃度范圍內線性關系良好，得線性方程y=0.0000022x-0.037297（R2=0.9999），回歸系數大于0.999; ?結論：該方法簡便、準確，可用于海藻糖鑒別（3）、有關物質和含量的質量控制。

關鍵詞：海藻糖;高效液相色譜法示差檢測器;方法學

海藻糖是一種對生物體具有神奇的保護作用的二糖，它能夠有效地保護蛋白質分子不變性失活，從而維持生命體的生命過程和生物特征。所以海藻糖在食品、藥品和化妝品領域都有廣泛的應用。特別是在醫藥領域今后幾年需求量會有較大的增長。而海藻糖的鑒別、有關物質和含量的檢測是用高效液相RID檢測器檢測，RID檢測器為特殊檢測器，應用不是很廣泛。本文擬建立海藻糖鑒別（3）、有關物質和含量測定的方法，旨在為海藻糖的質量安全提供參考。進一步確立海藻糖的使用安全。

1.實驗部分

1.1試劑與儀器

海藻糖、麥芽三糖、無水葡萄糖對照品 來源 中國食品藥品檢定研究院。純化水，自制。海藻糖樣品。

安捷倫1260高效液相色譜儀系統（配有示差折光檢測器、四元梯度泵、在線脫氣裝置、自動進樣器、柱溫箱）。電子天平：梅特勒托利多電子天平（XS105DU）。

1.2試驗方法

色譜條件與系統適應性 ?以磺化交聯的苯乙烯-二乙烯基苯共聚物為填充劑的強陽離子氫型色譜柱;以純水為流動相 ;示差折光檢測溫度為45℃，柱溫80℃，流速0.4ml/min，采集運行30min。

對照品溶液的制備 ?精密稱定麥芽三糖、無水葡萄糖、海藻糖對照品，分別為24.41mg、24.26mg、93.06mg，置于同一個10ml量瓶中，加水溶解并稀釋制成每lml中各含2.441mg、2.424mg、9.287mg的溶液為對照1，再精密稱定海藻糖對照品252.20mg置于25ml量瓶中加水溶解并稀釋至刻度制成每1ml含海藻糖10.027mg的溶液為對照2。精密吸取20ul，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，各色譜峰之間的分離度均大于1.5。

供試品溶液的制備 ?取本品適量，精密稱定，加水溶解并定量稀釋制成每lml約含海藻糖lOmg的溶液。搖勻，用0.45？m濾膜過濾，取續濾液作為供試品。

測定法： ?分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20？l，注入色譜儀，測定，即得。

精密度試驗：分別精密吸取濃度為9.287mg/ml的海藻糖對照品溶液按測定方法對對照溶液1重復進樣6次測定峰面積值。各次測得的峰面積值分別為4178000、4174140、4177330、4177290、4176290、4175530，平均值為4176430，RSD為0.03%相對標準偏差小于2.0%，儀器精密度良好。

線性關系與線性范圍考察：精密稱定海藻糖對照品151.35mg置于10ml量瓶中，加水溶解并定容至刻度，得到濃度為15.04mg/ml的溶液作為海藻糖對照品儲備液和濃度為10.027mg/ml的海藻糖對照品制成1.0027mg/ml、2.0054 mg/ml、5.0137mg/ml、7.5220 mg/ml、10.0274mg/ml、15.0441mg/ml6個濃度的溶液，分別取上述6個濃度的對照品溶液20ul注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積;以面積為縱坐標，以對照品濃度（mg/ml）為橫坐標作線性回歸，繪制標準曲線。

試驗結果表明：海藻糖線性回歸方程為y=0.0000022x-0.037297（R2=0.9999），相關系數滿足要求，說明海藻糖在1.0027472～15.04419mg/ml范圍內線性關系良好。

重復性試驗：取1批海藻糖原料（批號：2018001），取供試品6份，精密稱定，依含量測定方法測定，同時，取海藻糖對照品溶液同法測定，分別計算出海藻糖含量，RSD為0.38%。

加樣回收率試驗（準確度試驗）：采取全程加樣法。取9份已知含量的海藻糖約0.046g，精密稱定，置于10ml量瓶中。1-3份精密量取海藻糖對照溶液2各3.00ml加入到量瓶中， 4-6份精密量取5.00ml到量瓶中，7-9份精密量取7.00ml于容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度。得到80%、100%、120%濃度的供試品，按含量測定方法測定，同時取海藻糖對照品溶液，依法測定，并計算出海藻糖的含量。以下式計算回收率。試驗結果，平均回收率為99.8%（RSD=0.62%）。結果較滿意，表明本法適用于海藻糖的質量控制。

2.結論： 通過對按照《中國藥典》2015年版四部，第555頁海藻糖項下的鑒別（3）、有關物質和含量的測定方法，進行系統適用性試驗、精密度試驗、檢測限、專屬性、線性關系與線性范圍考察、重復性試驗、準確度試驗（加樣回收試驗），各項試驗測試結果均能滿足要求，儀器性能穩定，準確度結果滿意。

從以上數據可以看出用該方法檢測海藻糖的鑒別（3）、有關物質和含量，結果準確可靠，表明運用此方法檢測海藻糖可以安全有效的控制海藻糖的質量。

該方法中海藻糖的檢測限為0.10027472ug.海藻糖的線性范圍為1.0027472～15.04419mg/ml。