老年結直腸癌組織中miR-182表達及其與臨床病理參數的關系

蔣華鋒 沈毅 薛露

(1紹興市人民醫院肛腸外科，浙江 紹興 312000；2吉林大學第一醫院小兒血液科)

結直腸癌的發病率和死亡率較高，早期局限性結直腸癌的死亡率為7%～26%，發生轉移的結直腸癌的死亡率則高達80%，因此早期診斷結直腸癌對降低結直腸癌的死亡率、改善預后具有重要價值〔1，2〕。微小RNA(miR)長18～22 nt，由內源基因編碼的單鏈非編碼RNA，研究發現多種miR在結直腸癌組織中表達失調，在結直腸癌的發生發展中發揮重要作用〔3，4〕。miR-182在多種組織和細胞中表達，在組織器官的生長、分化、發育等過程中發揮重要作用〔5〕，miR-182在惡性腫瘤的發生發展中也發揮重要作用〔6〕。本文對老年結直腸癌組織中miR-182水平進行研究，探討其在結直腸癌中的價值。

1 材料與方法

1.1材料 組織標本：選擇紹興市人民醫院2010年1月至2011年12月70歲以上老年結直腸癌患者120例結直腸癌組織及其相應的癌旁組織標本。120例患者均經病理證實為結直腸癌，均為初次診斷為結直腸癌者，術前未行放化療等其他治療，首次進行手術治療，均簽署知情同意書。120例患者年齡(75.86±3.72)歲；男78例，女42例；結腸癌67例，直腸癌53例；浸潤深度T1者31例，T2者26例，T3者34例，T4者29例；TNM分期Ⅰ期者27例，Ⅱ期41例，Ⅲ期者38例，Ⅳ期者14例；有淋巴結轉移者43例；有遠處轉移者38例。入選患者術后均進行正規隨訪，未正規隨訪或失訪者剔除，隨訪時間從手術結束后開始至患者死亡或隨訪截止日期2016年12月31日。本研究經紹興市人民醫院倫理委員會審批。

1.2結直腸癌組織和癌旁組織中miR-182水平測定 取患者新鮮結直腸癌組織和癌旁組織勻漿后提取總RNA，根據實時熒光定量聚合酶鏈反應(PCR)測定組織中miR-182水平，PCR反應條件為：95℃ 10 min；95℃ 20 s，62℃ 30 s，72℃ 30 s，共42個循環，以U6為內參照。結直腸癌組織和癌旁組織中miR-182水平以2-ΔΔCT表示。實時熒光定量PCR相關試劑及儀器購于美國Sigma公司。

1.3統計學方法 采用SPSS20.0統計學軟件進行t檢驗，結直腸癌組織中miR-182水平對結直腸癌的診斷價值采用受試者工作特征(ROC)曲線分析，結直腸癌組織中miR-182水平與結直腸癌預后的關系采用Kaplan-Meier法。

2 結 果

2.1結直腸癌組織和癌旁組織中miR-182水平比較 結直腸癌組織中miR-182水平(1.81±0.21)明顯高于癌旁組織(1.00±0.13，t=35.926，P=0.000)。

2.2結直腸癌組織中miR-182水平與臨床病理特征的關系 結直腸癌組織中miR-182水平與結直腸癌TNM分期、淋巴結轉移和遠處轉移有關(P<0.05)，TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移、有遠處轉移患者結直腸癌組織中miR-182水平明顯高于Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結轉移、無遠處轉移患者(P<0.05)；結直腸癌組織中miR-182水平與結直腸癌患者年齡、性別、腫瘤部位、腫瘤浸潤深度、CEA水平無關(P>0.05)。見表1。

表1 結直腸癌組織中miR-182水平與臨床病例特點的關系

2.3結直腸癌組織中miR-182水平對結直腸癌的診斷價值 結直腸癌組織中miR-182水平診斷結直腸癌的ROC曲線下面積為0.812，95%CI為0.809～0.815，miR-182水平界值為1.623，靈敏度為86.34%，特異度為77.16%。

2.4結直腸癌組織中miR-182水平與結直腸癌預后的關系 120例結直腸癌患者隨訪時間7.86～68.67個月，患者中位生存時間為28.71個月，結直腸癌組織中miR-182以1.623為界，miR-182低表達患者的生存率明顯高于高表達者(P=0.009)。

3 討 論

結直腸癌在不同地區的發病率不同，結直腸癌的發生和遺傳因素、環境和生活方式關系密切，結直腸癌的易感因素包括家族史、年齡、炎癥性腸病，食用大量紅色肉類、酒精過剩、肥胖、高脂肪飲食及吸煙等不良生活方式增加結直腸癌的發病風險〔7，8〕。結直腸癌經歷了從基因突變引起腸道黏膜上皮細胞腺瘤到向結直腸癌轉變的過程，該過程為連續完整的過程，通過篩查、化學預防、手術等手段可以干擾該自然過程，預防結直腸癌的發生〔9，10〕。結直腸癌的預后和結直腸癌診斷時的分期、淋巴結轉移及遠處轉移關系密切，早期結直腸癌患者的生存率相對較高，而發生轉移患者的生存率明顯降低。由于結直腸癌早期癥狀不明顯，因此結直腸癌的早期篩查具有重要價值〔11，12〕。近年來新出現的內窺鏡檢查等大大提高了結直腸癌的早期診斷率，但仍有大部分患者不能在早期診斷，往往發現時已為結直腸癌晚期，嚴重影響患者的預后〔13，14〕。考慮內鏡檢查價格比較昂貴且為侵入性操作，因此開發非侵入性的比較準確的結直腸癌的診斷和預后評價標志物具有重要價值。

miR在惡性腫瘤細胞的增殖、代謝、轉化、凋亡、侵襲和轉移等多種病理過程中發揮重要作用，參與多種惡性腫瘤的發生發展過程〔15，16〕。miR具有高度保守性，可通過和靶mRNA結合，導致靶基因降解或抑制靶基因翻譯，從而在基因轉錄后的調控中發揮作用〔17，18〕。大量研究發現miR在結直腸癌中表達異常，參與結直腸癌的發生發展過程〔19〕；不少miR成為結直腸癌診斷、預測化療敏感性、預后的潛在生物標志物〔20，21〕。

miR-182在多種惡性腫瘤中表達異常，和惡性腫瘤的轉移關系密切〔22〕。在不同惡性腫瘤中miR-182表達不同〔23〕，在黑素瘤、肝細胞癌、卵巢癌等惡性腫瘤中高表達，并可促進腫瘤細胞生長及轉移〔24，25〕；miR-182在肺癌和胃癌中低表達，可抑制腫瘤細胞的生長〔26，27〕。本文結果表明miR-182可能參與結直腸癌的發生發展過程，可用于預測結直腸癌的病情嚴重程度，有望成為結直腸癌診斷和預后判斷的潛在指標。