老年骨質疏松性骨折與CYP11A1基因rs900798位點多態性的相關性

金輝 王海峰 曾忠友

(武警海警總隊醫院骨二科，浙江 嘉興 314000)

調查顯示，隨著我國人口老齡化，老年骨質疏松發病率呈逐年增加趨勢，輕微創傷則可造成骨質疏松患者發生骨質疏松性骨折〔1，2〕。老年骨質疏松主要是多種原因導致的單位體積骨質總量減少、骨組織微細破壞和改變為特征的一種全身性骨骼疾病〔3，4〕。流行病學調查顯示，老年骨質疏松患者容易發生骨折，嚴重影響老年人生活質量〔5〕。因此，老年骨質疏松性骨折患者采取有效的診斷和治療方法尤為重要。臨床研究顯示，CYP11A1基因rs900798位點多態性與芳香酶抑制劑治療的絕經女性骨量丟失相關，提示該基因位點在骨代謝調節中具有潛在作用〔6〕。但目前，CYP11A1基因rs900798位點多態性與老年骨質疏松性骨折相關性研究甚少，缺乏有效的參考價值。故而本研究旨在分析老年骨質疏松性骨折與CYP11A1基因rs900798位點多態性的相關性。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選擇武警浙江省總隊醫院于2015年1月至2016年12月收治的老年骨質疏松性骨折患者90例作為研究組。納入標準：①符合世界衛生組織(WHO)推薦的關于骨質疏松相關診斷標準(T值≤-2.5SD)；②骨折患者均為低能量損傷引起的骨折；③患者年齡≥70歲且≤85歲；④獲得知情同意。排除標準：①近3個月服用影響骨代謝藥物者；②近6個月服用唑來膦酸或阿倫磷酸，雌激素、骨化三醇、降鈣素等；③合并嚴重心肺、肝腎功能異常；④合并甲狀腺功能衰退、甲狀腺功能亢進及糖尿病等；⑤精神疾病者。研究組男29例，女61例；年齡70～84〔平均(76.48±3.51)〕歲；體重指數(BMI)17～28〔平均(21.45±2.89)〕kg/m2。另選擇同期收治的單純老年骨質疏松患者80例作為對照組，男26例，女54例；年齡70～85〔平均(77.13±4.63)〕歲；BMI 18～26〔平均(21.76±2.35)〕kg/m2。兩組一般資料差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1骨代謝標志物檢測 包括骨鈣素(BGP)、Ⅰ型原骨膠原蛋白N-端肽(sCTX)和堿性磷酸酶(ALP)，入院后第2天抽取患者3 ml外周靜脈血，分離血清，離心半徑10 cm，2 500 r/min，離心時間10 min，放置于-20℃下保存待測。采用日立7600型全自動生化分析儀及配套試劑盒嚴格依據試劑盒說明書標準測定BGP、sCTX和ALP含量。

1.2.2骨密度檢測 采用雙能X線吸收儀測定股骨頸和腰椎(L2～4)骨密度。

1.2.3CYP11A1基因rs900798位點多態性檢測 入院后第2天抽取患者3 ml外周靜脈血，放置于乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管中，放置于-20℃下保存，用于提取白細胞基因組。采用酚/氯仿法提取外周血白細胞DNA，放置于-20℃下保存，用于鑒定單核苷酸多態性。采用SNaPshot技術進行基因分型，核心反應體系包括測序酶、緊挨多態位點5′-端的不同長度延伸引物、四種熒光標記dNTP及包含單核苷酸多態位點的PCR產物模板。CYP11A1基因rs900798位點引物設計由上海生物工程技術有限公司合成。上游引物5′-CCACTCTTGGAGCCCTTCTG-3′，下游引物5′-GAGCTGGCAATGATGTGTCC-3′。

1.3觀察指標 (1)觀察兩組骨代謝標志物變化；(2)觀察兩組等位基因分布頻率與基因型頻率變化；(3)觀察不同基因型骨代謝標志物變化；(4)觀察不同基因型骨密度變化。

1.4統計學方法 采用SPSS22.0統計學軟件進行χ2檢驗、方差分析、t檢驗。

2 結 果

2.1兩組骨代謝標志物變化比較 研究組BGP含量明顯低于對照組，而sCTX和ALP含量明顯高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

2.2兩組等位基因分布頻率與基因型頻率比較 研究組與對照組等位基因頻率(G、T基因)和基因型頻率(GG、GT、TT)比較差異無統計學意義(P>0.05)，見表2。

2.3不同基因型骨代謝標志物變化比較 不同基因型研究組患者血清BGP、sCTX和ALP含量比較差異無統計學意義(P>0.05)，見表3。

2.4不同基因型研究組骨密度變化比較 不同基因型研究組患者股骨頸和腰椎(L2～4)骨密度比較差異無統計學意義(P>0.05)，見表4。

表1 兩組骨代謝標志物變化比較

表2 兩組等位基因分布頻率與基因型頻率比較〔n(%)〕

表3 不同基因型研究組骨代謝標志物變化比較

表4 不同基因型研究組骨密度變化比較

3 討 論

原發性骨質疏松是老年人及絕經后女性常見的一種全身性骨代謝疾病，以骨骼脆性增加、骨微結構破壞、骨量丟失及骨折風險增加為特點。老年骨質疏松為低轉換型骨質疏松，發病年齡通常在70歲以上〔7～10〕。老年骨質疏松性骨折主要是老年人骨質疏松癥候，骨強度和骨密度明顯下降，受到輕微暴力甚至日常生活均可能導致出現骨折，是骨質疏松最嚴重的后果〔11～14〕。目前，骨密度是骨質疏松診斷的金標準，具有穩定性好、精確度高等特點，但其無法反映骨代謝短時間內病理生理變化。骨代謝標志物可早期評估骨質疏松治療效果。BGP是一種由成骨細胞和成纖維細胞合成的特殊骨蛋白，主要分泌非膠原蛋白，生成后部分進入骨基質與其結合，使其部分釋放入血，目前認為BGP是反映骨形成率的一種特異性指標。ALP主要由成骨細胞產生，也是成骨細胞具有活性和成熟的一種標志，其含量變化可有助于了解成骨細胞狀態〔15〕。sCTX是較好的一種反映骨吸收指標，主要存在于Ⅰ型分子間交聯物的重要區段〔16〕。sCTX主要用于判斷代謝性骨病的骨吸收狀態，檢測和評價抗骨吸收藥物的療效。本研究表明，老年骨質疏松性骨折患者骨代謝指標BGP含量降低而sCTX和ALP含量升高。

CYP11A1基因屬細胞色素P450超家族，主要編碼膽固醇側鏈裂解酶，簡稱為P450scc〔17〕。P450scc是催化生物體內類固醇激素合成的一種限速酶，且可催化膽固醇轉化為孕醇酮，為性激素合成的第一步〔18,19〕。研究認為因性激素缺乏與老年骨質疏松相關，CYP11A1基因可能與老年骨質疏松性骨折骨密度存在一定的相關性〔20〕。但本研究表明，老年骨質疏松性骨折骨密度與CYP11A1基因rs900798位點多態性無明顯相關性，且不同基因型患者血清BGP、sCTX和ALP含量比較無差異，說明老年骨質疏松性骨折患者BGP、sCTX和ALP水平與CYP11A1基因rs900798位點多態性無明顯相關性。