切花菊‘白扇’開放式組培快繁體系的建立

朱夢(mèng)珠 楊惠婷 胡計(jì)紅 譚艷麗 洪榮欽 林慶良 潘東明 康建坂 佘文琴 陳桂信

摘 ?要 ?以切花菊‘白扇的帶腋芽莖段為外植體，以次氯酸鈉為表面消毒劑，確定最佳的消毒濃度及消毒時(shí)間;以山梨酸鉀、次氯酸鈉和代森錳鋅為抑菌劑，確定開放式初代、繼代和生根培養(yǎng)基中抑菌劑的最佳組合，建立開放式組培快繁體系。試驗(yàn)結(jié)果表明：外植體最佳消毒條件為0.1%（V/V）次氯酸鈉消毒15 min;在初代培養(yǎng)基中，抑菌劑最佳組合為50 mg/L代森錳鋅、0.01%（V/V）次氯酸鈉和5 mg/L山梨酸鉀，該組合的污染率較低，為36.7%。開放式培養(yǎng)中芽的生長(zhǎng)情況、誘導(dǎo)率均無顯著差異;在繼代增殖和生根培養(yǎng)階段，抑菌劑的最佳組合為40 mg/L代森錳鋅、0.01%（V/V）次氯酸鈉和5 mg/L山梨酸鉀，芽的增殖系數(shù)和生根率較高，分別為5.93%、80.0%，芽生長(zhǎng)良好，與常規(guī)組培無明顯差異。

關(guān)鍵詞 ?切花菊‘白扇（Chrysanthemum cv. Iwanohakusen）;開放式組培快繁;抑菌劑

中圖分類號(hào) ?Q813.1 ??????文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 ?A

Abstract ?An open in vitro culture system was established for the rapid propagation of cut flower Chrysanthemum ‘Iwanohakusen， in which the best explant surface sterilization agent and the best microorganism growth inhibiting agents were screened out. The best explant surface sterilization was obtained by gently shaking the explants in 0.1% （V/V） of sodium hypochlorite for 15 min. The best result for inhibiting the growth of microorganisms in the primary culture stage was achieved by adding 50 mg/L of mancozeb， 0.1% （V/V） of sodium hypochlorite and 5 mg/L of potassium sorbate， into the medium， and under the condition the contamination rate was as low as 36.7%. There was no significant differences in the induction and the growth rates of the adventitious buds between the traditional tissue culture system and the open culture system. The best combination of the microorganism growth inhibiting agents was 40 mg/L of mancozeb， 0.1% （V/V） sodium hypochlorite and 5 mg/L of potassium sorbate at the stages of subculture and the rooting in the open system， and a high bud multiplication efficiency of 5.93% and a rooting rate of 80.0% were achieved at the condition， without any significant difference in bud growth compared to the conventional tissue culture system.

Keywords ?cut flower Chrysanthemum ‘Iwanohakusen （Chrysanthemum cv. Iwanohakusen）; open rapid propagation in vitro; bacteriostatic agents

DOI ?10.3969/j.issn.1000-2561.2019.08.014

‘白扇是我國(guó)從日本引進(jìn)的切花白菊新品種，花色純白，花瓣數(shù)多，耐貯運(yùn)，插花時(shí)間長(zhǎng)，適合在殯葬和祭祀場(chǎng)合使用，在日本和韓國(guó)的需求量巨大，具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，生產(chǎn)上對(duì)種苗的需求巨大[1-2]。

目前生產(chǎn)上普遍采用原種植株腳芽作為插穗進(jìn)行扦插繁殖，雖然方法簡(jiǎn)便，但繁殖系數(shù)較低，繁殖出來的種苗質(zhì)量和開花期參差不齊，采摘的人工成本高;周婷[3]以‘白扇原種植株的帶腋芽莖段為外植體，建立了‘白扇的組培快繁體系。與扦插相比，常規(guī)組培雖然能提高繁殖系數(shù)，繁殖出來的種苗質(zhì)量和開花時(shí)間整齊一致。但在常規(guī)組培中，通常用升汞作為外植體的表面消毒劑，升汞對(duì)外植體毒害大，難回收，對(duì)環(huán)境有污染;此外，培養(yǎng)基需高壓滅菌，接種必須在超凈工作臺(tái)里進(jìn)行，接種環(huán)境要求嚴(yán)格;常規(guī)組培快繁的投資較大、成本較高，限制了在生產(chǎn)上的推廣應(yīng)用。

開放式組培使用較為低毒的外植體消毒劑，且培養(yǎng)基中加入了低毒高效的抑菌劑，因此在一般干凈條件下，就可配制培養(yǎng)基，無需高壓滅菌，培養(yǎng)器械也無需高壓滅菌或干熱滅菌，整個(gè)接種操作無需在超凈工作臺(tái)進(jìn)行，可以簡(jiǎn)化操作程序、節(jié)約時(shí)間和生產(chǎn)成本[4-5]，有利于在生產(chǎn)推廣使用，這一技術(shù)已經(jīng)在藍(lán)莓、紅豆杉、甘蔗、馬鈴薯[6-9]等植物的快繁中得到應(yīng)用。目前，開放式培養(yǎng)多使用單一種類的抑菌劑：百菌清、山梨酸鉀、次氯酸鈉和大蒜素等[10-13]，復(fù)合型抑菌劑使用較少。

本研究以‘白扇原種植株的帶腋芽莖段為外植體，以低毒的次氯酸鈉為表面消毒劑，在初代培養(yǎng)、繼代增殖、生根培養(yǎng)的培養(yǎng)基中加入不同種類和濃度的抑菌劑，找出最適的復(fù)合型抑菌劑配方，建立低毒、高效、環(huán)保的開放式組培快繁體系，為切花菊‘白扇種苗的工廠化生產(chǎn)提供理論依據(jù)和技術(shù)支持，具有重要的理論意義和實(shí)踐價(jià)值。

1 ?材料與方法

1.1 ?材料

‘白扇原種植株由福建省尤溪縣三葉花卉園藝有限公司八字橋種苗生產(chǎn)基地提供，取材前，植株噴施多菌靈一次，于次日晴天10：00左右，摘取長(zhǎng)度15～20?cm的健壯、芽飽滿、無病蟲害的腳芽，剪除葉片，留下葉柄，裝入自封袋，放4?℃冰箱中保存?zhèn)溆谩Ｒ志鷦樯嚼嫠徕洝⒋i鋅和次氯酸鈉，均購(gòu)自上海生工生物技術(shù)服務(wù)有限公司，為普通分析純?cè)噭?/p>

1.2 ?方法

1.2.1 ?外植體的消毒處理 ?用軟毛刷輕輕刷洗‘白扇枝條，切成長(zhǎng)2～3?cm帶有1～2個(gè)腋芽的莖段，流水沖洗30～60?min，再用500倍多菌靈溶液浸泡30 min，無菌水沖洗3次，轉(zhuǎn)入燒杯中備用;將燒杯移至超凈工作臺(tái)，倒入75%酒精浸泡消毒30?s，倒去酒精，再用無菌水沖洗3次，倒去無菌水，轉(zhuǎn)入無菌的燒杯，用不同濃度的次氯酸鈉消毒10、15、20 min，不斷振蕩燒杯，倒去消毒液，用無菌水沖洗5次，轉(zhuǎn)入無菌的接種盤，用接種刀將外植體切成帶有一個(gè)腋芽的莖段，插入培養(yǎng)基，培養(yǎng)基為MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA;每個(gè)消毒處理接30瓶，每瓶接1個(gè)外植體，每處理3個(gè)重復(fù);以0.1%升汞消毒5?min為對(duì)照;接種后25?d，統(tǒng)計(jì)外植體的污染率、成活率和芽生長(zhǎng)情況。

1.2.2 ?開放式培養(yǎng)基的制備方法及配方 ?在干凈的實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，將培養(yǎng)基中各種成份按順序依次混合，加熱至100?℃左右煮沸，使蔗糖和瓊脂完全溶解，攪拌混勻，在室溫下緩慢降溫至60?℃左右，加入抑菌劑，充分?jǐn)嚢杈鶆颍?.1 mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至5.8～6.2，用100?℃熱水定容至指定體積，攪拌混勻，將培養(yǎng)基均勻分裝到潔凈培養(yǎng)瓶中，不進(jìn)行高壓滅菌，冷卻后備用。

開放式培養(yǎng)各階段培養(yǎng)基的配方見表1。

1.2.3 ?開放式培養(yǎng)的接種及培養(yǎng)條件 ?接種條件：選擇普通的接種室，先用75%酒精噴灑房間和接種臺(tái)面，擦拭干凈后，開啟紫外燈照射0.5 h，通風(fēng)10～15 min，接種器械始終浸泡在0.1%（V/V）次氯酸鈉溶液中。

培養(yǎng)的條件：普通培養(yǎng)室，保持空氣及地面潔凈，溫度（25±2）℃、光照強(qiáng)度2000 lx左右、光照時(shí)間12 h/d。

1.2.4 ?開放式初代培養(yǎng) ?將按照1.2.1中的方法消毒處理過的帶腋芽莖段，插入初代抑菌培養(yǎng)基中，每瓶一個(gè)外植體，每處理30瓶，3個(gè)重復(fù)，25 d后統(tǒng)計(jì)污染率、成活率、生長(zhǎng)情況。對(duì)照組的培養(yǎng)基不添加抑菌劑，經(jīng)1.1?kg/cm2壓力和121?℃下滅菌20 min，冷卻后備用，在超凈工作臺(tái)中，按照嚴(yán)格的無菌操作方法接種，下同。

1.2.5 ?開放式繼代培養(yǎng) ?將2～3?cm長(zhǎng)度的組培苗莖段接種到繼代抑菌培養(yǎng)基中，每瓶接種3個(gè)材料，每處理30瓶，每處理3個(gè)重復(fù)，每10?d觀察記錄1次，接種后30?d統(tǒng)計(jì)污染率和增殖系數(shù)。

1.2.6 ?開放式生根培養(yǎng) ?接種材料為繼代增殖中長(zhǎng)勢(shì)好、長(zhǎng)度約2 cm的無根苗，每瓶3株，每處理30瓶，每處理3個(gè)重復(fù)。每10?d觀察記錄1次，接種后30 d統(tǒng)計(jì)污染率、生根率、根數(shù)、根長(zhǎng)等。

1.2.7 ?開放式移栽培養(yǎng) ?取1.2.6中長(zhǎng)良好、根系發(fā)達(dá)的組培苗100株，室溫條件下煉苗2 d，取出輕輕洗去根部培養(yǎng)基，移栽到草炭土∶珍珠巖∶蛭石=2∶1∶1移栽基質(zhì)中，遮陰條件下培養(yǎng)15 d，統(tǒng)計(jì)成活率及植株生長(zhǎng)狀況。對(duì)照組為常規(guī)組培方式培養(yǎng)的生根苗。

1.3 ?數(shù)據(jù)處理

生長(zhǎng)情況包括芽長(zhǎng)勢(shì)、芽長(zhǎng)、葉片顏色與大小等，采用Excel軟件統(tǒng)計(jì)和SPSS 17.0軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

2 ?結(jié)果與分析

2.1 ?表面消毒劑濃度對(duì)常規(guī)初代培養(yǎng)污染率的影響

以‘白扇帶腋芽莖段為材料，用不同濃度次氯酸鈉進(jìn)行表面消毒處理，探討濃度和消毒時(shí)間對(duì)切花菊‘白扇常規(guī)初代培養(yǎng)效果的影響（表2），由表2可知，0.1%（V/V）次氯酸鈉消毒10 min的組合，其污染率最高，顯著高于其他組合與對(duì)照組（0.1%升汞消毒5 min），次氯酸鈉各處理的污染率均與對(duì)照組無明顯差異;0.5%（V/V）次氯酸鈉消毒10、15、20 min和0.1%（V/V）次氯酸鈉消毒10 min，它們的外植體成活率均極顯著低于對(duì)照組，主要是0.5%（V/V）次氯酸鈉濃度太高，消毒時(shí)間太長(zhǎng)，對(duì)外植體的傷害大，導(dǎo)致成活率降低;0.1%（V/V）次氯酸鈉消毒15、20 min，外植體的成活率分別為46.7%和43.3%，與對(duì)照組無顯著差異，0.1%（V/V）次氯酸鈉消毒15 min組合的芽長(zhǎng)勢(shì)比其中0.1%次氯酸鈉消毒20 min的組合好，因此，‘白扇常規(guī)初代培養(yǎng)的最佳表面消毒條件為0.1%（V/V）次氯酸鈉消毒處理15 min。

2.2 ?抑菌劑對(duì)開放式初代培養(yǎng)效果的影響

在常規(guī)初代最佳培養(yǎng)基中添加不同種類和濃度的抑菌劑，探討抑菌劑組合對(duì)開放式初代培養(yǎng)效果的影響（表3，圖1），由表3可見，在污染率上，3、5、6、8、9號(hào)處理與其他處理具有極顯著差異，且極顯著高于對(duì)照組，其中3和9號(hào)處理污染率高達(dá)100%，主要是抑菌劑的濃度過低造成。1、2、4、7號(hào)處理與對(duì)照組的差異均不顯著，其中，1、4、7號(hào)處理均低于對(duì)照組，4和7號(hào)處理最低，均為36.7%;在外植體生長(zhǎng)上，與4號(hào)處理相比，7號(hào)處理的腋芽長(zhǎng)勢(shì)更好，芽更長(zhǎng)，抽出的葉片更綠，且與對(duì)照組無明顯差異。從表中R值可知，3種抑菌劑中，代森錳鋅對(duì)污染率影響最大，其次是次氯酸鈉，山梨酸鉀影響最小;由K值可以確定理論上初代最佳抑菌劑濃度組合為：代森錳鋅50 mg/L，次氯酸鈉0.010%（V/V），山梨酸鉀5 mg/L。該濃度既可以有效降低污染率，且不會(huì)影響誘導(dǎo)芽生長(zhǎng)。

2.3 ?抑菌劑對(duì)開放式繼代增殖效果的影響

在常規(guī)繼代增殖最佳培養(yǎng)基中添加不同種類和濃度的抑菌劑，探討不同抑菌劑組合對(duì)開放式繼代增殖培養(yǎng)效果的影響（表4，圖2）。從表中可知，增殖培養(yǎng)的污染率均隨著抑菌劑濃度的升高而逐漸下降，增殖系數(shù)則呈現(xiàn)先增高后降低的趨勢(shì);從污染率來看，1和2號(hào)組合的污染率極顯著高于其它組合與對(duì)照組（高壓滅菌培養(yǎng)基與無菌操作接種），3、4、5和6組合與對(duì)照組沒有顯著差異，因此，代森錳鋅濃度在30～60?mg/L范圍內(nèi)，即可達(dá)到較為有效的抑菌效果;從無菌苗的增殖情況來看，1、2和3號(hào)組合因污染率高，導(dǎo)致其增殖系數(shù)降低，均極顯著低于對(duì)照組，在5和6號(hào)組合中增殖的無菌苗，因其抑菌劑濃度較高，生長(zhǎng)較弱，分化芽少，芽短，導(dǎo)致增殖系數(shù)極顯著低于對(duì)照組;從表4可以看出，4號(hào)處理組合的增殖系數(shù)為5.93%，顯著高于其他組合，與對(duì)照組無顯著差異，該處理的抑菌劑濃度較為合理，既可抑制污染，又不會(huì)對(duì)無菌苗的生長(zhǎng)造成傷害。因此，‘白扇開放式繼代增殖培養(yǎng)基的最佳抑菌組合為4號(hào)組合，即添加5?mg/L山梨酸鉀、40 mg/L代森錳鋅和0.010%（V/V）次氯酸鈉。

2.4 ?抑菌劑對(duì)開放式生根培養(yǎng)效果的影響

在常規(guī)生根最佳培養(yǎng)基中添加不同種類和濃度的抑菌劑，探討不同抑菌劑組合對(duì)開放式生根培養(yǎng)效果的影響（表5，圖3）。從污染情況來看，1和2號(hào)組合的污染率極顯著高于其他組合與對(duì)照組（高壓消毒培養(yǎng)基和無菌操作接種），主要是抑菌劑濃度過低造成;3、4、5和6號(hào)組合的污染率與對(duì)照組均無明顯差異;生根率、根長(zhǎng)和根數(shù)隨抑菌劑濃度的增高呈現(xiàn)先增高后下降的趨勢(shì)。從生根率來看，1、2、5和6號(hào)組合的生根率均極顯著低于其他組合與對(duì)照組，主要是污染率過高和死亡率過高造成;3和4號(hào)組合的生根率極顯著高于其他組合，但3號(hào)組合的生根率顯著低于對(duì)照組，這是由于3號(hào)的抑菌劑濃度較低導(dǎo)致污染率較高，從而使生根率偏低;4號(hào)組合生根率為80%，與對(duì)照組無顯著差異，這是因?yàn)樵摑舛燃纫种屏宋廴荆謱?duì)無菌苗傷害較小;從根長(zhǎng)來看，高濃度的代森錳鋅影響很大，1、2、3、5、6號(hào)組合的根長(zhǎng)均極顯著低于對(duì)照組，主要是因?yàn)槲廴韭屎退劳雎瘦^高;4號(hào)組合的平均根長(zhǎng)2.93 cm，與對(duì)照組無顯著差異，該濃度抑菌效果最佳，且能促進(jìn)根系生長(zhǎng);從生根數(shù)來看，1、2、5和6號(hào)組合的根數(shù)與其它組合和對(duì)照組均具有極顯著差異，3號(hào)組合與對(duì)照組有顯著差異，4號(hào)組合的平均根數(shù)為8.68根，與對(duì)照組無明顯差異，該濃度既可有效抑制污染，且能促進(jìn)生根。因此，‘白扇開放式生根培養(yǎng)基中最佳的抑菌劑組合為4號(hào)，即在生根培養(yǎng)基中添加5?mg/L山梨酸鉀、40 mg/L代森錳鋅和0.010%（V/V）次氯酸鈉。

2.5 ?抑菌劑對(duì)開放式移栽培養(yǎng)效果的影響

抑菌處理培養(yǎng)的生根苗的移栽情況見表6，由表中數(shù)據(jù)可知：開放式培養(yǎng)移栽苗的成活率為95%，對(duì)照組成活率為98%，差異不大，但是植株的生長(zhǎng)狀況有一定的差別，開放式移栽苗的葉片普遍稍小于對(duì)照組，但莖稈比對(duì)照組粗。

3 ?討論

植物開放式組培的相關(guān)研究越來越熱，日本已經(jīng)廣泛應(yīng)用在多種觀賞植物中[14]。其核心問題在于找到安全高效的外植體消毒劑以及高效穩(wěn)定且不影響無菌苗生長(zhǎng)的抑菌劑。

在常規(guī)組培中，多使用0.01%的升汞作為外植體消毒劑，雖然效果良好，但是該消毒劑毒性較大，回收不便，且易對(duì)環(huán)境造成污染。因此，在開放式組培中需要尋找低毒且高效的消毒劑。本研究采用次氯酸鈉溶液對(duì)外植體消毒，具有安全低毒高效的殺毒效果。研究結(jié)果表明，0.1%（V/V）的次氯酸鈉浸泡外植體15 min可有效對(duì)外植體進(jìn)行消毒，且誘導(dǎo)芽生長(zhǎng)情況與升汞消毒的誘導(dǎo)芽無明顯差異，適宜作為外植體的表面消毒劑。

開放組培污染來源廣泛，主要由細(xì)菌、真菌、酵母菌及放線菌等微生物引起[15]。在開放式初代培養(yǎng)中，污染主要來源于接種室的空氣和地面、外植體本身、接種操作不當(dāng)引起的污染以及培養(yǎng)基污染[16];繼代增殖和生根培養(yǎng)階段，主要是接種室的空氣和地面、操作污染以及培養(yǎng)基污染[17]。針對(duì)不同階段的污染來源，在開放式組培中，應(yīng)當(dāng)保持接種室干凈無塵，外植體提前進(jìn)行預(yù)處理[18]，培養(yǎng)基選擇加入不同種類的抑菌劑，從而達(dá)到廣泛而長(zhǎng)效抑菌的效果。本研究中，在開放式培養(yǎng)各階段加入不同種類不同濃度的抑菌劑，觀察抑菌效果，結(jié)果顯示，開放式培養(yǎng)中，抑菌劑的加入能夠有效抑止培養(yǎng)基的污染，從整體來看，添加低濃度抑菌劑時(shí)污染率較高，顯著高于常規(guī)培養(yǎng)，添加高濃度抑菌劑時(shí)污染率較低，但植株的生長(zhǎng)會(huì)受到顯著影響，主要表現(xiàn)為葉片發(fā)黃甚至枯萎。因此，開放組培需要找到既能降低污染率又不影響植株生長(zhǎng)的抑菌劑濃度。

本研究選用的3種抑菌劑具有較為廣泛的抑菌能力，其中，山梨酸鉀是一類化學(xué)類酸性抗菌防腐劑，主要是通過抑制微生物體內(nèi)的脫氫酶系統(tǒng)，達(dá)到抑制微生物生長(zhǎng)的效果，對(duì)細(xì)菌、霉菌、酵母菌等微生物的生長(zhǎng)均有抑制作用;代森錳鋅在化學(xué)結(jié)構(gòu)上屬于二硫代氨基甲酸鹽類殺菌劑，是一種廣譜性殺菌劑，要害小，對(duì)細(xì)菌、真菌、酵母菌和藻類有效，作用機(jī)理是抑制硫基;次氯酸鈉能夠在水中分解出氧化性極強(qiáng)的氧負(fù)離子，能夠與蛋白中的氨基結(jié)合而使其變性，從而起到殺菌作用[19]。因此可知，單一抑菌劑具有較為單一的抑菌效果，而不同的抑菌劑組合在一起使用，能取得較好的抑菌效果[20]。前人亦有使用這3種抑菌劑在開放式組培試驗(yàn)中，黃敏等[21]在鐵皮石斛開放式培養(yǎng)時(shí)，添加不同濃度的代森錳鋅到繼代培養(yǎng)基中，探索最佳的抑菌濃度，結(jié)果表明，代森錳鋅濃度為0.02%時(shí)，增殖系數(shù)高達(dá)2.68，且污染率較低;李松等[8]在研究中發(fā)現(xiàn)，甘蔗開放式培養(yǎng)基中次氯酸鈉的最佳添加濃度為1?g/L，該濃度能夠有效抑制污染，且甘蔗組培苗長(zhǎng)勢(shì)較好;解輝等[22]亦在香蕉開放式組培中發(fā)現(xiàn)，次氯酸鈉具有較好的殺菌效果，能夠有效抑制培養(yǎng)基污染;王丹等[11]在研究中指出，紅豆杉開放式培養(yǎng)中，山梨酸鉀能夠取得較好的殺菌效果，且抑菌濃度為為0.02 g/L時(shí)，效果最佳。由此可見，抑菌劑在開放式組培中具有廣闊的應(yīng)用前景。

根據(jù)前人經(jīng)驗(yàn)，在本試驗(yàn)中，將3種抑菌劑混合配成復(fù)合型抑菌劑，能夠發(fā)揮各自的抑菌能力，從而能夠達(dá)到廣泛的抑菌效果。研究結(jié)果表明：在切花菊‘白扇的初代培養(yǎng)中，培養(yǎng)基中添加代森錳鋅50 mg/L，次氯酸鈉0.010%（V/V），山梨酸鉀5 mg/L，就可抑制組培污染，且腋芽生長(zhǎng)狀況與傳統(tǒng)方式無明顯差異;增殖繼代和生根培養(yǎng)在培養(yǎng)基中加入5 mg/L山梨酸鉀，40 mg/L代森錳鋅，0.010%（V/V）次氯酸鈉，可有效抑制污染，且組培苗的增殖系數(shù)、生根率與常規(guī)組培無明顯差異。其中，代森錳鋅濃度的變化對(duì)污染率和植株的生長(zhǎng)影響最大。代森錳鋅濃度從10 mg/L增加到60 mg/L時(shí)，增殖繼代污染率從34.4%降低到4.4%，生根培養(yǎng)中污染率從34.4%降低到5.5%，而植株的長(zhǎng)勢(shì)皆則隨著濃度的增高逐漸變差，主要表現(xiàn)為無菌苗葉片較小，發(fā)黃，根系發(fā)黑，較短。

開放式培養(yǎng)因在培養(yǎng)基中添加了抑菌劑，一定程度上會(huì)抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)，降低污染率，但因抑菌劑的加入，無菌苗的生長(zhǎng)也在一定程度上受到了影響。本試驗(yàn)中，次氯酸鈉能夠分解氧負(fù)離子，從而與蛋白結(jié)合致使其失活，植株的葉片因此失綠，植株活力降低，無菌苗增殖數(shù)量略少于傳統(tǒng)組培的無菌苗數(shù)量;根長(zhǎng)較常規(guī)組培短，這可能由于抑菌劑的加入改變了培養(yǎng)基的pH，導(dǎo)致無菌苗無法有效吸收培養(yǎng)基中的NAA，使根系生長(zhǎng)受到影響，前人的研究亦表明抑菌劑對(duì)無菌苗的生長(zhǎng)有一定抑制[20， 23]，但抑菌機(jī)理的相關(guān)研究尚不完善。此外，開放式生根苗移栽苗的生長(zhǎng)情況略差與對(duì)照組，可能是抑菌劑影響了植株的生長(zhǎng)能力。因此，在切花菊開放組培中，如何減少抑菌劑對(duì)無菌苗的增殖、生根以及移栽影響，還需要后續(xù)的深入研究。

綜合來看，本研究初步建立了切花菊‘白扇開放式組培體系，操作方法簡(jiǎn)單有效，可根據(jù)具體情況，加以優(yōu)化，便可應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐。

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