門氏芪元顆粒的制備工藝研究

1.山西中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，山西 晉中 030619; 2.山西中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合臨床學(xué)院，山西 晉中 030619

門氏芪元顆粒來源于山西名醫(yī)門九章教授的經(jīng)驗方門氏芪元湯，由黃芪、當(dāng)歸、玄參、金銀花等中藥組成。門氏芪元湯臨床使用多年，具有益氣養(yǎng)陰，化瘀解毒的功效，用于氣陰兩虛證。方中的金銀花具有抗內(nèi)毒素、解熱、抗炎作用[1]，玄參、當(dāng)歸含有多糖[2]、黃酮類化合物[3]、揮發(fā)油[4]等多種化學(xué)成分，具有抗腫瘤、抗氧化等生理活性[5-7]，黃芪主要有效成分為黃芪甲苷，具有免疫調(diào)節(jié)、降糖、抗病毒等藥理作用[8]。本方在臨床上療效明確，為滿足臨床用藥需求，將其由傳統(tǒng)湯劑研發(fā)成為醫(yī)院顆粒制劑。門氏芪元顆粒欲申報醫(yī)院制劑，中試生產(chǎn)已經(jīng)完成，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)也已經(jīng)確定，本研究通過L9(34)正交設(shè)計試驗法優(yōu)選門氏芪元顆粒的最佳提取工藝，然后通過考察不同輔料配比、潤濕劑用量，以顆粒成型性、溶化性、吸濕率、堆密度及休止角為指標(biāo)，篩選處方中加入輔料配比及最佳成型工藝，為門氏芪元顆粒的制備工藝研究提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters-e2695高效液相色譜儀及Waters-2424蒸發(fā)光散射檢測器(美國Waters公司)；BGZ-76型烘箱(上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠)；TDZ5-WS型離心機(湖南湘立科學(xué)儀器有限公司)；DiamonsilC18色譜柱(4.6 mm×200 mm，5 μm)；微量進樣器(批號：113048；上海高鴿工貿(mào)有限公司)；SB-5200DTDN超聲清洗器(新芝生物科技股份有限公司)；AB-135型十萬分之一電子天平(瑞士METTLER公司)；FA2014型萬分之一天平(上?？萍加邢薰?；FW100型萬能粉碎機(北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司)；定性濾紙(杭州富陽北木漿紙有限公司)，蒸鍋，燒杯，量筒，砝碼，培養(yǎng)皿，蒸發(fā)皿，玻璃棒，漏斗，紗布，塑料布，藥匙，篩網(wǎng)，5 mL離心管，分液漏斗，玻璃干燥器，稱量瓶。

1.2 試藥 黃芪藥材(太谷縣廣源堂藥業(yè)有限公司，市售，1.0 kg/袋，批號：1607001)；玄參藥材(河北全泰藥業(yè)有限公司，市售，1.0 kg/袋，批號1608003)；當(dāng)歸藥材(鄭州瑞龍制藥股份有限公司，市售，1.0 kg/袋，16120102)；金銀花藥材(河北全泰藥業(yè)有限公司，市售，1.0 kg/袋，批號：1608201)；糊精(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，500 g/瓶)；可溶性淀粉；氯化鈉。

2 方法與結(jié)果

2.1 門氏芪元顆粒提取工藝

2.1.1 單因素考察 分別對溶劑倍量、提取時間、提取次數(shù)進行了考察，結(jié)果表明溶劑倍量為14倍、提取次數(shù)為3次，每次1.0 h時，綜合評分達到最大；提取次數(shù)不斷增加，綜合評分也隨之增加。

2.1.2 正交試驗設(shè)計 以出膏率、黃芪甲苷的提出量作為考察指標(biāo)，以水為提取溶劑，進行L9(34)正交試驗[9]選擇三個影響因素分別為加水量(A)，提取時間(B)和提取次數(shù)(D)，確定提取的最佳條件。

2.1.3 按照處方稱取各藥材，共9份，按表1正交試驗設(shè)計方案進行提取，計算出膏率。

表1 因素水平表

2.2 黃芪甲苷含量測定

2.2.1 色譜條件 Diamonsil C18色譜柱(200 mm×4.6 mm，5.0 μm)；以乙腈-水(32∶68)為流動相，流速為1.00 mL/min；柱溫：30 ℃;蒸發(fā)光散射檢測器參數(shù)；載氣流速2.1 L/min，漂移管溫度為100 ℃。

2.2.2 對照品溶液的制備[10]精密稱取黃芪甲苷對照品加甲醇制備0.314 mg/mL的對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備[11]精密稱取樣品干膏2.0 g，置錐形瓶中并精密加入甲醇100 mL，加熱回流1 h，冷卻，過濾。用甲醇少量多次洗滌藥渣，合并濾液，蒸干，殘渣加水20 mL使其溶解。加水飽和正丁醇液40 mL，振搖提取3次，合并正丁醇液，加氨水40 mL，洗滌3次。棄去氨液，蒸干正丁醇液，殘渣用甲醇溶解，作為供試品溶液。

2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別精密吸取黃芪甲苷對照品儲備溶液4、8、10、12、16、20 μL，注入高效液相色譜儀，以黃芪甲苷進樣質(zhì)量的對數(shù)為橫坐標(biāo)，峰面積的對數(shù)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為Y=1.6442X+5.3244，r=0.9999，在1.256～9.420 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。結(jié)果見表2和圖1。

表2 黃芪甲苷線性關(guān)系考察

2.2.5 測定法 采用高效液相色譜法，精密吸取供試品溶液20 μL，記錄峰面積，計算黃芪甲苷的提出量。

2.2.6 測定結(jié)果 見表3。

表3 正交試驗設(shè)計結(jié)果

表4 方差分析結(jié)果

查方差分析表，α=0.05F0.05(2，2)=19.00。

通過表3極差r可知，三個影響因素的影響大小是：D>A>B，即提取次數(shù)影響最大，而提取時間影響最小。直觀分析可得，較佳提取工藝條件為：A3B2D3，即14倍量水，提取3次，每次1.0 h。從表4方差分析可知，B和A因素沒有顯著性影響，D因素有顯著性影響。綜合考慮經(jīng)濟效益等因素，得出門氏芪元顆粒的最佳提取工藝為：A1B1D3，即10倍量水，提取3次，每次0.5 h。

2.2.7 工藝驗證 按處方比例稱取藥材3份，按最佳提取工藝進行提取，按照供試品溶液的制備方法進行制備，記錄峰面積，計算出膏率和黃芪甲苷的提出量，結(jié)果見表5。

表5 工藝驗證結(jié)果

2.3 制劑成型工藝研究

2.3.1 制粒方法選擇 濕法制粒[12]是當(dāng)前最為廣泛應(yīng)用的制粒方法，在制粒之前將粘合劑或者濕潤劑等添加到藥粉中，將藥粉制成濕潤顆粒，其制粒效果較高。通過濕法制粒增強了顆粒的粘合性且顆粒容易成型。采用稠浸膏干燥，粉碎后以相應(yīng)比例的輔料補足至處方量，混勻，制成顆粒。本制劑采用藥粉∶輔料=1∶1。

2.3.2 潤濕劑的選擇 本復(fù)方在經(jīng)過水煎煮濃縮后發(fā)現(xiàn)稠膏黏性較強，而且含糖量高。顆粒制劑過程中以一定濃度的乙醇為潤濕劑，降低粘性和吸濕性便于顆粒成型。以手捏成團，輕壓則散為原則篩選乙醇的濃度。結(jié)果見表6和圖2～4。

表6 不同濃度乙醇對制粒的影響

圖2 80%乙醇

圖3 95%乙醇

圖4 100%乙醇

因此，選擇95%的乙醇做為潤濕劑進行制粒。

2.3.3 吸收劑淀粉、糊精用量的選擇 選擇糊精和可溶性淀粉作為輔料進行處方篩選。結(jié)果見表7。

表7 不同輔料比與干浸膏粉的配比處方

2.3.4 顆粒成型性比較 將干浸膏粉按表表六中方法與相應(yīng)輔料混勻，95%乙醇制粒。以篩分法[13]對顆粒進行測定，取平均值。結(jié)果見表8。

成型率=(過篩后顆粒的質(zhì)量/過篩前顆粒的質(zhì)量)×100% 。

表8 成型率測定

2.3.5 顆粒溶化性比較 精密稱定的顆粒0.2 g，加入干燥恒重的5 mL離心管中，精密加入沸水5 mL，振蕩5 min，3000 r/min離心15 min，棄去上清液，80 ℃進行干燥，精密稱定重量，計算溶化率。結(jié)果見表9。

溶化率=溶化顆粒質(zhì)量/顆粒質(zhì)量×100%。

表9 溶化率測定

2.3.6 顆粒吸濕率的比較 在玻璃干燥器裝入過飽和室溫氯化鈉溶液，置于25 ℃的恒溫培養(yǎng)箱24 h，干燥器內(nèi)部相對濕度為75%，在已恒重的稱量瓶底部放入各處方顆粒，準(zhǔn)確稱重后置于裝有過飽和氯化鈉溶液的玻璃干燥器內(nèi)(稱量瓶蓋打開)，放于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱，72 h后稱定重量，計算顆粒吸濕百分率[14]。結(jié)果見表10。

吸濕百分率(%)=(吸濕后顆粒質(zhì)量-吸濕前顆粒質(zhì)量)/吸濕前顆粒質(zhì)量×100%。

表10 吸濕率測定

2.3.7 堆密度的測定 將過篩后的質(zhì)量作為M(g)并裝入干燥的量筒中，輕輕振動，記錄體積(V)，兩者的比值即為堆密度。結(jié)果見表11。

堆密度=M/V。

表11 堆密度測定

2.3.8 休止角的測定 采用固定漏斗法，計算休止角tga=H/R.重復(fù)做5次，計算平均值。結(jié)果見表12。

表12 休止角測定

2.3.9 綜合評分 根據(jù)表中綜合評分可知，處方3號92.23分為最高分，故篩選最優(yōu)原輔料配比為浸膏粉∶糊精∶淀粉=4∶1∶3，95%的乙醇進行制粒。見表13。

2.4 門氏芪元顆粒樣品 見圖5。

圖5 門氏芪元顆粒

表13 綜合評分

3 討論

提取工藝的確定 采用正交試驗和高效液相色譜法，以出膏率和黃芪甲苷在復(fù)方中的提出量為評價指標(biāo)進行評價。最后確定的提取工藝為：10倍量水，提取3次，每次0.5 h。

顆粒成型工藝的確定 按最優(yōu)原輔料配比，即處方浸膏粉∶糊精∶可溶性淀粉=4∶1∶3，以95%乙醇為潤濕劑制粒。

門氏芪元顆粒來源于名老中醫(yī)門九章經(jīng)驗方門氏芪元湯，臨床效果良好，中藥湯劑作為中醫(yī)臨床用藥的主要劑型，可以隨證加減、靈活組方，但攜帶、煎煮不便，湯液味苦量大，不易被接受。中藥配方顆粒與傳統(tǒng)湯劑相比不需要煎煮，服用時溫開水配成沖劑即可，便于攜帶、保存方便；解決了傳統(tǒng)中藥保質(zhì)期短、中藥飲片易潮易蟲蛀的缺點。

本方為復(fù)方，所含成分較多，若使用紫外檢測波長檢測雜質(zhì)對色譜峰的干擾較大。而ELSD檢測器作為一種通用型的的檢測器，可檢測揮發(fā)性低于流動相的任何樣品，不需要樣品含有發(fā)色基團?；€穩(wěn)定僅對不揮發(fā)性物質(zhì)顆粒進行檢測，不存在紫外末端吸收的問題，流動相低溫霧化和蒸發(fā)，對熱不穩(wěn)定和揮發(fā)性化合物亦有較高靈敏度，對溫度變化不敏感，即使在梯度洗脫時基線也很平穩(wěn)，所以本文最終確定了用 HPLC-ELSD方法對門氏芪元顆粒中的黃芪甲苷進行含量測定。

中藥顆粒劑是以中藥湯劑為原料，經(jīng)過提取、分離、制粒、干燥、制粒過程完成，且成分較為復(fù)雜，為充分發(fā)揮中藥的各種成分，提高中藥顆粒的療效，在中藥顆粒劑提取、純化分離、制粒過程中需認(rèn)真仔細，中藥顆粒劑發(fā)展迅速，可取代傳統(tǒng)中藥湯劑，滿足人們用藥治病的需求。