評估國產利奈唑胺對葡萄球菌和腸球菌體外抗菌活性

于淑穎，肖 盟， 楊文航， 程敬偉，周夢蘭，陳新飛，張 戈， 劉亞麗， 楊啟文，孫宏莉， 黃 勛， 伍眾文， 黃文祥， 楊 青， 俞云松， 徐英春

本研究就臨床常見革蘭陽性菌對中國江蘇豪森公司研制生產的仿制藥利奈唑胺（商品名恒捷，以下稱國產利奈唑胺）的體外藥物敏感性，與美國輝瑞公司生產的利奈唑胺（商品名斯沃，以下稱進口利奈唑胺）進行對比，評估國產利奈唑胺的體外抗菌活性及其與進口利奈唑胺的一致 性。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株來源 本研究選取2014－2017年皮膚軟組織、呼吸道、血液、腹腔等感染部位分離的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）、甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌（MSSA）、耐甲氧西林凝固酶陰性葡萄球菌（MRCNS）、甲氧西林敏感凝固酶陰性葡萄球菌（MSCNS）和VRE各50株，共計250株。上述菌株收集自中國多所醫學中心：北京協和醫院117株、中南大學湘雅醫院45株、中山大學附屬第一醫院25株、重慶醫科大學附屬第一醫院27株、浙江大學附屬第一醫院19株和浙江大學附屬邵逸夫醫院17株。

1.1.2 質控菌株 金黃色葡萄球菌ATCC 29213和糞腸球菌ATCC 29212標準菌株為質控菌株。

1.1.3 試劑與儀器 本研究所用藥物為國產利奈唑胺（注射液，100 mL：0.2 g），進口利奈唑胺（注射液，300 mL：0.6 g），達托霉素（阿斯利康制藥有限公司，0.5 g/瓶），替加環素（惠氏制藥有限公司，50 mg/瓶），左氧氟沙星［第一三共（北京）有限公司，注射液，100 mL∶0.5 g］，萬古霉素、替考拉寧和苯唑西林標準品從中國食品藥品檢定研究院購買。用于制作微量肉湯稀釋法的陽離子調節（Cation-adjusted Mueller-Hinton Broth，CAMHB）干粉為美國BD公司商品，哥倫比亞血平板購自北京欣隆福醫藥銷售有限公司。MALDI-TOF MS（簡稱VITEK MS）及配套的VITEK MS-CHCA基質和靶板購自法國生物梅里埃公 司。

1.2 方法

1.2.1 VITEK MS 入組菌株采用VITEK MS進行鑒定，菌落均勻涂布在靶板上，滴加1 μL基質，待干燥后放入機器采集峰圖，與數據庫中的峰圖比對得出鑒定結果及鑒定率，具體操作遵照儀器使用說明書?？尚哦却笥?0%，認為鑒定至種水 平。

1.2.2 16S rDNA測序 對質譜鑒定未出結果或鑒定率低的菌株，補充16S rDNA的基因擴增和測序進行進一步鑒定，所有菌株均鑒定至種的水平。采用煮沸法提取DNA，將菌落挑入200 μL DNA提取液，震蕩混勻，100 ℃水浴10 min后離心，將DNA產物送至北京睿博興科生物技術有限公司進行測序，測序結果在GenBank網站上進行比對。

1.2.3 藥敏試驗 參照美國臨床與實驗室標準化協會（CLSI）M100-S26推薦的微量肉湯稀釋法，平行測定國產利奈唑胺 、 進口利奈唑胺 、萬古霉素、替考拉寧、達托霉素、苯唑西林、替加環素和左氧氟沙星8種藥物的MIC值。在調節過陽離子的CAMHB肉湯中加入氯化鈣使鈣離子終濃度為500 mg/L，以滿足達托霉素發揮藥效的環境。

1.2.4 敏感率和耐藥率計算 根據MIC值計算MIC范圍、MIC50、MIC90和幾何均數（GM），結果判讀以CLSI M100-S26推薦折點為判斷標準[4]，比較國產和進口利奈唑胺藥敏檢測結果間的一致性及8種抗菌藥物的抗菌活性。兩種利奈唑胺的一致性通過分類一致率（categorical agreement， CA）（極大錯誤、大錯誤和小錯誤的發生率）以及基本一致率（essential agreement， EA）進行評價。CA指待測藥物與參考藥物判讀結果的一致率，如二者均判讀為敏感、中介或耐藥[5]。EA指待測藥物檢測MIC值與參考藥物完全一致或相差不超過±1個稀釋倍數[6]。

1.2.5 結果分析 藥敏數據分析采用WHONET 5.6版軟件進行。

2 結果

2.1 菌株來源

從6所醫院收集的MRSA、MSSA、MRCNS、MSCNS、VRE各50株，共計250株，其中分離自傷口組織和各類膿液標本占28.4%，血液標本占22.0%，呼吸道標本占19.6%，尿液標本占12.8%，腹水和引流液標本占6.0%，胸腔積液占2.8%，腦脊液標本占2.0%，其他標本占6.4%。72.4%的菌株分離自非重癥監護病房（ICU）住院患者，14.8%的菌株分離自ICU患者，12.8%分離自門急診患者。

2.2 國產利奈唑胺的體外抗菌活性

表1顯示250株受試革蘭陽性菌對包括兩種利奈唑胺在內的8種抗革蘭陽性菌的抗菌藥物的敏感率。其中國產利奈唑胺對葡萄球菌和VRE均具有高度的抗菌活性，該藥對金黃色葡萄球菌的MIC50和MIC90分別為2 mg/L和4 mg/L，對凝固酶陰性葡萄球菌的MIC50和MIC90分別為1 mg/L和2 mg/L，對VRE的MIC范圍、MIC50和MIC90分別為0.5～2 mg/ L、2 mg/L和2 mg/L。總體來看，本研究納入的全部葡萄球菌和腸球菌均對國產利奈唑胺呈現敏感。

2.3 國產利奈唑胺和進口利奈唑胺體外抗菌活性的比較

國產利奈唑胺和進口利奈唑胺對葡萄球菌和腸球菌的抗菌活性比較，結果發現國產利奈唑胺對50株MSSA的MIC50為2 mg/L，較進口利奈唑胺對MSSA（MIC50=4 mg/L）低一個稀釋度。此外國產利奈唑胺對其他受試葡萄球菌屬細菌和VRE菌株的MIC范圍、MIC50和MIC90與進口利奈唑胺完全相同。各受試細菌對國產和進口利奈唑胺的敏感率均高達100%（表1）。

表1 兩種利奈唑胺對250株革蘭陽性菌的體外抗菌活性Table 1 In vitro antimicrobial activity of two linezolid products against 250 strains of gram-positive cocci

表1 （續）Table 1（continued）

2.4 兩種利奈唑胺藥敏測定結果的一致性分析

國產利奈唑胺和進口利奈唑胺對MRSA、MSSA、MRCNS、MSCNS和VRE的抗菌藥物敏感性結果的CA和EA均高達100%。國產利奈唑胺對全部受試菌株的MIC值與進口利奈唑胺相比不超過±1個稀釋梯度。兩種利奈唑胺對凝固酶陰性葡萄球菌和腸球菌的MIC值基本相同。雖然金黃色葡萄球菌中，國產利奈唑胺對8.0%（4/50）的MRSA和22.0%（11/50）的MSSA的MIC值比進口利奈唑胺MIC值低1個稀釋度，但是并不影響CA?？傮w上說，兩種利奈唑胺對MRSA、MSSA、MRCNS、MSCNS和VRE的體外藥敏測定結果高度一致（表2）。

2.5 其他抗菌藥物的體外抗菌活性

研究結果顯示，替加環素、達托霉素、萬古霉素和替考拉寧對葡萄球菌具有很好的抗菌活性，除了MRCNS對替考拉寧的敏感率為88.0%，葡萄球菌對這4種抗菌藥物的敏感率均高達100%。相比之下，葡萄球菌對左氧氟沙星的敏感率明顯低于上述4種抗菌藥物，MRSA和MRCNS對左氧氟沙星的敏感率（8.0%和34.0%）低于MSSA和MSCNS的敏感率（64.0%和82.0%）。對于VRE菌株，替加環素和達托霉素仍呈現很好的抗菌活性，VRE菌株對兩藥的敏感率均高達100%；而對替考拉寧的敏感率為50%，對左氧氟沙星全部耐 藥。

3 討論

利奈唑胺對多重耐藥革蘭陽性球菌有良好抗菌活性。朱徳妹等[2]通過測定利奈唑胺對579株臨床分離菌的體外抗菌活性，并與有關抗菌藥物進行比較，認為利奈唑胺對需氧革蘭陽性球菌，包括多重耐藥菌具有高度抗菌活性，且與其他抗菌藥物間無交叉耐藥。提示利奈唑胺對革蘭陽性球菌，尤其是多重耐藥株所致感染的控制將具有重要作用。利奈唑胺在我國已于2007年9月用于臨床，目前臨床所應用的利奈唑胺多以進口為主，隨著我國醫藥自主研發的不斷投入，許多進口藥物相繼在我國可以自主合成。

表2 兩種利奈唑胺對250株革蘭陽性菌的MIC值比較以及一致率評價Table 2 Consistency of MIC values against 250 strains of gram-positive cocci compared between domestic linezolid and original linezolid

本研究結果顯示，國產利奈唑胺對革蘭陽性菌具有極好的體外抗菌活性，250株革蘭陽性菌株對國產利奈唑胺均呈現敏感狀態。同時，本研究顯示國產利奈唑胺與進口利奈唑胺對受試菌株的體外抗菌活性結果高度一致， 雖然有18株菌株（7.2%，18/250）的MIC值出現了不一致，但是僅相差±1個濃度梯度，且未發生極大錯誤、大錯誤和小錯誤。

本研究存在6株（12.0%，6/50）MRCNS菌株對替考拉寧耐藥，包括5株溶血葡萄球菌和1株表皮葡萄球菌。類似的結果也出現在日本Nakamura等[7]對1992－2001年血培養分離出的凝固酶陰性葡萄球菌對多種抗真菌藥物敏感性的調查，發現10.3%（61株）的凝固酶陰性葡萄球菌對替考拉寧不敏感，包括56株表皮葡萄球菌、1株頭狀葡萄球菌和1株溶血葡萄球菌。這也提示我們應該對凝固酶陰性葡萄球菌逐漸產生替考拉寧的耐藥現象給予必要的關注。此外，本研究中對替考拉寧耐藥的VRE菌株均攜帶vanA基因，VanA 型VRE的 VanS蛋白的組氨酸激酶活性可被萬古霉素及替考拉寧激活，VanA 型VRE對萬古霉素和替考拉寧均耐藥[8]。本研究尚未發現對替加環素和達托霉素不敏感的菌株，替加環素和達托霉素對于多重耐藥革蘭陽性菌具有很好的抗菌活性。多重耐藥革蘭陽性菌對左氧氟沙星的敏感性很差，臨床上使用該藥物治療多重耐藥革蘭陽性菌感染時應當予以注意。

總之，國產利奈唑胺對多重耐藥葡萄球菌及腸球菌具有極強的體外抗菌活性，且與進口利奈唑胺的體外抗菌活性高度一致。