口腔白斑及口腔鱗癌組織中Livin和Smac蛋白的表達(dá)

祝 磊，韓 雪

(1.鄭州拜博醫(yī)療集團(tuán)有限公司惠濟(jì)泰康拜博口腔門診部，河南 鄭州 450000；2.鄭州人民醫(yī)院口腔科，河南 鄭州 450053)

口腔白斑病是臨床上常見的口腔黏膜表面白色斑塊。口腔鱗癌占口腔頜面部惡性腫瘤的80%以上，是口腔最常見的惡性腫瘤。由正常口腔黏膜到口腔白斑再到口腔鱗癌是一個(gè)漸進(jìn)的過程。Livin和第二個(gè)線粒體衍生半胱天冬氨酸蛋白酶激活劑(second mitochondria-derived activator of caspase，Smac)是多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中的關(guān)鍵因素[1-2]。本研究采用免疫組化S-P法聯(lián)合檢測(cè)Livin和Smac蛋白在口腔正常黏膜、口腔白斑及口腔鱗癌組織中表達(dá)情況，以期為識(shí)別口腔白斑的早期癌變提供臨床參考數(shù)據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料所有63例病理標(biāo)本均選自2012年1月至2016年12月鄭州人民醫(yī)院病理科存檔的蠟塊和口腔科活檢切取的組織。標(biāo)本均由2位經(jīng)驗(yàn)豐富的副主任醫(yī)師職稱以上病理科醫(yī)師重新閱片確認(rèn)。63例標(biāo)本中，14例口腔白斑，38例口腔鱗癌，11例口腔正常黏膜。

1.2 試劑鼠抗人Smac單克隆抗體(美國(guó)Santa Cruz公司)；Livin兔抗人多克隆抗體(美國(guó)Santa Cruz公司)；S-P免疫組化染色試劑盒、山羊抗鼠抗體和山羊抗兔抗體二抗、DAB試劑盒均購(gòu)自北京中山生物技術(shù)有限公司。

1.3 免疫組化S-P法檢測(cè)Livin和Smac蛋白表達(dá)采用免疫組化S-P法檢測(cè)不同口腔黏膜組織中Livin和Smac蛋白的表達(dá)，以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，Smac蛋白染色以已知陽(yáng)性乳腺癌標(biāo)本為陽(yáng)性對(duì)照，Livin蛋白染色以已知陽(yáng)性食管癌標(biāo)本為陽(yáng)性對(duì)照。

1.4 結(jié)果判定Livin蛋白陽(yáng)性細(xì)胞判定：細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃或棕褐色顆粒；Smac蛋白陽(yáng)性細(xì)胞判定：細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒。用半定量積分法，根據(jù)染色程度評(píng)分：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。再按陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比評(píng)分：<4%為0分，4%～24%為1分，25%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。兩者相乘即為總積分，<1分為陰性(-)，1～2分弱陽(yáng)性(+),3～4分陽(yáng)性(++),5～6分強(qiáng)陽(yáng)性(+++)，以弱陽(yáng)性+陽(yáng)性+強(qiáng)陽(yáng)性計(jì)算陽(yáng)性表達(dá)率。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)數(shù)資料用百分?jǐn)?shù)表示,比較用χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 Livin和Smac蛋白在不同口腔黏膜組織中的表達(dá)Livin蛋白在口腔正常黏膜、口腔白斑和口腔鱗癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為9.09%、35.71%和86.84%(χ2=29.187，P<0.001)；Smac蛋白在口腔正常黏膜、口腔白斑和口腔鱗癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為100.00%、78.57%和42.11%(χ2=18.359，P<0.001)。見圖1、2，表1、2。

圖2 Smac在正常口腔黏膜(A)、口腔白斑(B)、口腔鱗癌(C)組織中的表達(dá)(S-P，×400)

表1 Livin蛋白在不同口腔黏膜組織中的表達(dá)

注：3種口腔黏膜組織中Livin蛋白表達(dá)比較，χ2=29.187，P<0.001；正常口腔黏膜與口腔白斑比較，P=0.062；口腔白斑與口腔鱗癌比較，P=0.014；正常口腔黏膜與口腔鱗癌比較，P<0.001

表2 Smac蛋白在不同口腔黏膜組織中的表達(dá)

注：3種口腔黏膜組織中Livin蛋白表達(dá)比較，χ2=18.359，P<0.001；正常口腔黏膜與口腔白斑比較，P=0.079；口腔白斑與口腔鱗癌比較，P<0.001；正常口腔黏膜與口腔鱗癌比較，P<0.001

2.2 口腔鱗癌組織中Livin蛋白與Smac蛋白表達(dá)的關(guān)系口腔鱗癌組織中Livin蛋白表達(dá)與Smac蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(rs=-0.456，P=0.004)。見表3。

表3 口腔鱗癌組織中Livin蛋白與Smac蛋白表達(dá)的關(guān)系

注：rs=-0.456，P=0.004

3 討論

Livin蛋白屬于凋亡抑制蛋白的一種，在細(xì)胞凋亡的過程中發(fā)揮重要作用。研究[3]證實(shí)，Livin蛋白在胃癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁正常組織。Smac蛋白在胃癌組織中表達(dá)量較癌旁正常組織明顯降低[4]。在非小細(xì)胞肺癌的研究[5]中，也發(fā)現(xiàn)腫瘤組織中Smac蛋白表達(dá)量較癌旁正常組織明顯降低。在乳腺癌的研究[6]中，也檢測(cè)到腫瘤組織中Smac蛋白表達(dá)量較癌旁正常組織明顯降低。

關(guān)于口腔鱗癌的研究[7]中，檢測(cè)到高表達(dá)的Livin基因能促進(jìn)口腔鱗癌細(xì)胞TCA8113的增殖，Livin基因的高表達(dá)和沉默能有效調(diào)控口腔鱗癌細(xì)胞TCA8113的凋亡和增殖。本研究結(jié)果也顯示，Livin蛋白在口腔正常黏膜、口腔白斑和口腔鱗癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為9.09%、35.71%和86.84%(χ2=29.187，P<0.001)，口腔正常黏膜、口腔白斑、口腔鱗癌組織中的Livin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率依次升高，且口腔鱗癌組織中Livin蛋白的表達(dá)明顯高于正常口腔黏膜、口腔白斑。

Smac蛋白是存在于線粒體且具有調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡作用的蛋白質(zhì)，其促凋亡作用機(jī)制可能與逆轉(zhuǎn)凋亡抑制蛋白，特別是X連鎖凋亡抑制蛋白有關(guān)。王志紅等[8]的研究證實(shí)，Smac蛋白在卵巢子宮內(nèi)膜異位癥的惡變過程中發(fā)揮重要作用。大量研究[9-11]證實(shí)，Smac蛋白在胃腸道腫瘤、生殖系統(tǒng)腫瘤、泌尿系統(tǒng)腫瘤等組織中存在異常表達(dá)。Smac蛋白在口腔正常黏膜、口腔白斑和口腔鱗癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為100.00%、78.57%和42.11%(χ2=18.359，P<0.001)，口腔正常黏膜、口腔白斑、口腔鱗癌組織中的Livin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率依次降低，且口腔鱗癌組織中Livin蛋白的表達(dá)明顯低于正常口腔黏膜、口腔白斑。

研究[12]證實(shí)，在結(jié)直腸癌組織中Smac蛋白表達(dá)與Livin蛋白表達(dá)具有密切關(guān)系。本研究通過對(duì)口腔鱗癌組織中Smac蛋白與Livin蛋白關(guān)系分析也發(fā)現(xiàn)，口腔鱗癌組織中Smac蛋白表達(dá)與Livin蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(rs=-0.456，P=0.004)。這提示兩者在口腔正常黏膜到口腔白斑再到口腔鱗癌的轉(zhuǎn)化過程中相互具有負(fù)性調(diào)節(jié)作用。

綜上所述，Smac的低表達(dá)和Livin的高表達(dá)與口腔白斑癌變的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切，兩者聯(lián)合檢測(cè)有助于早期評(píng)估口腔白斑癌變風(fēng)險(xiǎn)。