精準檢測，科學防控

唐彩琰 何閃

編者按：2019年6月3日，在第一屆獸醫檢測診斷大會召開期間，《國外畜牧學—豬與禽》編輯非常榮幸采訪到北京愛德士元亨生物科技有限公司（以下簡稱“愛德士”）中國區實驗室技術服務總監徐靈龍先生（以下簡稱“徐先生”）和愛德士豬產品線現場技術服務總監李昭春先生（以下簡稱“李先生”）（圖1）。

問：愛德士的聚合酶鏈式反應（Polymerase Chain Reaction，PCR）產品有哪些優勢及獨到之處？

徐先生：美國愛德士生物科技公司（以下稱愛德士）成立于1984年。大家對愛德士品牌的認知始于酶聯免疫法（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）系列產品，其實我們早在1993年就有了PCR診斷產品面世，并于2007年研發了熒光定量PCR系列產品。愛德士產品無論在研發設計還是在產品質控方面始終如一地執行行業最高標準和最嚴格的質控體系。我們除了給客戶提供性能優異的PCR產品之外，同時也提供PCR實驗室問題解決方案，幫助客戶建立實驗室質控體系。首先，愛德士現有的熒光定量PCR體系擁有獨特的內參系統，可以監控取樣環節、樣本運輸/保存、樣本前處理及核酸提取、PCR體系配置、儀器及程序設定等各個環節;若任何一個環節出現問題導致假陰性的結果（尤其是針對非洲豬瘟的檢測，對豬場來說往往是致命的），愛德士的內參系統均能指示出來。其次，我們引入兩個特殊試劑：陽性對照追蹤檢測混合液和細菌DNA檢測混合液，讓PCR實驗室全方面的污染監測成為現實，避免環境污染帶來的樣品假陽性結果;另外，愛德士PCR產品實現了通用試劑及通用擴增程序，簡化了實驗室的操作，減輕了試劑污染壓力，并實現了實驗室的高通量檢測。

問：目前市場上檢測非洲豬瘟病毒的熒光定量PCR產品品牌眾多，愛德士的非洲豬瘟（African Swine Fever，ASF）熒光定量PCR產品性能如何？

徐先生：關于熒光定量PCR產品的性能評估指標通常來說包括產品的分析敏感性和特異性、診斷敏感性和特異性、重復性及穩定性等幾大方面。我們的非洲豬瘟PCR產品在這些方面均進行了相關測試及驗證，其中包括兼容性（覆蓋目前已知的24個基因型）、最低檢出限（單拷貝，1～10拷貝/反應）、PCR擴增效率（效率100.7%;相關系數0.999 6;斜率-3.306 4）、混樣檢測能力（最多可達20份）、分析特異性（與其他豬病病原體如豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬瘟病毒、偽狂犬病病毒、豬流行性腹瀉病毒、豬圓環病毒和豬細小病毒等無任何交叉）診斷特異性（100%，n=227）;另外，該產品的重復性、穩定性和容忍度等都非常優異。同時愛德士非洲豬瘟PCR產品成功通過了非洲豬瘟歐盟參考實驗室（西班牙馬德里動物衛生中心）的驗證，驗證報告提到愛德士的非洲豬瘟產品能夠得到可信的檢測結果（性能表現優于參考方法國際獸醫局[（Office International Des Epizooties，OIE）和通用探針庫（Universal Probe Library，UPL）-PCR]。另外在中國非洲豬瘟防控中，愛德士的產品經歷了實踐的檢驗，獲得了眾多客戶的認可與信賴。

問：對于PCR實驗室的污染問題，愛德士有哪些好的建議？

徐先生：因為PCR方法尤其是熒光定量PCR的高敏感性，目前PCR實驗室污染非常普遍。要想避免PCR污染，我們需要對PCR實驗室的分區、人流、物流控制及操作過程等方面制定標準化流程;同時，我們要注意實驗室環境的定期污染監測，查找實驗室漏洞，避免環境污染累計效應給實驗室帶來的災難性后果。如果實驗室已經出現了污染，我們要及時排查污染源，進行有效的污染清除，避免干擾檢測結果，導致結果的不準確。

問：在非洲豬瘟防控體系中，愛德士可以提供哪些服務？

徐先生：在實驗室層面，前期我們可以幫助客戶設計與規劃實驗室，制定儀器耗材選用標準，建立實驗室質量管理與控制標準;協助建立標準操作流程（Standard Operating Procedure，SOP）并在實驗室人員標準化操作、培訓、考核等方面提供技術支持。在現場層面，我們可以根據豬場情況，有針對性地提供因地制宜的解決方案：如建立非洲豬瘟陰性豬場監測體系，為正在發生問題的豬場提供精準清除方案以及具體的復養方案等等。

問：面對非洲豬瘟的傳播風險，在飼料環節如何進行整體評估？

李先生：飼料廠執行類似于豬場的非洲豬瘟生物安全策略有利于飼料的安全。具體來說，一是精簡飼料配方，停用豬源性原料，可以通過膨化、預烘干和高溫制粒等手段降低風險，同時對大宗原料的來源加以控制，減少使用高風險飼料。二是對原料和成品料定期評估，采樣過程中要注意樣本的交叉污染，同時為了監控整個實驗過程，建議在檢測飼料樣本過程中增加內部陽性對照（Internal Positive Control，IPC）。三是監控成品料在包裝、運輸環節的污染問題。

問：豬場如何做到最早發現ASF感染風險？

李先生：首先，我們建議豬場建立實時監控體系：側重監控豬場內外部環境、監控高風險區域并及時排查可疑病例，以便在病毒進入豬場的第一時間就能夠發現;其次，根據病毒的傳播特性，一般經口鼻感染的豬感染病毒出現在口鼻處的時間早于血液2 d～3 d，我們可以通過愛德士的非洲豬瘟熒光定量PCR方法最早發現感染，為豬場及時處置爭取最寶貴的時間。

問：在精準清除的過程中如何做到“精準”？

李先生：首先需要正確采樣：選擇合適的樣本，保證樣本確實有效;如果采樣過程中操作不正確（如鼻腔拭子采樣出現漏采或交叉污染），就會失去最早發現感染和最早進行科學處置的時機。其次需要足夠的樣本數量：發病豬群所用的棟舍及相鄰棟舍建議全部采樣，其余豬群大比例采樣篩查，及早確認發病范圍和數量。再次是科學的混樣：由于檢測目的不一樣，我們會選取不同的樣本來進行檢測，但ASF病毒在不同的樣本中出現的時間和病毒載量差異性很大，這時需要根據所選試劑盒的敏感度和樣本所含病毒拷貝數決定最佳的混樣比例。

問：陰性豬場如何建立非洲豬瘟的風險監測體系？

李先生：在沒有疫苗免疫前，我們需要提升針對非洲豬瘟的生物安全措施。同時，我們要建立一套行之有效的監控體系。豬場應該按照自身布局特點對整個區域進行劃分，不同區域、不同風險等級應有不同的監測重點。豬場可以參照生產區、配套區、流通環節及外部環境建立監控體系，針對不同的環節，對人、車和物等加以控制及檢測。并且，豬場應通過前期病原監測、信息搜集和場地條件等評估豬群的暴露風險等級，再基于暴露風險等級，制定不同的生物安全及管理策略，備齊物資，設定有目標、可執行的預案，并通過員工培訓、設施改進和流程優化等方式，嚴格執行預設方案，設立合理的執行情況檢查制度，根據現場執行情況、周邊疫情發展情況和病原監測結果等匯總反饋，動態了解自身現狀，不斷提升自己，實現安全保障。□□

編后按：北京愛德士元亨生物科技有限公司成立15年以來，始終為客戶提供最優質的產品、最專業的技術支持及最完善的售后服務。愛德士在動物健康領域、水質檢測和牛奶檢測等方面是全球翹楚（圖2）。