宮頸人乳頭瘤病毒E6E7mRNA檢測在宮頸癌篩查中的臨床意義

姜威 尹洪濤 孟祥青 王富濤 王秀萍 王珺 白玉珍 李佳 蔣艷麗 婁全博 張美佳

作者單位：154211 黑龍江鶴崗，黑龍江省農墾寶泉嶺管理局中心醫院

研究表明，宮頸癌與高危型人乳頭瘤病毒（HPV）感染關系密切，但并不是所有感染HPV的患者都會患癌，80%的婦女一生中感染過HPV，但是其中80%～90%婦女為一過性，經過幾個月或者幾年轉陰，只有10%～20%的患者會繼續發展。對于幾年轉陰的患者，期間需要經過不斷地篩查，承擔更大的心理壓力，甚至進行過度治療。因此，區別一過性感染和持續性感染尤為重要。HPV持續性感染可以通過上調HPV E6E7腫瘤蛋白表達啟動致癌過程[1]，E6E7蛋白陽性提示病毒和宿主細胞整合，為持續性感染，與宮頸病變進展密切相關[2]。在宮頸上皮內瘤變的CINⅡ及以上病變，HPVDNA檢測靈敏度高，遠高于膜式液基細胞學（TCT），但對于預測CINⅡ及以上病變特異度卻很低。因此，臨床工作中更需要特異度高、靈敏度也高的一種篩查方法與膜式液基細胞學相結合。HPV E6E7mRNA檢測近幾年在臨床逐漸引起關注，本研究對我院2017年3月～2019年3月156例宮頸癌篩查患者膜式液基細胞學檢測及HPV E6E7mRNA檢測結果與宮頸活檢相對比，分析HPV E6E7mRNA檢測在宮頸癌及癌前病變篩查中的臨床價值。

1 材料與方法

1.1 一般資料選取2017年3月～2019年3月我院婦產科門診及住院患者956例，臨床表現為宮頸炎癥、不明原因陰道出血、白帶增多等，年齡21～71歲。均自愿進行宮頸癌雙篩，即宮頸液基細胞學和HPV E6E7mRNA檢測。以病理診斷為金標準，對TCT和HPV E6E7mRNA檢測結果進行分析。

1.2 方法①TCT檢測：采用天津百利鑫沉降式液基細胞學檢測系統，由高級病理醫師負責診斷，參照Bethesda系統出具診斷報告。②HPVE6E7 mRNA檢測，采用河南Kodia生物技術公司生產的E6E7診斷試劑盒，針對14種高危型別HPV（分別為HPV16、18、31、33、35、39、56、52、58、45、51、59、66、68）[1]，采用支鏈DNA檢測技術，將標本中的細胞裂解后，雜交捕獲待測物，通過三部信號放大，再經過冷光儀檢測，檢測結果為光子數，轉換成拷貝數，拷貝數≥1copy/ml為陽性。③病理學檢查：針對TCT結果ASC-US及以上病變和HPV E6E7mRNA陽性患者進行醋酸試驗下陰道鏡宮頸活檢。病理學結果由兩位高級病理醫師診斷。標準參照世界衛生組織分類標準執行。

1.3 統計學方法采用SPSS 20.0統計學軟件對研究數據進行統計學分析，計數資料用例或率表示，采用卡方檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HPV E6E7mRNA與細胞學檢測結果比較TCT檢查結果ASC-US及以上病變者共108例，HPV E6E7mRNA檢測結果陽性者共100例，TCT與HPV E6E7mRNA檢測結果均異常者52例，將患者TCT檢測結果與HPV E6E7mRNA檢測結果進行對比，結果顯示隨著細胞學檢查結果級別升高，HPV E6E7mRNA檢測陽性率增加，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 TCT檢查結果與HPV E6E7mRNA檢測結果比較

2.2 HPV E6E7mRNA與病理學檢測結果比較共156例患者進行宮頸活檢，將患者HPV E6E7mRNA檢測結果與病理學檢測結果進行對比，結果顯示隨著病理病變級別的升高，HPV E6E7mRNA檢測陽性率增加，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 病理學檢測結果與HPV E6E7mRNA檢測結果比較

2.3 TCT、HPV E6E7mRNA及病理學檢測結果比較以病理診斷為金標準，TCT對宮頸CINⅡ及以上級別病變診斷靈敏度為84.04%，特異度為53.23%，陽性預測值為73.15%，陰性預測值為68.75%；HPV E6E7mRNA檢測對宮頸CINⅡ及以上級別病變診斷靈敏度為82.98%，特異度為64.52%，陽性預測值為78.00%，陰性預測值為71.42%。HPV E6E7mRNA檢測特異度和陽性預測值高于TCT，差異有統計學意義（P＜0.05），兩者靈敏度和陰性預測值比較，差異無統計學意義（P＞0.05），見表3。

表3 TCT、HPV E6E7mRNA及病理學檢測結果比較（n）

3 討論

宮頸癌篩查在國內開展了幾十年，從宮頸刮片到膜式液基細胞學再到國家篩查指南推薦的膜式液基細胞學+HPV病毒基因檢測篩查宮頸癌及癌前病變，相關檢測技術水平不斷提高；然而，HPVDNA檢測的靈敏度過高，特異度較低，對于僅HPV DNA陽性的婦女心理上容易造成恐慌，甚至帶來過度治療。隨著循證科學的發展，證實HPV確實與宮頸癌密切相關，但不是所有感染HPV的婦女都會進展為宮頸癌。研究表明，80%的婦女一生中都可能會感染HPV，但是感染的人群中有80%～90%婦女為一過性[3]，會在幾個月～2年內通過機體免疫力自然清除，隨著年齡增長，機體免疫力不斷下降，可能會延長至3～5年。感染HPV，無論是否引起宮頸上皮的變化，都有一定的轉歸率，有報道表明宮頸CIN I病變人群中47%～62%可以轉歸為正常，22%～37%維持原狀，只有少部分（15%～16%）才會進一步發展，CINⅡ病變人群也有43%～54%可能轉為正常，16%～35%可維持原狀，只有30%會進一步發展，甚至CINⅢ也有少數患者轉為正常[4]。HPV E6E7mRNA檢測作為一種新的檢測方式，能夠簡便并準確地識別宮頸進展性病變，既有較高的靈敏度，又有較高的特異度[5]，既可以應用于普查，又可以應用于HPV感染患者是否進展的分流，從而更有效地進行宮頸病變的篩查指導。

從基因感染機制上看，高危型別HPV感染后，使得基底層鱗狀上皮細胞進行了克隆性增生并致癌的主要基因為E6、E7、E2；E6、E7受到E2的調控而進行轉化，當HPVDNA與宿主細胞染色體整合后，使得E2區域被破壞，使得E6、E7基因過度表達，E6抑制p53基因阻斷凋亡、E7抑制RB基因使得細胞失控[1]，從而導致儲備細胞單克隆增殖并最終發展成癌變。所以，E6、E7的持續表達是宮頸浸潤癌發展的重要因素，它們代表著HPV與宿主細胞整合，并處于活化狀態。有研究證實HPV E6E7基因是高危HPV致癌基因活躍狀態的指標，是宮頸病變開始和進展的顯著標志，與宮頸病變的相關性更強[4]。也有相關報道研究發現，HPV E6E7mRNA隨著宮頸病變級別的升高呈增加趨勢[6]。方法學上HPV E6E7檢測采用支鏈DNA信號放大技術，放大捕獲目標DNA/RNA信號，無需提純、反轉錄及PCR擴增，只需要將樣本用特定的裂解液裂解，探針雜交與信號放大；規避傳統PCR技術中可能造成的干擾和污染的問題，重復性、穩定性較好[1]。因此更適合進行大規模篩查，TCT為ASC-US的患者，若HPV E6E7mRNA為陰性，則不需要陰道鏡檢查，可定期隨訪，而TCT為LSIL人群中，如果HPV E6E7mRNA為陰性也可以選擇隨訪觀察[7]。

本研究結果顯示，與細胞學檢測結果和病理學檢測結果對比，隨著宮頸病變級別的升高，HPV E6E7mRNA陽性率顯著增加，且HPV E6E7mRNA對宮頸CINⅡ及以上級別病變診斷特異度和陽性預測值高于TCT，提示HPV E6E7mRNA檢測有助于對宮頸病變進行分級診斷，對于HPV E6E7mRNA陽性患者應在隨訪中密切關注，及早采取相應處理措施。本研究中，在正常和炎癥人群中，發現HPV E6E7mRNA陽性的患者，經過重新審閱TCT，有5例可見少許不明顯的非典型細胞，經過活檢證實4例為CINⅠ病變，1例為CINⅡ病變。另有12例HPV E6E7mRNA陽性、TCT陰性患者，在后續隨訪中，TCT檢查出現了不同程度異常，在宮頸活檢中出現了CINⅠ病變。提示該檢測方式可以彌補TCT單篩的漏診，且有助于病變進展預測，與文獻報道一致[8]。有6例TCT為LSIL（僅見挖空細胞）、HPVE6E7陰性患者，在后續隨訪中TCT轉歸正常，其中2例活檢證實CINⅠ病變，HPV E6E7始終陰性，TCT及活檢提示無進展。另有3例HPV E6E7陽性，活檢CINⅠ病變，進展為高級別病變，HPV E6E7mRNA檢測結果可為判斷病變是否進展提供依據，從而幫助對CINⅠ病變的人群進行區別治療。

綜上所述，HPV E6E7mRNA檢測可作為宮頸癌及癌前病變風險評估的重要輔助方法，有助于使宮頸癌篩查從篩檢出HPV感染人群向篩查宮頸持續性病變風險轉變，增強宮頸癌及癌前病變的篩查效率并更好地預測宮頸病變結局，有望聯合TCT作為大規模普查方法。