一種測定21種蔬菜中甲基異柳磷含量的方法

楊 熙，曾 莉，朱大林，林澤鵬

(中國廣州分析測試中心 廣東省化學危害應急檢測技術重點實驗室，廣東 廣州 510070)

甲基異柳磷(isofenphos-methyl)，化學名稱：N-異丙基-O-甲基-O-[(2-異丙氧基羰基)苯基]硫代磷酰胺酯[1]。甲基異柳磷是一種土壤殺蟲劑，對害蟲具有較強的觸殺和胃毒作用，其殺蟲廣譜、殘效期長，是防治地下害蟲的優良藥劑[2]。該殺蟲劑殺蟲廣譜，殘效期長，是防治地下害蟲的優良藥劑，主要用于小麥、花生、大豆、玉米、地瓜、甜菜、蘋果等作物防治蠐螬、螻蛄、金針蟲等地下害蟲，也可用于防治粘蟲、蚜蟲、煙青蟲、桃小食心蟲、紅蜘蛛等[3]。目前，甲基異柳磷已被列入蔬菜生產上的禁用農藥之一，且將其列為蔬菜農藥殘留量定量監測的農藥品種之一，因而甲基異柳磷農藥檢測數據的準確性顯得尤為重要[4]。為了更有效、更科學地使用甲基異柳磷殺蟲劑,需要對其在農作物中的殘留量進行監測[5]。在GB 2763-2016 食品安全國家標準食品中農藥最大殘留限量[6]中規定甲基異柳磷在大部分蔬菜中使用的殘留限量臨時限值都是不得超過0.01 mg/kg，所以對于大部分蔬菜中甲基異柳磷的微含量檢測需要有合適的方法來測定，而本文所建立的方法是既高效有節約成本的分析方法。

目前，能夠測定甲基異柳磷的方法很多，比如現行國家標準GB/T 5009.144-2003[7]、以及很多人提出適用于甲基異柳磷檢測的農業標準NYT 761-2008 蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農藥多殘留的測定[8]的氣相色譜法，兩種標準方法處理步驟繁瑣且耗用試劑高，不利于環保，且NYT 761-2008所用提取溶劑乙腈沸點較高，濃縮時間長。另外，光譜快速檢測法[9-10]，氣質聯用法[11-12]等多種方法對于檢出限相對偏高，對于樣品中甲基異柳磷微含量檢測有可能大部分檢測不出，而造成結果是未檢出，達不到GB 2763-2016蔬菜限量值要求。為此建立了本方法較為實用，能夠準確定性定量，適用于大批量檢測，分析速度快、節約資本的同時有利于環保適用于本文21種蔬菜的檢測。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

Agilent7890B氣相色譜儀(GC FPD檢測器)；XW-80A微型震蕩儀；TDZ5-WS離心機：湖南塞特湘儀科技有限公司；N-EVAP氮吹儀：美國Organomation；50 mL塑料離心試管：美國Labcon Perform RTM；5 mL比色管，100 mL燒杯：天波玻璃儀器有限公司；Sartorius電子天平。

甲基異柳磷：100 μg/mL，農業部環境保護科研監測所；乙酸乙酯、無水硫酸鈉：廣州化學試劑廠。

標準溶液的配制：把甲基異柳磷標準溶液用乙酸乙酯配制成1.00 μg/mL的儲備液。

1.2 實驗步驟

將樣品打碎磨成漿狀之后稱取10 g(精確至0.000 1 g)置于50 mL塑料離心試管中，加入乙酸乙酯25 mL、在微型漩渦混合儀震蕩2 min，放于離心機3000 r/min離心5 min，取出有機相到100 mL燒杯，再用乙酸乙酯提取2次，合并有機相溶液，用30～40 g無水硫酸鈉進行除水，最后將有機相溶液在氮吹儀上(水溫40～45℃)濃縮至低于5 mL，乙酸乙酯定容至10 mL，供氣相色譜FPD分析。

1.3 分析條件

色譜柱：DB1701(30 m×320 μm×0.25 μm)；柱溫130℃(保持1 min)，以15℃(1 min)升至240℃保持3 min。進樣口220℃；分流比5∶1，進樣量1 μL；FPD檢測器270℃；氮氣作載氣，流量2 mL/min；尾吹流量60 mL/min；氫氣流量60 mL/min；空氣流量100 mL/min。

2 結果與探討

2.1 選擇溶劑

能夠提取有機磷一類農藥的的有機溶劑有多種，但是能夠用于甲基異柳磷的提取溶劑我們經過多次實驗對以下幾種進行選用。幾種分別是二氯甲烷、丙酮、乙腈、乙酸乙酯等，首先是二氯甲烷沸點較低，揮發快，回收率較低，丙酮不能夠和水相很好的分成，導致提取不完全，乙腈是比較合適的提取溶劑，回收率也可達到要求，但是由于沸點較高，在濃縮時耗時較長，這三種溶劑綜合考慮之后，不宜選用。最終，選用乙酸乙酯作為本方法的提取溶劑，回收率在幾種選用溶劑中最高，最為理想。

在采用1.3的分析條件下，所用的毛細管柱DB1701和FPD檢測器檢測后，可從圖1中清晰地看到甲基異柳磷峰型良好且無拖尾，無干擾，達到理想的分離效果，且分析時間短，目標峰在9 min之內即完全出峰。在本方法的分析條件下同時也贊成使用HP-5MS色譜柱做檢測分析，效果上和DB1701分離效果并無差距，不管是研究或是檢測兩種色譜柱都適用。選用色譜柱和采用本方法的色譜條件節省大量分析時間和成本，證明此色譜條件及色譜柱適用性不只是對于甲基異柳磷的檢測分析也適用其他有機磷項目的檢測。甲基異柳磷色譜峰見圖1中2的對照品。

2為甲基異柳磷、3為空白、1為陽性樣品

2.2 測定結果

2.2.1 本方法21種蔬菜樣品的測定結果，詳見表1。

表1 21種蔬菜的測定結果

表1(續)

2.2.2 線性關系、回歸方程及檢出限

將配制好濃度為1.00μg/mL的標準儲備液稀釋成濃度為0.020，0.040，0.080，0.120，0.20 μg/mL的線性濃度標準溶液，進行分析。以峰面積(Y)對質量濃度(X)進行回歸分析計算，得到相應的回歸方程。以3倍信噪比和基線噪聲為2.0 pA·s計算出本方法的檢出限，詳見表2。

表2 甲基異柳磷的線性關系、相關系數及檢出限

由表2數據可以看出，本方法的檢出限為0.0029 mg/kg明顯要低于GB/T 5009.144-2003國標中的檢出限0.004 mg/kg，更加體現出本方法的適用性，對于蔬菜中甲基異柳磷微含量的檢測是完全適用的。

2.2.3 回收率及精密度

取青椒陰性樣品10 g進行加標回收實驗，以線性濃度范圍的高、中、低濃度為加標點0.020，0.080和0.20 μg/mL為加標濃度加標量為1 mL(即絕對含量為0.020，0.080和0.20 μg)，按照本方法的實驗步驟操作，每個加標濃度平行加標3次，計算出3個濃度各3次加標的平均回收率和各自相對標準偏差(RSD)；試驗結果詳見表3。

表3 加標量、測定結果、回收率及RSD(n=3)

3 結論

本方法通過優化前處理，改變色譜條件，建立了一種對21種蔬菜中甲基異柳磷含量測定的氣相色譜法。由多次實驗得出的結論是：該方法分析速度快，效率高、節約成本且能夠準確定量，滿足大批量蔬菜中甲基異柳磷殘留檢測分析。