宮腔粘連患者COX-2、VEGF及MVD表達水平研究

陳 超 劉志勤 夏偉蘭 陸 洋 孫 靜 陳芳芳 彭珊珊

1.深圳市寶安區婦幼保健院婦科，廣東深圳 518100；2.深圳市龍華區人民醫院婦科，廣東深圳 518100；3.深圳市寶安區婦幼保健院病理科，廣東深圳 518100

研究顯示，宮腔粘連主要是指宮頸管、子宮峽部、子宮腔由于感染、放射線、宮腔手術操作等因素從而導致人體子宮腔閉塞或者狹窄，以閉經、復發性流產、經量減少、不孕作為主要表現，而導致宮腔粘連高危因素主要包括死胎清宮術、人工流產術、子宮黏膜下肌瘤電切術以及子宮內膜去除術等，而近年來有研究顯示宮腔黏連與COX-2、VEGF、MVD 表達水平密切相關[1]。因此我院對宮腔粘連患者COX-2、VEGF 及MVD 表達水平進行分析，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選 擇2015 年1 月～2017 年1 月宮腔粘連患者，觀察組80 例，再選取同期女性健康體檢者80 例作為對照組。觀察組80 例，年齡20 ～45 歲，平均（32.0±1.2）歲，病程1 ～12 個月，平均（6.01±0.15）個月。對照組80 例，年齡21 ～45 歲，平均（32.2±1.3）歲。觀察組宮腔粘連患者與對照組女性健康體檢者比較，差異無統計學意義（P ＞0.05），具有可比性。

納入標準：（1）以不明原因不孕、月經減少作為主訴；（2）患者進行宮腔鏡檢查結果確診為宮腔粘連。排除標準：（1）在3 個月內采用促性腺激素；（2）伴有繼發惡性病變或者子宮內膜原發病變[2]。

1.2 方法

1.2.1 實驗試劑 二抗-HRP 多聚體、兔抗人VEGF 單克隆抗體濃縮液、鼠抗人CD34 單克隆抗體濃縮劑、SP 試劑盒、濃縮型DAB 顯色試劑盒、EDTA 抗原修復液。

1.2.2 COX-2、VEGF 及MVD 染色方式 按照SP 染色試劑盒說明書操作，所有抗體均為即用型抗體，染色時采用EDTA 抗原修復液實施微波修復抗原，按照試劑盒說明書進行操作，對人體COX-2、VEGF及MVD 水平進行測定，并詳細記錄。

MVD 計數：在光鏡下，CD34 染色陽性細胞呈現棕黃色，在低倍視野下對整個組織切片進行掃視，取患者微血管數量密集、內皮細胞染色清晰視野，取高倍視野6 個，對微血管數量進行計算，計算平均值為MVD。任何呈現棕黃色陽性內皮細胞，只要和鄰近血管、腫瘤細胞分界清楚、則可作為微血管數1 個。

1.3 觀察指標

對比觀察組宮腔粘連患者、對照組女性健康體檢者的COX-2 陽性率、VEGF、MVD 表達水平、MVD 陽性率、VEGF 陽性率。分析VEGF 在宮頸粘連程度中的表達。

1.4 統計學處理

2 結果

2.1 兩組COX-2陽性率、VEGF、MVD表達水平比較

觀察組宮腔粘連患者COX-2 陽性率、VEGF、MVD 表達水平與對照組，差異有統計學意義（P ＜0.05）。見表1。

表1 兩組COX-2陽性率、VEGF、MVD表達水平比較

2.2 兩組MVD陽性率、VEGF陽性率比較

觀察組宮腔粘連患者MVD 陽性率、VEGF 陽性率高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組MVD陽性率、VEGF陽性率比較[n（%）]

2.3 VEGF在宮頸粘連程度中的表達比較

VEGF 在宮頸粘連不同程度中的陽性率比較，差異有統計學意義（P ＜0.05），見表3。

表3 VEGF在宮頸粘連程度中的表達[n（%）]

3 討論

宮腔粘連發生和感染、宮腔手術操作以及放射線密切相關，以胎盤剝離不全、閉經、復發率流產、不孕、經量減少作為主要臨床表現，而導致宮腔粘連高危因素主要包括子宮內膜去除術、感染性流產后清宮術、死胎清宮術、人工流產術等。目前研究顯示，人體宮腔粘連部位子宮內膜血管生長情況、子宮內膜微血管密度、血管內皮生長因子表達之間具有相關性。而宮腔粘連患者粘連部位VEGF 表達顯著高于正常部位，對粘連部位產生一定影響[3]。

在臨床試驗中發現，雌激素治療前和手術切開前粘連部位相比正常組織部位的VEGF 表達較強，本次研究應用免疫組化方式的抗原修復時間、一抗濃度、DAB 顯色時間等，上述因素均可對染色強度造成影響。將表達陽性細胞的百分率納入雙盲讀片和計分中，能夠使染色強度的分級誤差明顯減少[4]。

研究結果可能與粘連部位的炎癥反應具有密切關聯，雖然在宮腔粘連的形成過程中與發生機制在臨床尚無明確機制，但炎癥反應仍為形成粘連的重要因素，能夠增強其局部血管的滲透性，使其炎性細胞組織盡快滲出，促進纖維蛋白機制的形成。而在纖維蛋白的降解過程中，缺血、炎癥、感染和損傷均可對其產生抑制效果，能夠利于纖維蛋白粘連帶的形成[5]。在炎癥過程中，首先是將多型核中性粒細胞滲出，其能夠表達較多的VEGF，在雌激素主導的增生期，上述炎癥細胞能夠附著于功能層的血管邊緣，會隨著時間的延長而發生消失，能夠為子宮內膜中的血管新生提供較為直接的VEGF 來源。對于存在炎癥反應的粘連細胞，其具有十分多的中性粒細胞，而正是這些中性粒細胞，其能夠增強粘連部位的子宮內膜VEGF 的表達[6]。另外，子宮內膜對VEGF 的刺激也十分敏感，女性的子宮內膜血管內皮細胞在濃度為2%的血清內即可培養成毛細胞血管結構，其原因是是由于人體子宮內膜血管內皮細胞上具有較強表達的尿激酶樣的纖維蛋白溶酶原表達和VEGF-2。將VEGF 加入后，女性子宮內膜的基質金屬蛋白酶以及尿激酶纖維蛋白溶酶原明顯增加，可使用尿激酶的封閉行抗體和MMP 的抑制劑，能夠有效減少毛細血管的形成[7-10]。VEGF 具有較多的生物學功能，比如增加血管通透性、促進有絲分裂、促進血管內皮細胞的增生和遷移、細胞外基質的改變等。具體內容：（1）與通過刺激和激活磷脂酶C，能夠使其第二信使直接促進血管內皮細胞的有絲分裂。（2）對鈣離子內流具有介導作用，能夠使血管內皮細胞胞漿內鈣離子濃度明顯增加，進而對磷酸激酶的形成產生刺激。人體新生血管能夠被多種因子所調控，其中最為常見的因子為VEGF-血管內皮生長因子，其在臨床被認為是特異性最高、作用最強的調控因子，也是血管內皮細胞的特異性有絲分裂原[11-12]。

當逆流經血子宮內膜粘附在人體腹膜層時，需要新生血管建立才能維持人體內膜的發展和生存，因此血管生成十分重要。COX-2 也可以稱作為環氧合酶-2，為炎癥過程重要誘導酶，能參與人體子宮內膜異位癥血管形成，具有密切相關性，而血管內皮生長因子為人體血管生成中所需要的參與因子，具有顯著促血管形成能力，COX-2 高表達被認為與人體宮腔粘連病理過程相關，可通過不同途徑發揮作用[13-14]。COX-2 為膜結構蛋白，為前列腺素合成的重要限速酶，能將花生四烯酸轉代謝成PG產物，COX-2 在人體正常組織中均呈現穩定表達，但是COX-2 在細胞受到刺激時能迅速合成，被認為是瞬時早基因或者快速反應基因。COX-2 表達能由多種因素進行誘導，例如細胞因子、生長因子以及炎性介質等，能參與炎癥過程和發生。在女性多種疾病中，COX-2 表達呈增高趨勢，在本次研究中對人體 COX-2 表達進行檢測，研究顯示，在異常組織中COX-2 陽性表達顯著高于正常組織陽性表達，可能和人體自身免疫反應密切相關。COX-2、VEGF 在宮腔粘連患者中均呈現高表達狀態，同時COX-2 陽性率、MVD 表達水平也與宮腔黏連具有相關性。MVD 為衡量血管生成定量指標，能對宮腔粘連疾病預后進行判斷，其與宮腔粘連預后呈現負相關關系，研究結果顯示，宮頸粘連患者MVD 陽性率高于健康人群，從而提示其能促進宮頸粘連形成，促進宮頸粘連發展，和疾病預后具有密切相關性，能對宮頸粘連進行判定[15-16]。

綜上所述，宮腔粘連患者COX-2、VEGF 及MVD 表達水平具有密切的相關性，COX-2、VEGF均呈現高表達狀態，值得在臨床中推廣及運用。