TRFlA法檢測陽性梅毒螺旋體抗體結果分析

盧元全

（重慶市豐都縣人民醫院檢驗科 重慶 408200）

現階段，最靈敏的微量分析技術是時間分辨熒光分析法（Time resolved fluoroisnmunoassay,TRFIA），該技術的特點包括無放射性污染、標準曲線范圍寬、不會受樣品自然熒光干擾、自動化、操作簡單、多標記以及標記物制備簡單且穩定等[1]，已廣泛運用于蛋白質、多肽、激素、抗體、核酸探針和生物活性細胞的定量分析。梅毒傳播途徑以性接觸為主，近些年來，在我國社會經濟飛速發展和生活水平顯著提高的背景下，梅毒患病人數逐漸增多[2]。在檢測TP-Ab時，如果采用一步法進行檢測，當血清中TP-Ab濃度過高時可能會產生鉤狀效應（HOOK效應）[3]，高濃度標本易誤測為低值標本，甚至出現正常結果。在臨床工作中，鉤狀效應很難被發現，如果出現鉤狀效應，易發生漏診或誤診。本文對患者血清經倍比稀釋用TRFIA檢測，確認其TP-Ab稀釋結果高于原倍血清結果，現報告如下。

1.資料與方法

1.1 標本來源

檢測標本均為2017年梅毒螺旋體抗體陽性患者血清。

1.2 儀器

蘇州新波生物技術有限公司生產的EasyCuta 全自動時間分辨熒光分析儀。

1.3 試劑

蘇州新波生物技術有限公司生產的配套梅毒螺旋體抗體檢測試劑盒(免疫熒光法)。室內質控血清由康徹斯坦提供，以保證結果的正確性。

1.4 方法

用EasyCuta全自動時間分辨免疫熒光儀檢測699例病人的2倍稀釋血清，有顯著差異時，無菌生理鹽水倍比稀釋，利用TRFIA雙抗原夾心法測定，觀察檢測結果是否存在鉤狀效應。操作過程嚴格按照說明書進行。

2.結果

TRFIA法檢測699例病人中有兩例標本為原倍時S/CO值分別為2.925和5.865，經2倍稀釋后的S/CO值分別為19.794和23.786，這兩例標本2倍稀釋后的結果明顯高于原倍血清結果。繼續做倍比稀釋時，在稀釋濃度不斷提高的背景下，S/CO值逐漸提高，在稀釋倍數達到1：16時達到峰值，即68.592和54.201，然后在稀釋濃度高低變化過程中，室內質控結果在控，詳情如表。

表 雙抗原夾心法不同血清稀釋度下的S/CO值（CO值為1）

3.討論

現階段，通過雙抗原夾心時間分辨免疫熒光分析法（TRIFMA）檢測梅毒螺旋抗體檢測試劑盒，其產于蘇州新波生物科技有限公司，本分析方法是一種固相時間分辨免疫熒光分析法,其屬于雙抗原夾心的非競爭性免疫分析。詳細原理如下：血清標本中的生物素標記的TP抗原（Ⅱ）以及抗-TP(包括IgG、IgM等型)與固相 TP抗原（I）發生免疫性反應，有助于固相TP抗原（I）—抗TP—TP（Ⅱ）—生物素復合物的形成，經過溫育洗滌之后，洗去游離的生物素抗原；然后將Eu標記的鏈親和素加入其中，促進固相TP抗原（I）—抗TP—TP（Ⅱ）—生物素—鏈親和素-Eu復合物的形成，溫育洗滌之后，洗去游離的Eu標記的鏈親和素。將熒光增強液加入其中，增強液中可以分離復合物上的Eu，與此同時，與增強液發生反應，最終以熒光絡合物的形成呈現，血清中的抗TP濃度與熒光強度呈正比。

本次，兩份標本中的TP-Ab均以鉤狀效應的形式呈現。血清未稀釋（原倍）時用時間分辨免疫熒光儀檢測結果為2.925和5.865，血清經過不斷稀釋之后，S/CO值顯著提升，與此同時在比值達到1：16時達到最高值，之后，通過增加稀釋倍數，S/CO值逐漸減小。當稀釋到1：256時，其檢測結果分別為6.193和9.147，接近于原倍血清檢測結果。將倍比稀釋結果做平滑曲線的散點圖，發現兩例標本的圖形呈明顯的鐘形，且基本呈正態分布。證明這兩例標本采用TRIFMA檢測梅毒抗體時，一旦提升標本中梅毒抗體濃度，則會發生鉤狀效應。

本次兩份標本的TP-Ab檢測結果經倍比稀釋到1：256時，結果分別為6.193和9.147，結果高于Cutoff值1.000，仍沒有出現正常結果。

綜上所述，目前，解決由鉤狀效應引起的漏檢最可靠方法是經典二步法，進而確保被檢樣本檢測結果的準確性和可靠性，確保輸血的安全性，降低漏檢發生率，避免醫療糾紛。