急性加重慢性阻塞性肺疾病患者外周血中T淋巴細胞亞群變化的意義探討

蒙菁菁 楊杰

(廣西壯族自治區賀州市人民醫院呼吸內科 廣西 賀州 542699)

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一種常見的以持續呼吸道癥狀和氣流受限為特征的慢性呼吸系統疾病。其發病率、致殘率和死亡率高，給社會帶來了嚴重的社會和經濟負擔。據統計，我國2007年COPD患者發病率為8.4%，而王辰院士等人2017年在柳葉刀發表的文章顯示：我國40歲及以上人群，COPD患者的發病率已高達13.7%，目前仍呈明顯上升趨勢。現階段，臨床上治療COPD患者的效果令人不滿意，尚無藥物能改善慢阻肺的自然病程。炎癥機制是COPD疾病最主要的一種發病機制，而免疫功能下降也在疾病進展中發揮著重要作用[1]。有研究指出，細胞免疫參與了COPD的病因、發病機制、恢復及預后整個過程[2-3]。COPD患者隨著病情加重細胞免疫功能進一步下降，持續的T淋巴細胞降低可提示預后不良[4]。本采用流式細胞技術檢測不同時期COPD患者外周血CD3+、CD4+、CD8+細胞的數量，探討COPD患者外周血T淋巴細胞變化的意義，為COPD的免疫預防和治療提供參考。

1.資料與方法

1.1 一般資料

收集2018年1月—10月賀州市人民醫院呼吸內科急性加重慢性阻塞性肺疾病患者106例為對象，其納入標準：均符合中華醫學會呼吸病學會13年修訂版慢性阻塞性肺疾病診治指南[8]。入選患者排除以下情況：自身免疫性疾病、支氣管哮喘、肺間質病、活動性肺結核、支氣管擴張、惡性腫瘤、AIDS、近期使用免疫調節劑或抑制劑者或者不能配合完成支氣管舒張實驗者，合并其它心肝腎等疾病者。106例，患者年齡40～80歲，其中男60例，女46例，平均年齡(64.42±9.42)歲，根據COPD患者肺功能FEVl占預計值百分比的數值結果，把患者分為Ⅰ(27例)、Ⅱ(26例)、Ⅲ(25例)、Ⅳ28例)四組；根據患者血氣分析結果分為呼吸衰竭組(50例)和無呼吸衰竭組(56例)；根據急性加作次數/年分為頻繁急性加重組（56例）和非頻繁急性加作組（50例）；其中每年急性加重次數≥2次者，稱為頻繁急性加重，每年急性加重次數≤1次者稱為非頻繁急性加重，分別測定上述觀察指標的不同組別COPD患者外周血淋巴細胞免疫分型CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+CD4+/CD3+CD8+T淋巴細胞比值。隨機選取同期在本院體檢的健康者作為正常對照組共26例，其中男16例，女10例，年齡40～75歲，平均年齡(63.46±7.54)歲。COPD組和正常對照組在性別、年齡、身高、體重等基本資料比較中差異無統計學意義。P＞0.05。所有入選者均被告知目的，自愿接受檢查并簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 儀器和試劑 儀器和試劑CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC四色試劑（貨號340499，BD公司）用于檢測CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細胞；IX FACS裂解液（貨號349202，BD公司）用于裂解紅細胞。流式細胞儀：型號為BD FACS CantoⅡ，（BD公司）。測試管為絕對計數管(貨號340334，BD公司)。肺功能測定：Quark-PFT3肺功能檢測儀（意大利科時邁），技術標準參考2005年美國學會和歐洲呼吸協會共同制定的肺功能測準口。血氣分析測定采用EDAN i15檢測儀，測試卡為BG10血氣生化測試卡(深圳市里邦精密儀器股份有限公司)。

1.2.2 血液樣本制備 外周血淋巴細胞亞群檢測所有患者及健康體檢者均于入院第二天清晨空腹抽取外周靜脈血2ml。全血標本采用乙二胺四乙酸二鉀抗凝，6小時之內送測定。將試管分為兩組，分別加入CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC四色試劑20ul，然后分別加入全血標本50ul，于振蕩器上混勻，室溫避光孵育15min。加入IX FACS裂解液500ul，充分震蕩，室溫避光放置15min。待紅細胞充分完全裂解后，采用BD FACS CantoⅡ流式細胞儀（美國BD公司）檢測各份血液標本中CD3+、CD4+、CD8+T細胞占淋巴細胞的百分率。

肺功能測定采用Quark-PFT3肺功能檢測儀（意大利科時邁）檢測，檢測所有受試者第1秒用力呼氣容積占預計值百分比（FEV1%prep）、第1秒用力呼氣容積/用力肺活量比（FEV1/FVC）以及最大用力呼氣中段流量占預計值百分比（MMFR%prep），所有患者都檢測三次，取三次檢測結果平均值。所有肺通氣功能檢查由同一名檢測員完成并由同一名專科醫師出具報告。

1.3 統計學方法

2.結果

2.1 入選各組病例的基本情況

COPD組與正常對照組的性別、年齡、身高、體重比較均無顯著性差異（P＞0.05），見表1。

表1 急性加重慢性阻塞性肺疾病組與正常對照組一般資料比較（）

表1 急性加重慢性阻塞性肺疾病組與正常對照組一般資料比較（）

正常對照組 COPD組 P性別(男/女)16/10 60/46 ＞0.05年齡(歲)63.46±7.54 64.42±9.42 ＞0.05身高(cm)160.04±9.03159.29±16.26 ＞0.05體重(kg)50.85±8.79 54.24±9.43 ＞0.05

2.2 急性加重期COPD患者不同肺功能分級外周血淋巴細胞免疫分型結果

與正常對照組比較，肺功能Ⅲ級組和肺功能Ⅳ級組COPD患者外周血CD3+CD4+T淋巴細胞以及CD3+CD4+/CD3+CD8+T淋巴細胞比例均降低，而肺功能Ⅳ級組COPD患者外周血CD3+T淋巴細胞比例也較正常對照組降低。肺功能Ⅳ級組COPD患者外周血CD3+，CD3+CD4+，CD3+CD4+/CD3+CD8+T淋巴細胞比例也較Ⅰ級肺功能COPD組降低，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 不同等級肺功能患者外周血T淋巴細胞亞群結果比較

2.3 急性加重次數不同COPD患者外周血淋巴細胞免疫分型結果。頻繁急性加重期慢性阻塞性肺疾病患者外周血CD3+CD4+T細胞亞群較正常對照組及非頻繁急性加重組均降低，P＜0.05，而頻繁急性加重組CD3+T淋巴細胞亞群與非頻繁急性加重期組比較，明顯下降▲▲P＜0.01，差異有統計學意義。見表3。

表3 急性加重次數不同患者外周血T淋巴細胞亞群結果比較

2.4 不同血氧程度外周血T淋巴細胞亞群

COPD呼吸衰竭組中CD3+T淋巴細胞及CD3+CD4+T淋巴細胞與無呼吸衰竭組及正常對照組比較，均明顯降低(均P＜0.01)。見表4。

表4 不同血氧程度外周血T淋巴細胞亞群結果比較()

表4 不同血氧程度外周血T淋巴細胞亞群結果比較()

與正常對照組比較,★P＜0.05,★★P＜0.01,與無呼吸衰竭組比較▲P＜0.05,▲▲P＜0.01。

呼吸功能分級 n CD3+ CD3+CD4+ CD3+CD8+ CD3+CD4+/CD3+CD8+正常對照組 26 65.16±9.05 41.14±8.32 23.59±6.52 1.88±0.64無呼吸衰竭組 56 63.73±11.83 38.78±10.77 24.81±9.04 1.76±0.78呼吸衰竭組 50 52.43±14.25★★▲▲ 28.90±10.93★★▲▲ 23.07±9.19 1.44±0.71★▲

3.討論

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一種累及氣道、肺實質、肺血管及至全身的慢性炎癥。其主要病理改變為有害氣體或顆粒導致氣道黏膜的慢性炎癥并持續發展。慢阻肺的病因復雜、發病機制尚沒有得到完全闡明。急性加重COPD是指COPD患者短期內出現咳嗽、咳痰、呼吸困難等癥狀加重，或伴發熱等癥狀出現。急性加重致患者需要反復住院，從而大大增加了其醫療費用，并使其死亡風險明顯增加，尤其是頻繁急性加重患者，其肺功能下降速度及未來風險較無急性加重患者明顯增加。即使經積極抗炎和舒張支氣管等常規治療，COPD患者的治療未取得滿意療效。

T淋巴細胞作為體內重要的免疫細胞，主要參與調解機體細胞免疫。在T細胞亞群中，CD3+是T細胞的特征性分子表面標志，主要反應T細胞的總數；CD4+是輔助T細胞(TH)和效應T細胞的表面標志，其通過分泌細胞因子和表達表面分子對調節免疫反應的啟動及強弱起重要作用，該細胞減少，表示機體免疫功能下降，CD8+抗原是細胞毒T細胞（Tc）和抑制T細胞(TS)的表面標志，主要殺傷抗原的功能，有助于消除病原體，但當其細胞數量過度則可引導致機體的損傷即CD4+/CD8+比例下降，提示免疫功能低下，免疫調節處于負調節狀態。目前，相關研究發現慢阻肺患者的T淋巴細胞分化異常顯著，這種分化異常易導致患者免疫功能低下并增加易感性[5]。而慢阻肺患者的反復急性發作又會加重自身免疫功能的紊亂，導致呼吸道防御功能逐漸下降甚至損傷從而增加感染的發生率，如此惡性循環，從而導致肺功能的進行性下降，以及疾病進行性進展加重[6]。

本結果顯示，與正常對照組比較，肺功能Ⅲ級組和肺功能Ⅳ級組COPD患者外周血CD3+CD4+T淋巴細胞以及CD3+CD4+/CD3+CD8+T淋巴細胞比例均降低，而肺功能Ⅳ級組COPD患者外周血CD3+T淋巴細胞比例也較正常對照組降低.肺功能Ⅳ級組COPD患者外周血CD3+，CD3+CD4+，CD3+CD4+/CD3+CD8+T淋巴細胞比例也較Ⅰ級肺功能COPD組降低。當COPD患者反復急性加重及合并呼吸衰竭時，其CD3+和CD4+T淋巴細胞水平均較正常對照組及非頻繁急性加重組和無呼吸衰竭組降低，表明患者肺功能越差，急性加重越頻繁以及呼吸功能越差，其免疫功能則越差，同時也說明患者免疫功能低下增加了慢性阻塞性肺疾病的易感性，且與病情的嚴重程度正相關。正常對照組及各組中外周血CD8+T淋巴細胞淋巴未見明顯異常，而相關研究顯示[7-8]COPD患者氣道內CD8+T淋巴細胞增多，表明CD8+T淋巴細胞向氣道內募集、激活而釋放多種炎性介質進而破壞肺的結構和引起局部炎癥反應[9]。CD8+T淋巴細胞的這種變化可能與CD8+T淋巴細胞重新分布有關。