段白麗
(山西省中條山國有林管理局,山西 侯馬 044400)
黃酮全稱為黃酮類化合物,是植物中分布非常廣泛的一類天然物質,具有抗心腦血管疾病、抗炎、抗免疫、抗微生物、保護消化性潰瘍、抗腫瘤等作用。黃酮作為一種功效成分,越來越受到人們的重視。沙棗(Elaeagnusangustifolia)是胡頹子科胡頹子屬落葉喬木或灌木,在山西省主要分布于黃土丘陵區和晉北風沙區,有研究報道沙棗是一種集生態效益與經濟效益于一體的重要樹種。因此,研究山西沙棗果肉中的總黃酮含量對進一步認識其經濟價值具有重要意義,可為山西沙棗藥用價值的開發提供參考依據。
2017年10月,在山西省黃土丘陵區和晉北風沙區采集不同大小的沙棗果實,取果肉后自然陰干,用粉碎機研碎,于室溫下保存備用。
儀器:721紫外可見分光光度計,上海第三分析儀器廠;BS110S型電子天平,北京賽多利斯儀器系統有限公司;Centrisart D-16C 實驗室離心機,賽多利斯科學儀器(北京)有限公司;SB25-12超聲波清洗器,寧波新芝生物科技股份有限公司。
試劑:蘆丁標品,批號100080-200707,中國藥品生物制品檢定所。其余試劑均為分析純。
1.3.1 標準曲線的制作
準確稱取20 mg蘆丁,用無水乙醇溶解后,定容至100 mL容量瓶中,配制成濃度為0.2 mg/mL的標準溶液。在7個25 mL容量瓶中分別吸取標準溶液0.0 mL,0.5 mL,1.0 mL,2.0 mL,3.0 mL,4.0 mL,5.0 mL,之后在每個容量瓶中依次加入5%的NaNO2溶液0.3 mL,10%的Al(NO3)3溶液0.3 mL,4%的NaOH溶液4.0 mL.每加入1種溶液后要搖勻,并放置6 min,最后用60%的乙醇定容搖勻,放置15 min后,于498 nm波長處測定吸光度。
1.3.2 供試樣品的制備
稱取2.00 g沙棗果肉,按照料液比1∶22加入60%的乙醇溶液,在320 W功率下超聲處理15 min,之后在4 000 r/min下離心10 min,取上清液至25 mL容量瓶中,用蒸餾水定容。取1 mL樣液至25 mL容量瓶中,重復3次,按照標準曲線的制作方法在498 nm波長處測定吸光度,計算總黃酮含量。
用紫外可見分光光度計測定蘆丁標準溶液吸光度值,見表1.

表1 蘆丁標準溶液吸光度
以蘆丁濃度為X軸,對應的吸光度值為Y軸繪制標準曲線,如圖1所示。
對蘆丁濃度和吸光度值數據進行回歸后,得線性方程式為:Y=14.698 0X+0.001 1,R2=0.998 0.
以測定樣品的吸光度值為基礎,根據標準曲線的線性方程計算山西沙棗兩個分布區果肉中的總黃酮含量,如圖2所示。

圖1 蘆丁吸光度標準曲線

圖2 不同分布區沙棗果肉中的總黃酮含量
從圖2可看出,黃土丘陵區沙棗果肉中的總黃酮含量(7.37 mg/g)高于晉北風沙區(6.21 mg/g)。對兩個分布區沙棗果肉中的總黃酮含量運用SPSS 16.0統計軟件中的One-way ANOVA模塊進行方差分析,結果表明,沙棗果肉中總黃酮含量在兩個分布區間差異不顯著(p>0.05)。可見,沙棗分布的立地條件對其果肉中總黃酮含量的影響不明顯。
將不同分布區的沙棗果實分別按照縱徑、橫徑進行聚類分析,結果表明,兩個分布區的沙棗果實均可分為大果、中果、小果3類。運用SPSS 16.0統計軟件中的One-way ANOVA模塊對兩個分布區不同大小沙棗果實果肉中的總黃酮含量進行方差分析,并用Duncan法對其進行多重比較,結果見表2.

表2 不同大小沙棗果實果肉總黃酮含量 mg/g
從表2可以看出,兩個分布區不同大小沙棗果實果肉中總黃酮含量變化規律不一致。黃土丘陵區沙棗果肉中總黃酮含量呈現出隨著果實的增大而增加的趨勢,晉北風沙區沙棗果肉中總黃酮含量則表現為隨著果實的增大而減少的趨勢。黃土丘陵區大果中的總黃酮含量明顯高于中果和小果的總黃酮含量,中果和小果果肉中總黃酮含量差異不顯著;晉北風沙區大果中的總黃酮含量明顯小于中果和小果的,但中果和小果果肉中總黃酮含量差異不顯著。
山西黃土丘陵區沙棗果肉中的總黃酮含量高于晉北風沙區,但兩者間差異不顯著,即立地條件對沙棗果肉中總黃酮含量的影響不明顯。果實大小對果肉中總黃酮含量的變化有顯著影響,黃土丘陵區沙棗果肉中總黃酮含量呈現出隨著果實的增大而增加的趨勢,晉北風沙區的則表現為隨果實的增大而減少的趨勢,但中果和小果果肉中的總黃酮含量間均無顯著差異。