新型免疫佐劑CpG-DNA的性能和初步應用分析

孫英慧

（北部戰區總醫院 遼寧 沈陽 110016）

相關研究表明，DNA是一種較強的免疫反應刺激物，不僅激活免疫細胞使其進行增殖分化，亦可以對免疫應答進行調節[1]。隨著研究的進一步深入，現已證實CpG-DNA既能誘導機體產生細胞免疫，又能誘導機體產生體液免疫，其免疫應答主要以Th1為主，亦有學者稱其為新型免疫佐劑[2]。近年來，CpG-DNA引起了廣泛關注，已有研究證明其具有甲基化CpG基序。本研究旨在探究新型免疫佐劑CpG-DNA對HBsAg的免疫作用。

1.資料與方法

1.1 一般資料

取BALB/c小鼠（SPF）30只為研究對象，其周齡為8～10，皆為雌性。按照隨機數字表法，分為兩組，分別為HBsAg組、HBsAg+CpG-DNA組，每組各15只。

1.2 方法

HBsAg+CpG-DNA組：CpG-DNA劑量取80μg，抗原取1μg，充分混合后，對小鼠進行皮下、背部注射，每只注射量皆為80μg。HBsAg組：只給予HBsAg，方法同HBsAg+CpG-DNA組。自第一次注射后，第4周及第12周時再次加強免疫。加強免疫后一周內處死小鼠，取其脾臟，采用ELISPOT試劑盒測定細胞毒T淋巴細胞的功能。

1.3 觀察指標

對比各組細胞的細胞毒T淋巴細胞功能。

1.4 統計學方法

數據應用SPSS18.0進行分析，其中計數資料（%）進行χ2檢驗，計量資料（）進行t檢驗，P＜0.05提示有顯著差異。

2.結果

在第4周與第12周進行強化免疫后，HBsAg+CpG-DNA組分泌的CD8+CTL的數量較HBsAg組顯著升高（P＜0.05），見表。

表 兩組細胞免疫檢測結果比較

3.討論

以往研究認為，DNA的免疫原性較弱，難以引起機體較強的免疫反映[3]。人們對DNA免疫調節的重視追溯到20世紀80年代，科學家首次檢測出從牛分枝桿菌中提取出具有抗腫瘤活性的DNA。而隨著研究的進一步深入，有學者對編碼牛分枝桿菌蛋白的cDNA中進行了不同序列ODN的合成，經檢測，部分ODN具有較強的免疫原性，可誘發機體強烈的免疫反映[4]。而這類ODN來說都具有一個或多個回文序列的特性。除此之外，另有科學家對ODN結構進一步測定，結果顯示具有免疫刺激作用的CpG ODN通常為非甲基化，一旦經甲基化修飾，或者GC或其它序列代替了CpG ODN則其免疫活性消失。基于此，有學者認為DNA具有免疫活性的前提為具有甲基化CG雙核苷為核心的特定核苷酸序列。而免疫系統對外源性DNA進行免疫應答就是通過對這些特定序列進行特異性識別而實現的。無與此同時，亦有相關研究報道，CpG序列是否含有低甲基化或者非甲基化是決定CpG-DNA是否有免疫活性的主要問題。若CpG未發生甲基化或者呈低甲基化，則其免疫活性較佳；反之，若CpG缺失或呈高甲基化，則其活性明顯降低。經進一步測定，現認為CpG-DNA的活性結構為CpG兩側的2個5’嘌呤和2個3’嘧啶，且當5’端為GpA、3’端為TpC或TpT時活性最強[5]。本研究取BALB/c小鼠（SPF）30只為研究對象，于免疫強化后一周進行細胞毒T細胞功能檢測結果顯示，對小鼠第4周與第12周進行強化免疫后，HBsAg+CpGDNA組分泌的CD8+CTL的數量顯著升高（P＜0.05），這與相關研究結果不謀而合，表明了CPG-DNA對HBsAg具有較好的免疫佐劑作用，不僅能夠與鋁劑相互協同促進IgG的產生與分泌，亦能夠促進Th2類免疫反應逆轉為Th1類免疫反應，這一轉變是通過IFN-γ的分泌完成的。

綜上所述，CPG-DNA對HBsAg具有較強的免疫原性，可誘導機體產生較強的免疫作用，其為一種潛能較大的免疫佐劑。