ＨＰＬＣ法對紫丁香苷含量測定的研究

姜　穎　朱曉紅

【摘要】 目的 建立紫丁香苷含量的高效液相色譜法。方法 采用Agilent C₁₈（5 μm，150 mm×4．6 mm）色譜柱，甲醇-水（1C∶C4）為流動相，檢測波長為265 nm，流速0．8 ml/min。結果 實驗表明，紫丁香苷采用高效液相色譜法峰面積與含量有良好的線性關系。結論 此方法適于紫丁香苷的含量測定，方法簡便，準確，方法學驗證好，能夠有效的控制紫丁香苷的含量。

【關鍵詞】刺五加；紫丁香苷；HPLC

現代藥理研究表明^[1]，刺五加具有抗疲勞的作用，其主要化學成分為苷類，而主要的具有生理活性的有效成分為紫丁香苷，因此選擇紫丁香苷作為控制刺五加類藥品的指標成分，參照有關文獻^[2-3]，建立高效液相色譜法測定刺五加注射液的含量，經方法學考察，此方法分離效果好，具有良好的準確性、重現性。

1 儀器與試藥

儀器：島津LC-2010A型高效液相色譜儀；島津UV-2501型紫外分光光度計。

色譜柱：Agilent C₁₈（5 μm，150 mm×4．6 mm）。

試劑：甲醇為色譜純，水為蒸餾水，其他試劑均為分析純。

對照品：紫丁香苷對照品（11574-200201）為中國藥品生物制品檢定所提供。

刺五加注射液：黑龍江完達山藥業股份有限公司。

2 實驗方法與結果

2．1 色譜條件的選擇

2．1．1 色譜柱 前后試用了三根柱子：Agilent C₁₈（5 μm，150 mm×4．6 mm）色譜柱、Kromasil C₁₈（5 μm，250 mm×4．6 mm）色譜柱。結果，均可達到較好的分離效果。

2．1．2 流動相的選擇 根據文獻報道^[4-7]，先后試用了兩種流動相系統：甲醇-水系列和甲醇-水-冰醋酸系列。結果，甲醇-水-冰醋酸系列在應用了不同的比例后，發現雜質峰多；而甲醇-水系列的雜質峰相對較少，通過不同比例的選擇，確定1C∶C4的比例分離效果最好，保留時間適中。

2．1．3 檢測波長的選擇 通過紫外掃描及DAD檢測，紫丁香苷在220 nm、265 nm處有最大吸收，由于220 nm處測定有干擾，故選擇265 nm為檢測波長。

2．1．4 流速的選擇 試用了3個流速：0．8、1．0、1．2 ml/min，均可獲得滿意的分離效果。

綜上所述，在甲醇-水（1C∶C4）為流動相，檢測波長為265 nm，流速0．8 ml/min，紫丁香苷與樣品中其他組分色譜峰可基線分離。

2．2 方法學驗證

2．2．1 儀器精密度試驗 精密吸取對照品溶液10 μl，重復進樣6次，紫丁香苷峰面積值的RSD為0．08%，實驗證明，精密度良好。

2．2．2 線性關系的考察 精密量取對照品溶液0．5、1．0、2．0、3．0、4．0、5．0 ml，分別置25 ml量瓶中，加甲醇至刻度，配制成濃度分別為0．019 98、0．039 96、0．079 92、0．119 88、0．159 84、0．199 80 mg/ml的對照品溶液。精密量取上述6種溶液各10 μl進樣，記錄色譜圖，測定其峰面積。以峰面積值（A）對進樣量（C）進行回歸得標準曲線方程。

A=2 548 545．093C+48 549．6，r=0．999 8。

并以峰面積值（A）對進樣量（C）作圖，得一直線

以上結果表明，在0．199 8~1．998 0 μg范圍內，紫丁香苷峰面積值與進樣量有良好的線性關系。

2．2．3 重復性實驗 按含量測定方法，取同一批號樣品，分別制備6份樣品供試液，測得峰面積值并計算含量，RSD為2．9%，實驗證明，重復性良好。

2．2．4 準確度實驗 取9份已知含量的樣品，按本研究中樣品制備方法和色譜條件，制備加樣回收供試品溶液并注入高效液相色譜儀，以下列公式計算回收率，實驗結果表明：回收率在95%~105%之間，加樣回收良好。

2．2．5 專屬性實驗 陰性實驗 取陰性供試品溶液（溶劑）進樣，結果表明，陰性供試品在紫丁香苷色譜峰位置處無相應峰出現。

2．2．6 耐用性實驗

穩定性實驗：取樣品供試液，分別于0、2、4、8、16、24 h進樣10 μl，測得樣品中紫丁香苷峰面積值的RSD為0．70%，實驗結果表明，樣品供試液在24 h內穩定性良好。

3 實驗結論

本實驗采用了高效液相色譜法對刺五加注射液中紫丁香苷含量進行了研究，結果表明采用Agilent C₁₈（5 μm，150 mm×4．6 mm）色譜柱，甲醇-水（1C∶C4）為流動相，檢測波長為265 nm，流速0．8 ml/min的色譜條件可以有效的測定紫丁香苷含量，該方法簡便，藥液可以直接注入，無須任何處理，分離效果好，陰性對照無任何干擾，方法學驗證表明該方法重現性好，線性好，精密性好。因此本實驗建立的方法可以準確，快速的對紫丁香苷進行定量分析。

參 考 文 獻

［1］ 曹克蘭．刺五加國外實驗研究．中草藥，1980，11(6)：277.

［2］ 許正斌．刺五加各部位有效成分的含量測定．中草藥，1984，15(5)：32.

［3］ 楊水新．高效液相色譜法測定刺五加注射液中紫丁香苷的含量．藥物分析雜志，2001，21(1)：16.

［4］ 陳光耀．反相高效液相色譜法測定刺五加片中紫丁香苷的含量．中國中藥雜志，1999，24(8)：472.

［5］ 劉瑩．刺五加提取物中紫丁香苷、紫丁香樹脂苷的HPLC測定法．中草藥，2000，31(8)：587.

［6］ 張世偉．刺五加提取物中紫丁香苷的HPLC測定法．中草藥，1999，30(9)：660.

［7］ 封士蘭．高效液相色譜法同時測定刺五加中刺五加苷B、苷E0的含量．中國現代應用藥學雜志，2001，18(2)：124.