多囊卵巢綜合征患者外周血游離miR-21在診斷中的運用研究

張偉新 盧孔月 文道林 曾 君 劉 琛

（中國科學院大學深圳醫院（光明），廣東 深圳 518107）

多囊卵巢綜合征（PCOS）為生育期女性最為多見的內分泌代謝異常性疾病之一，其主要表現為女性慢性無排卵、雄激素水平升高及卵巢多囊樣改變，多合并胰島素抵抗和肥胖的發生[1]。現階段PCOS發病機制尚未明確，以往研究認為該病可能與遺傳及環境因素等有關[2]。miRNA為一種含有22個核苷酸長度的單鏈非編碼RNA，能夠與靶基因mRNA 3'-端特異性結合，對靶基因mRNA的表達進行調控。miRNA的表達失調可導致上百個mRNA和蛋白表達的變化，在疾病的發生和發展過程中具有重要的作用[3]。自從在血清/血漿中發現與疾病相關的miRNA后，多個研究小組展開了血清/血漿miRNA水平與多種疾病關系的研究。結果表明，在患者的血清/血漿中存在著相關疾病特定的miRNA表達譜，與疾病的發生和發展相關[3]。而隨著對miRNA在多種疾病中的研究不斷深入，為多囊卵巢綜合征外周血游離miRNA的篩選與鑒定以及在診斷中的應用研究提供了可行性。

1 資料與方法

1.1 一般資料：隨機選取我院2017年7月至2018年6月婦產科收治的PCOS患者30例，年齡21～39歲，平均年齡（32.2±6.5）歲；年齡選擇于我院健康體檢的健康者30例，年齡22～40歲，平均年齡（33.1±6.3）歲。納入標準：符合我國頒布的多囊卵巢診斷標準[4]；超聲檢查確診為卵巢多囊性改變；無排卵或稀發排卵；未合并卵巢其他疾病；未達到手術指征；既往于正規醫院接受治療。排除標準：引其他疾病所導致的雄激素分泌增加；處于妊娠期或哺乳期；合并其他系統疾病；進階段使用激素或調制降糖藥干預。兩組患者一般臨床資料對比無差異性（P＞0.05），可進行對比。

1.2 主要試劑：Trizol試劑（購自北京天根生物科技有限公司）；TransScript II Green Two-Step qRT-PCR SuperMix 試劑盒（購自北京天根生物科技有限公司）。

1.3 方法：所有納入研究患者均空腹8 h以上，采集空腹外周靜脈血，并于采血后2 h內采用4 ℃低溫離心機離心10 min，轉速為1600 r/min，取上清置于-80 ℃冰箱中備用。用于檢測miR-21的血清在采用離心機離心10 min（轉速16000 r/min）以保證血清中不含有血漿各種細胞成分，置于無RNA酶的EP管中保存待測。首先運用TRIzol （Invitrogen）法提取血清中的總RNA，隨后采用TransScript II Green Two-Step qRTPCR SuperMix 試劑盒，按照試劑盒說明操作，對總RNA中的miRNA進行特異的逆轉錄反應，合成目標miRNA的cDNA模板用于后續的Q-PCR擴增反應，操作步驟嚴格遵守試劑盒說明書進行，采用Q-PCR儀（ABI7500）檢測miR-21表達水平。

1.4 統計學方法：采用SPSS2.0統計學軟件對數據進行統計分析，組間對比采用t檢驗分析，以表示；計數資料采用χ2檢驗分析，以%表示。診斷價值采用受試者工作曲線（ROC）下面積（AUC）評價指標的診斷價值，采用Z檢驗對比ROC曲線下面積。當P＜0.05時，差異具有統計學意義。

2 結 果

2.1 不同組別人群miR-21表達水平對比：PCOS組者miR-21表達水平為（8.53±2.36），健康組miR-21表達水平為（4.78±1.27）對比具有差異性（t=4.68，P=0.00）。見表1。

表1 不同組別人群miR-21表達水平對比

表1 不同組別人群miR-21表達水平對比

分組 例數 miR-21 PCOS組 30 8.53±2.36健康組 30 4.78±1.27 t值 - 4.68 P值 - 0.00

2.2 miR-21對鑒別診斷POCS和健康者的診斷價值分析：對miR-21進行進一步的受試者工作曲線（ROC）評估是否具有作為鑒別診斷POCS的生物標志物的價值。結果表明：血清miR-21診斷ROCS的受試者工作曲線（ROC）下面積（AUC）為0.928（P=0.001），則miR-21對POCS具有診斷價值；選取大于5.20的截點時，Youden指數此時最大，則miR-21對鑒別診斷POCS具有較好的診斷價值，靈敏度為100.00%，特異度為72.70%。見圖1。

3 討 論

圖1 血清中miR-21在POCS患者和健康人群中相對表達結果

多囊卵巢綜合征為現階段女性人群中最為多見的內分泌疾病之一，多合并有代謝異常及生殖功能障礙，但現階段其發病因素或發病機制尚未明確[5]。且近些年來的研究證實，多囊卵巢綜合征患者雄性激素分泌增加是導致機體代謝紊亂的作用因素[6]。miRNAs對機體中細胞增殖分化、凋亡及免疫中具有重要的作用[7]。miR-21為機體中分布最為廣泛的miRNAs之一。有研究表明[8-9]，miRNA在卵巢細胞中能夠通過作用于卵巢顆粒細胞，在性腺發育、激素合成分泌具有重要作用，從而促進卵細胞的成熟。有學者研究發現[10]，miR-21對小鼠卵巢顆粒細胞凋亡具有抑制作用，可提高小鼠的排卵率。本研究結果表明，PCOS組者miR-21表達水平為（8.53±2.36），健康組miR-21表達水平為（4.78±1.27），對比具有差異性（t=4.68，P=0.00）。血清miR-21診斷ROCS的受試者工作曲線（ROC）下面積（AUC）為0.928，選取大于5.20的截點時，Youden指數此時最大，則miR-21對鑒別診斷POCS具有較好的診斷價值，靈敏度為1.00，特異度為0.73（P=0.001）。綜上所述，血清miR-21在PCOS中表達水平增加，且對PCOS具有較好的診斷價值。