快速糾正乙二胺四乙酸依賴性假性血小板減少的臨床新方法

高曉玲　吳惠玲　朱江賢

摘要目的：建立一種新的準確、簡便糾正乙二胺四乙酸（EDTA）依賴性假性血小板減少（EDTA-PTCP）的處理方法。方法：收治EDTA-PTCP患者118例。采用含乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K）千粉的抗凝管二次抗凝處理標本，同時取患者末梢血手工法計數血小板，比較兩種方法處理結果。結果：118例樣本中，116例用上述方法處理后，檢測結果與末梢血手工法計數結果比較，差異無統計學意義（P>0.05）;涂片、染色鏡檢觀察血小板無集聚，呈散在分布，能糾正EDTA-PTCP;2例樣本用上述方法處理后，未能糾正EDTA-PTCP，涂片、染色觀察血小板仍集聚。結論：臨床工作中發現EDTA-PTCP時，可采用含EDTA-K2干粉的抗凝管糾正，該方法避免了二次采血，能縮短患者標本檢測平均時間，提高了檢驗效率。

關鍵詞 血小板假性減少;抗凝劑;檢測方法

乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）是國際血液學標準化委員會（ICSH）1993年建議用作血液分析的抗凝劑，近年來發現此種抗凝劑偶可誘導血小板的體外聚集，血細胞分析儀不能識別，而導致血小板計數明顯低于實際數值，這就是EDTA依賴性假性血小板減少（EDTA-PTCP）。有文獻報道EDTA-PTCP的發生率為0.15%～0.25%;約占所有血小板<100x10/L患者的0.85%～1.05%，而在門診患者中，EDTA-PTCP的發生率高達2.5%～4.0%"。EDTA-PTCP本身無病理學意義，然而，EDTA-PTCP容易造成臨床的誤診、誤治，甚至導致不必要的血小板輸注。因此準確快速糾正EDTA-PTCP患者血小板計數，對于減少臨床誤診是非常重要的。目前，臨床常用的糾正EDTA-PTCP的方法有EDTA抗凝靜脈血加，人阿米卡星后重新計數、重新采枸櫞酸鈉抗凝靜脈血計數，采集末梢血計數等，以上方法均存在一定的不足。本文對本實驗室新舊方法做對比，尋找一種更為快速、準確的方法來糾正EDTA-PTCP。

資料與方法

2014年10月-2016年12月收治血常規檢測出現EDTA-PTCP患者118例，男51例，女67例;門診患者49例，住院患者53例，健康體檢16例。

儀器與試劑：XE-2100血液分析儀、配套試劑及質控品，儀器狀態良好，每天均檢測高、中、低3種質控品，且均在控后進行標本檢測;2mg/mLEDTA-K2抗凝管;0.5mLEDTA-K2干粉抗凝管;光學顯微鏡;草酸銨稀釋液，按照《全國臨床檢驗操作規程》（第4版）進行配制。

方法：118例SYSMEX-2100血液分析儀（阻抗法）結果顯示血小板<80x10%/L，涂片、染色鏡檢鏡下血小板集聚（圖1）的患者抗凝血標本，分別取150μL加人含有EDTA-K干粉抗凝劑的2個抗凝管內（考慮抗凝劑濃度、標本檢測量），充分混勻后合并為1管，于37C恒溫箱放置10～15min，再次用SYSMEX-2100血液分析儀（光學法）檢測糾正血小板計數，并涂片染色鏡檢觀察血小板是否仍集聚。同時，按《全國臨床檢驗操作規程》（第4版）操作，采取同一患者末梢血，由經驗豐富的2名主管以上檢驗師進行血小板人工計數，結果取均值作為參照。

統計學方法：采用PEMS3.0統計軟件，計量資料（x+）表示，采用1檢驗;P<0.05為差異有統計學意義。

結果

118例中116例用上述方法處理后，檢測結果與末梢血手工法計數結果比較，差異無統計學意義（P>0.05），見表1。

涂片染色鏡檢觀察血小板無集聚，呈散在分布，能有效糾正EDTA-PTCP。見圖1～2。有2例用上述方法處理后，涂片、染色鏡檢觀察血小板仍聚集，未能糾正EDTA-PTCP。

討論

血小板在體內主要參與止血、血栓形成，在止血、血栓形成的病理生理過程中起著重要作用，血小板的數量異常或功能缺陷是出血性疾病或血栓性疾病的重要原因。當血小板在（20～50）x10*/L時，可有輕度出血或術后出血癥狀凹。因此，血小板計數結果準確對指導臨床診斷和治療非常重要。

目前，臨床傾向于用血小板衛星現象、抗磷脂抗體等理論解釋EDTA-PTCP的機制。然而，也有學者提出假性血小板減少患者的主要原因在于血小板膜糖蛋白GPIl//ITal。EDTA-PTCP患者血小板的GPIIb/lIa表達要明顯強于正常人，導致血小板的聚集能力增加。一般來說，處于正常情況下的GPIIb//IIa主要隱藏于血小板膜的亞單位中，而鈣離子鰲合劑的變化，可促使血小板膜出現蛋白暴露現象，最終導致血小板聚集，而使血細胞分析儀不能正確計數，造成血小板計數假性減低。這種聚集是一種可逆的，可以被糾正的弱聚集。本次試驗中，EDTA能將已發生EDTA依賴聚集的血小板重新解離，其關鍵可能在于EDTA的濃度（二次抗凝）、標本混勻后的放置時間及溫度。根據國際血液學標準化委員（ICSH）1993文件建議，血細胞計數應用EDTA-K，為抗凝劑4，為防止稀釋低滲作用，EDTA-K2抗凝劑應使用干粉。臨床工作中常常因為患者的個人情況導致采血量過多或者過少，導致EDTA-K，濃度偏低或偏高。過高濃度的EDTA-K2誘導血小板抗體與血小板結合，引起血小板聚集而不被計數;EDTA-K，濃度偏低時，血液不能有效抗凝，PLT聚集而不被計數[51。2.25mg/mL是EDTA-K2的最適抗凝濃度，該濃度不會影響白細胞的數目和大小，對紅細胞形態的影響也最小，并且可以抑制血小板的聚集問。本次試驗中EDTA二次抗凝后將標本溫浴15min，原因有二，其一是據文獻報道，EDTA-Kz抗凝血，血小板在15min測得值最高"，血小板聚集主要發生在血液離體15～60min，即抽血15min后血小板會進行性下降，在采血15min內分析EDTA-K2抗凝的全血標本，可提高血小板測量結果的準確性圖;其二，EDTA-PTCP，具有溫度依賴性回，最適聚集溫度為4～20C，在37C條件下采血則不產生聚集。

EDTA-PTCP發生率較低，常因被忽視而出現誤診誤治，導致了醫療資源的浪費，及時發現并糾正PTCP非常重要。EDTA-K2干粉二次抗凝的方法能快速準確糾正PTCP，同時避免對患者的重新抽血，既節省了檢測的時間和成本，也規避了患者對醫護工作者產生怨懟的可能，有良好的臨床應用前景。

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