EGFR 和DNA-PKcs 與肺癌患者預后的關系

曲媛媛 殷洪濤 張茵 王瑞芝 鄂明艷

肺癌在我國是發病率及死亡率最高的惡性腫瘤，其中非小細胞肺癌占肺癌的80%[1]，是臨床最常見也最難治的惡性腫瘤之一。患者的預后除與腫瘤分期、病理類型等有關，還與調控腫瘤細胞的增殖、損傷修復、抗凋亡等相關基因的表達異常密切相關。其中，表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）作為原癌基因-1（human epidermal growth factor receptor-1，her-1）的表達產物[2]，在腫瘤的發生、發展中發揮著重要作用。EGFR抑制劑對存在EGFR敏感性突變的非小細胞肺癌具有良好的治療效果[3-4]。EGFR的高表達則與放化療敏感性差，患者預后不良相關[5]。DNA依賴蛋白激酶催化亞基（DNAdependent protein kinase catalytic subunit，DNA-PKcs）是參與DNA雙鏈斷裂損傷修復的重要激酶，在包括非小細胞肺癌的多種腫瘤組織中高表達[6]，臨床研究提示其表達程度與患者的預后具有相關性。然而EGFR和DNA-PKcs與非小細胞肺癌患者預后效果及患者生存時間之間的關系研究較少。為明確EGFR和DNK-PKcs在非小細胞肺癌中的表達情況，我們對2005年1月—2008年6月在我院行手術治療的非小細胞肺癌患者進行了回顧性研究，現將其歸納如下。

1 材料與方法

1.1 臨床病例

將在我院行手術治療227例患者作為研究對象，女性73例，男性154例，平均年齡（55.8±9.4）歲。肺葉切除術208例，全肺切除術16例，袖狀切除術者3例。腺癌130例，鱗癌97例。根據第8版AJCC分期，I期32例，IIa期73例，IIb期68例，IIIa期52例，IIIb期2例。隨訪至2018年8月。術后化療者156例，術后放療者87例。

1.2 免疫組化染色

用切片機4 μm將組織芯片蠟塊連續切片，56℃水中展片后轉至載玻片上。處理如下：（1）脫蠟、水化；（2）抗原修復；（3）血清封閉；（4）在不同切片上分別滴加EGFR、DNA-PKcs的多克隆抗體，4℃孵育過夜；（5）PBS洗三次，2分鐘/次；（6）二抗孵育約1小時；（7）PBS洗三次，5分鐘/次；（8）DAB顯色5～10分鐘；（9）PBS沖洗5～10分鐘；（10）脫水、透明、封片。

1.3 結果評分

根據染色強度、陽性細胞比例進行評分：染色強度：0（高倍鏡下為陰性）；1（弱，僅在高倍鏡下可觀察到）；2（中等，在低倍鏡下可觀察到）；3（強，在低倍鏡下可見明顯染色）。陽性細胞比例：0（無染色）；1（1%～25%）；2（26%～50%）；3（51%～75%）；4（76%～100%）。將以上兩項評分相加，得到范圍在0～7的總分，將染色結果分為四組：-（0）；+（1～2）；++（3～5）；+++（6～7）。EGFR及DNA-PKcs表達+++被認為是高表達，+、++均被認為是低表達。

表1 EGFR 和DNA-PKcs-、+、++、+++四種表達程度[例（%）]

1.4 觀察指標

病理科查找2005年1月—2008年6月在我院行手術治療的非小細胞肺癌患者的腫瘤組織蠟塊，進行上述EGFR和DNA-PKcs的免疫組化染色，并對表達程度進行評分，分為-、+、++、+++四組，病案室對這些患者的生存情況進行隨訪，隨訪時間至2018年8月10日。

1.5 統計分析

采用SPSS 13.0軟件進行統計分析，Kaplan-Meier生存分析，Log-rank比較生存曲線間差異。

2 結果

2.1 EGFR和DNA-PKcs

肺癌患者EGFR和DNA-PKcs-、+、++、+++四種表達程度的患者例數見表1。

另外，EGFR和DNA-PKcs共高表達27例。肺腺癌130例，其中EGFR高表達23例，DNA-PKcs高表達64例；肺鱗癌97例，其中EGFR高表達19例，DNA-PKcs高表達46例。

2.2 生存時間分析

EGFR表達-、+、++、+++的患者的中位生存時間分別為35、37、35、34個月（P＞0.05）（圖1）。DNA-PKcs表達-、+、++、+++的患者的中位生存時間分別為37、34、32、33個月，陰性表達（-）和高表達（+++）差異具有統計學意義（P＜0.05）（圖2）。總體中位生存時間為35個月。中位生存時間EGFR和DNAPKcs共高表達為27個月，非高表達患者為36個月，差異不具有統計學意義（P＞0.05）（圖3）。

3 討論

圖1 EGFR 表達-、+、++、+++患者的生存曲線

圖2 DNA-PKcs 表達-、+、++、+++患者的生存曲線

圖3 EGFR 和DNA-PKcs 共高表達患者與非高表達患者的生存曲線

在非小細胞肺癌中，約50%～80%存在EGFR的高表達，EGFR高表達多導致非小細胞肺癌患者對放化療產生抗拒，因而導致患者的預后不良[7]。通過對患者長期隨訪研究發現，EGFR的表達程度與患者的生存并無顯著相關，EGFR不表達患者的中位生存時間為35個月，高表達患者的中位生存時間為34個月。因此，EGFR的表達并不能作為患者預后的獨立評價因素。DNAPKcs定位于細胞核，與Ku70、Ku80共同組成DNA-PK復合物，參與DNA雙鏈斷裂的非同源末端連接修復[8]。DNA-PKcs在包括非小細胞肺癌的多種腫瘤組織中高表達，有研究報道非小細胞肺癌腫瘤組織中DNA-PKcs的表達高于周圍正常肺組織，且腫瘤與正常組織的DNA-PKcs表達比值高與患者死亡風險增加呈相關[9-10]。我們的研究發現，DNA-PKcs在非小細胞肺癌組織中的高表達率達48%，且高表達患者與陰性表達患者之間的中位生存時間差異具有統計學意義，分別為33個月及37個月。為明確EGFR和DNA-PKcs同時高表達患者的生存情況，我們發現，EGFR和DNA-PKcs同時高表達患者中位生存時間為27個月，低于非同時高表達的患者，但兩組差異無統計學意義，因此說明，即使兩個分子聯合檢測，也不能對非小細胞肺癌的長期生存預后做出預測。非小細胞肺癌患者的預后是多因素共同決定的，研究證明，僅通過一兩項腫瘤發生相關的生物大分子的檢測不能直接對患者的預后做出判斷。多項研究表明EGFR經胞漿內轉運進入細胞核后，EGFR可作為共轉錄因子調控相關基因的表達，如COX-2、cyclinD1等，也可以與DNA-PKcs形成復合物，使DNAPKcs的活性增強[11-12]。

綜上所述，EGFR和DNA-PKcs在非小細胞肺癌的腫瘤組織中均存在不同程度的表達，雖然EGFR的表達程度與患者的生存時間無顯著相關，但更深入的研究其在細胞核內的表達與患者預后的相關性具有潛在意義。DNA-PKcs高表達則提示患者的生存時間短，對于患者預后的判斷具有一定的提示作用。