酸堿度對秀珍菇新品種福秀5669菌絲體形態及鎖狀個數的影響

黃敏敏 張閩春 黃曉麗 劉 洋 李 巍 傅建煒* 姚清華*

（1福建省農業科學院農業質量標準與檢測技術研究所，福建福州350003；2福建省武夷山市食用菌站，福建武夷山354300；3福建省南平市農業局，福建南平353000）

秀珍菇（Pleurotus geesteranus）中文名稱為紫孢側耳，別名姬菇、黃白平菇、美味側耳等，屬于真菌門，擔子菌綱，傘菌目，側耳科，側耳屬，是近年來栽培面積最廣的珍稀食用菌之一。該菇富含鮮味氨基酸、甜味氨基酸、支鏈氨基酸、多種不飽和脂肪酸、蛋白多糖及維生素和鐵、鈣、磷、鋅等微量元素。尤為值得一提的是，秀珍菇的蛋白質含量高于雙孢蘑菇、香菇、草菇等食用菌，有“菇中極品”之稱。掃描電鏡廣泛應用于番茄、水稻、甘藍、烤煙等農作物[1-6]和野兔、扁蛾、嗜尸性蠅等動物[7-9]及多種細菌和真菌[10-16]的亞微機構和超微結構研究。食用菌菌種制作、培養過程中，培養基是關鍵性因素，其酸堿度（pH）對食用菌菌種的生長尤為重要，關系到菌種制作的成敗[17]，并且對食用菌的產量和品質也有一定的影響。但應用掃描電子顯微鏡觀察不同酸堿度的液體培養基對福秀5669菌絲體大小、鎖狀個數和表面結構等的影響尚未見報道。筆者觀察不同酸堿度液體培養基培養福秀5669（圖1）菌絲體，探討pH對其菌絲直徑、鎖狀個數和表面結構的影響，以期為福秀5669生產等提供科學參考。

圖1 福秀5669

1 材料與方法

1.1 供試材料

福秀5669號，由福建省農業科學院土壤肥料研究所環保研究室食用菌育種課題組提供。

培養基配方：土豆200%，白糖20%，加水1000 mL。試驗用的鹽酸和氫氧化鈉，購于國藥集團化學試劑有限公司。

1.2 試驗方法

首先將配制好的液體培養基用鹽酸和氫氧化鈉制成 pH5（C1）、pH6（C2）、pH7（C3）、pH8（C4）、pH9（C5）、pH10（C6）6個梯度（6個處理），裝入三角瓶，每個三角瓶裝量為50 mL，高壓滅菌。每處理3個重復，每重復1瓶，待液體培養基溫度冷卻至26℃左右接種。接種后置于26℃生化培養箱培養，菌絲培養18 d取樣作電鏡觀測材料。

1.3 電鏡觀察方法

切取不同處理的新鮮福秀5669菌絲體，迅速投入濃度為5%的戊二醛固定液中固定，并在4℃冰箱中存放4 h，用0.2 mol/L磷酸緩沖液漂洗3次，15 min/次，再用濃度1%鋨酸對樣品進行第二次固定，放在4℃冰箱存放2 h。將雙固定好的樣品先用0.2 mol/L磷酸緩沖液沖洗3次，每次10～15 min，再用乙醇進行梯度脫水：50%，70%，80%，90%，各脫水10～15 min，100%乙醇脫水3次，每次10 min，用環氧丙烷溶液置換2次。最后將樣品置于日立HCP-2臨界點干燥儀中干燥。干燥后的樣品用銅臺粘好后放入EIKO IB-5型離子鍍膜儀上噴鍍黃金，再用日本電子JSM-6380 Lv型掃描電子顯微鏡進行觀察拍照。

1.4 測定方法

采用直接測定方法計算不同處理菌絲直徑和菌絲鎖狀聯合個數。每個樣品的每個項目均分別觀察了3個視野，據此統計菌絲鎖狀聯合數、測量菌絲直徑，按放大倍率換算成實際長度；采用了DPS7.05軟件進行差異顯著性檢驗。

2 結果與分析

2.1 不同酸堿度對福秀5669菌絲直徑的影響

2.1.1 不同酸堿度對福秀5669菌絲最大直徑的影響

由圖1可知，C5（pH9）處理的福秀5669菌絲最大直徑比C1（pH5）、C2（pH6）、C3（pH7）、C4（pH8）和C6（pH10）處理的福秀5669菌絲分別增加92.80%、31.69%、31.69%、28.53%和22.75%，差異達顯著或極顯著水平（P＜0.05和P＜0.01）。

圖1 酸堿度對福秀5669菌絲最大直徑的影響

2.1.2 不同酸堿度對福秀5669菌絲最小直徑的影響

由圖2可知，福秀5669菌絲最小直徑C2與C3處理之間差異不顯著（P＞0.05）。但C6、C5、C4和C1處理的福秀5669菌絲最小直徑比C3處理的福秀5669菌絲分別小20.17%、57.95%、64.18%和67.47%，差異達顯著和極顯著水平（P＜0.05和P＜0.01）。

圖2 酸堿度對福秀5669菌絲最小直徑的影響

2.2 不同酸堿度下福秀5669菌絲體中鎖狀個數的影響

由圖3可知，C5處理的福秀5669菌絲鎖狀個數比 C1、C2、C3、C4和 C6處理的福秀 5669 鎖狀個數多，且差異達極顯著水平（P＜0.01）。

圖3 酸堿度對福秀5669菌絲體中鎖狀個數的影響

2.3 不同酸堿度對福秀5669菌絲體表面結構的影響

由圖4可知，C1處理（pH5）的福秀5669菌絲上有紋飾，大小較均勻，呈圓形，未見鎖狀聯合。C2處理（pH6），菌絲呈圓形，表面有較淺紋飾，大小有的較均勻，有的鎖狀變形帶有紋飾，有的表面光滑。C3處理（pH7）的菌絲大小較均勻，表面有大小不均勻的紋飾，有的菌絲皺縮，有的鎖狀干癟。C4處理（pH8），菌絲部分斷裂，有的紋飾大小不一，鎖狀大小不均勻，形態有變化。C5處理（pH9），菌絲大小不均勻，紋飾變化大，菌絲表面紋飾模糊，有的呈扁條狀，有的菌絲斷裂，鎖狀個數多且表面紋飾較模糊。C6處理（pH10），菌絲大小不均勻，表面光滑沒有紋飾，有的呈扁條狀，鎖狀表面也無紋飾。

圖4 酸堿度對福秀5669菌絲體表面結構的影響

3 小結與討論

目前pH對食用菌生長影響的研究，多集中在菌絲生長、產量和品質等方面，關于pH對食用菌形態特征影響的研究未見報道。宮志遠等[18]試驗表明，阿魏蘑、杏鮑菇、真姬菇、酒紅球蓋菇和楊樹菇菌絲生長的最適pH分別為6.0、5.4、6.0、5.4和6.8；而pH8～10蓖草料栽培阿魏菇菌絲生長健壯，污染率低，比常規料栽培阿魏菇pH高1.5～2.5[19]；墨汁鬼傘菌絲體生長適宜pH9，菌絲濃密，生長速度最快[20]；巨大口蘑菌絲適宜生長pH7.0，菌絲生長快，菌絲粗壯、濃白、致密[21]；pH6.21培養基能提高姬松茸菌絲生長速度等[22]；陳志松[23]試驗表明，金針菇適宜pH為5.5～6.2，pH低于5.0菌絲生長速度明顯變慢，菌種塊形成一個濃的白毛團。劉葉高等[24]試驗表明，培養料pH6.5～7.5茶薪菇菌絲滿袋最快為44 d，生物轉化率最高為47%，而pH6.5～7.5，杏鮑菇菌絲滿袋最快為34 d，生物轉化率為46%，pH6.5～7.5阿魏菇菌絲滿袋最快為38 d，生物轉化率最高為42%。江枝和等[25]試驗結果，pH為8.5的培養料栽培的虎奶菇菌核的蛋白質氨基酸評分和營養指數居試驗處理的第一位，化學評分、必需氨基酸指數和生物價，均居第二位，氨基酸比值系數分，居第3位，綜合評價最高。由此可見，適宜酸堿度不僅能夠促進食用菌菌絲生長、提高食用菌產量，而且具有改善食用菌品質的作用。

筆者研究結果表明：pH 9培養基培養的福秀5669菌絲最大直徑比他處理有顯著增加，差異達顯著或極顯著水平（P＜0.05和P＜0.01），而菌絲鎖狀個數差異達極顯著水平（P＜0.01）。說明適宜的pH對福秀5669菌絲直徑及鎖狀個數顯著或極顯著的促進作用，反之則具有抑制作用。電鏡觀察結果，不同pH培養基培養福秀5669菌絲體表面形態明顯不同，有的菌絲表面無紋飾、模糊，又有的呈扁條狀，還有的菌絲斷裂及大小不均勻，鎖狀聯合表面有的無紋飾光滑或紋飾大小不均勻、模糊及干癟。今后應在分子水平探討pH對食（藥）用菌的作用機理。