咪鮮胺對楊梅的殘留試驗

趙梅勤，梁赤周，徐雅飛，陳淑娟

(1.浙江天豐生物科學有限公司，浙江 金華 321025； 2.浙江省農藥檢定管理總站，浙江 杭州 310020)

楊梅(Myriarubra)是中國南方一種特色的水果，種植歷史悠久，經濟收益較高，是很多山區人民致富的途徑。近年來，隨著楊梅栽培面積不斷擴大，田間精細化管理水平提高，楊梅褐斑病(MycosphaerellaMyricaeSaw)等病蟲發生危害也日益加重[1]。楊梅褐斑病是一種由真菌引起的病害，主要危害葉片，是楊梅的主要病害，分布很廣，不同品種上均有發生，近年來浙江省東魁楊梅的發病率為30%～50%，管理粗放的果園發病率高達80%以上，對楊梅產量和品質影響極大[2]。咪鮮胺是一種廣譜性的麥角甾醇生物合成抑制劑，廣泛用于防治由尾孢屬、核腔菌屬、喙孢屬、核盤菌屬、鐮孢屬及白粉菌、炭疽菌等致病菌所引起的多種病害，具有治療和鏟除作用[3]。為確保咪鮮胺水乳劑的安全使用，評價其在楊梅上的消解趨勢、殘留水平及對環境的污染情況，本項目研究了450 g·L-1咪鮮胺水乳劑在楊梅上的殘留動態及最終殘留水平的1年4地殘留試驗。

1 材料與方法

1.1 供試材料

2016年樣品采集于4個地區，分別是浙江省桐廬縣瑤琳鎮琴溪村(東魁楊梅)、浙江省開化縣音坑鄉對門村(東魁楊梅)、湖南省張家界市永定區三家館鄉三家館村(烏梅)、貴州省黔南州惠水縣七里沖果樹站(東魁楊梅)。采用液相色譜-串聯質譜儀(LC-MS-MS)和氣相色譜儀(GC-ECD)檢測楊梅中的咪鮮胺和三氯苯酚含量。

儀器。液相色譜-串聯質譜儀；Waters Xevo TQ(美國Waters公司)；氣相色譜儀(Agilent 6890)；N-EVAP112氮吹儀(美國OrganonationAssociates.Jnc)；電子天平(PL202-L瑞士Mettler公司)；Milli-Q超純水凈化系統(美國Millipore公司)；渦旋混合器(德國IKA公司)；勻質器(IKAT25)；電熱恒溫水浴鍋(上海浦東榮豐科學儀器有限公司)；三角漏斗、具塞量筒、容量瓶及實驗室常用儀器設備等。

試劑。1 000.0 mg·kg-1咪鮮胺標準溶液、100.0 mg·kg-12，4，6-三氯苯酚標準溶液(農業部環境質量監督檢驗天津測試中心)；乙腈、正己烷、丙酮(HPLC級，美國Tedia公司)；甲醇(HPLC級，德國Merck公司)；氯化鈉(AR級，河北華光科技股份有限公司)；乙酸銨(色譜純，美國Fisher公司)；乙酸(分析純，浙江中興化工試劑有限公司)。

液相條件。色譜柱Phenomenx XB-C18(100 mm×2.1 mm×2.6 μm)；流動相為甲醇(A)和5 nmol乙酸銨0.1%乙酸緩沖溶液(B)；流速0.2 mL·min-1；進樣量為5 μL；柱溫35 ℃。

質譜條件。離子源為電噴霧離子源150 ℃；電離方式為EST；毛細管電壓3.0 kV；脫溶劑氣溫度500 ℃，流速800 L·h-1；錐孔反吹氣流速40 L·h-1，碰撞氣流速0.15 mL·min-1；采用外標法面積定量。

色譜柱。DB-17(30 m×0.25 mm×0.25 μm)，彈性石英毛細管柱；載氣為高純氮氣，2.0 mL·min-1；尾吹氣為氮氣，60.0 mL·min-1；進樣口溫度220 ℃，前檢測器溫度320 ℃；采用不分流進樣方式，進樣量1 μL。

柱溫程序。初始溫度150 ℃，保持2 min，以6 ℃·min-1速率程序升溫至270 ℃，繼續恒溫20 min至樣品全部流出。采用標準農藥樣品保留時間定性，外標法面積定量。

方法。楊梅中的咪鮮胺和2，4，6-三氣苯酚經乙腈提取，鹽析后咪鮮胺過氨基柱和有機濾膜，LC-MS-MS檢測，外標法定量；2，4，6-三氯米酚過Florisil柱，50 ℃氮吹，正己烷定容后，GC檢測(ECD檢測器)。

1.2 田間試驗處理設計

按農藥殘留試驗準則要求設計試驗小區，2株楊梅樹為1小區，重復3次，順序排列，小區間設保護帶。另設對照小區。根據該農藥田間藥效試驗報告，450 g·L-1咪鮮胺水乳劑在楊梅上防治褐斑病推薦使用劑量：有效成分用藥量250～500 mg·kg-1，制劑用藥量900～1 800倍液施藥次數2次，施藥間隔7～10 d，在病發初期噴霧施藥。

施藥劑量。消解動態試驗按有效成分750 mg·kg-1(600倍液)的劑量于楊梅成熟期一半大小時均勻噴霧施藥，施藥1次，噴藥后2 h及1、3、5、7、14、21、28 d取樣。

最終殘留試驗。2個施藥劑量：低劑量500 mg·kg-1，高劑量750 mg·kg-1。各設2和3次施藥，施藥間隔期為3、5、7、14 d。另設清水空白對照，處理間設保護帶。

1.3 樣品處理

1.3.1 樣品中咪鮮胺的提取凈化

提取。稱取勻漿處理好的試樣25.0 g(精確至0.01 g)于250 mL燒杯中，加入50.0 mL乙腈，高速勻漿2 min；將溶液通過濾紙完全過濾至有5～7 g氯化鈉的100 mL具塞量筒中，塞子塞緊后，激烈震蕩1 min，在室溫下靜置30 min，使水相和乙腈相分層。

凈化。從具塞量筒中吸取上清有機相10.0 mL于50.0 mL燒杯中，置于80 ℃水浴鍋上，氮吹至近干。加入2.0 mL的甲醇∶二氯甲烷(1/9，V/V)溶劑，充分溶解，待凈化。將氨基柱用4.0 mL的甲醇∶二氯甲烷(1/9，V/V)預洗，上述提取液轉移至氨基柱；小燒杯用甲醇∶二氯甲烷(1/9，V/V)洗滌3次，洗滌液全部轉移至氨基柱，15 mL離心管收集洗脫液；然后將裝有洗脫液的離心管置于氮吹儀，氮吹至近干(水浴溫度為50 ℃)，用甲醇∶水(2/3，V/V)定容至5 mL；在混合器上混勻后，過0.22 μm有機濾膜，待測。

1.3.2 樣品中三氯苯酚的提取凈化

提取。步驟同1.3.1中提取步驟。

凈化。從具塞量筒中吸取上清有機相10.0 mL于50 mL燒杯中，置于80 ℃水浴鍋上，氮吹至近干，加入2.0 mL正己烷溶劑，充分溶解，待凈化。將Florisil柱用4.0 mL正己烷∶丙酮(9/1，V/V)預洗1次，上述提取液轉移至Florisil柱，小燒杯用正己烷∶丙酮(9/1，V/V)洗滌3次，洗滌液全部轉移至Florisil柱，10 mL離心管收集洗脫液；然后將裝有洗脫液的離心管置于氮吹儀，氮吹至小于5 mL(水浴溫度為50 ℃)，用正己烷定容至5 mL；在混合器上混勻后，過0.22 μm有機濾膜，待測。

1.4 添加回收率與相對標準偏差

按上述色譜條件及檢測步驟，進行添加回收率試驗，在楊梅樣品中添加咪鮮胺標準溶液，添加濃度分別為0.01、0.10、1.00 mg·kg-1時，回收率在96.0%～106.4%，變異系數5.2%～6.1%。在楊梅樣品中添加2，4，6-三氯苯酚標準溶液，添加濃度分別為0.05、0.10、1.00 mg·kg-1時，回收率在92.5%～107.6%，變異系數4.9%～6.5%。

1.5 數據分析

咪鮮胺在楊梅中的降解符合一級動力學反應模式[4]，可用Ct=C0e-kt求其降解方程。C0為起始濃度，k為降解常數，t為藥后天數，通過此方程可求出降解半衰期。

2 結果與分析

2.1 咪鮮胺在楊梅上的消解動態

2016年，分別在浙江桐廬縣、浙江開化縣、湖南張家界市、貴州惠水縣4地開展450 g·L-1咪鮮胺水乳劑在楊梅上的消解動態試驗。

表1結果顯示，浙江省桐廬縣試驗點咪鮮胺在楊梅中C=6.692 6e-0.186t，R2=0.887 7，半衰期為3.7 d，咪鮮胺初始沉積量4.862 mg·kg-1，14 d后降解率為74.7%；浙江省開化縣試驗點C=0.615 7e-0.107t，R2=0.928 2，半衰期6.5 d，咪鮮胺初始沉積量1.043 2 mg·kg-1，14 d后降解率83.1%；湖南省張家界市試驗點C=9.424 9e-0.083 6t，R2=0.950 9，半衰期為8.4 d，咪鮮胺初始沉積量8.603 mg·kg-1，14 d后降解率為65.0%；貴州省惠水縣試驗點C=1.422 7e-0.113t，R2=0.888 4，半衰期為6.1 d，咪鮮胺初始沉積量2.302 mg·kg-1，14 d后降解率為88.7%；咪鮮胺在楊梅上的半衰期為3.7～8.4 d。

表1 楊梅中的咪鮮胺消解動態

2.2 楊梅上的最終殘留

2016年450 g·L-1咪鮮胺水乳劑及其代謝物2，4，6-三氯苯酚在楊梅中的最終殘留試驗結果如表2。按企業最高推薦劑量500 mg·kg-1(按有效成分計，試驗設為低劑量)和推薦劑量的1.5倍(750 mg·kg-1，試驗設為高劑量)施藥，施藥2和3次，距末次施藥3、5、7、14 d，檢測楊梅中咪鮮胺及其代謝物2，4，6-三氯苯酚最終殘留量，折算后以咪鮮胺表示。結果顯示，末次施藥后3 d，咪鮮胺在楊梅中最終殘留量為0.101～8.789 mg·kg-1，5 d后咪鮮胺最終殘留量為0.067～9.757 mg·kg-1，7 d后最終殘留量為0.022～7.767 mg·kg-1，14 d后最終殘留量為0.005～2.357 mg·kg-1。

表2 2016年楊梅中咪鮮胺的最終殘留量

3 小結與討論

按照《化學農藥環境安全評價試驗準則》，根據T1/2值可將農藥殘留性劃分為3個等級：即土壤中的T1/2<1個月的為易降解農藥，1～3個月的為中等降解農藥，3～6個月為較難降解農藥，>6個月的為長殘留農藥。2016年分別在浙江桐廬縣、浙江開化縣、湖南張家界市、貴州惠水縣開展了450 g·L-1咪鮮胺水乳劑在楊梅中的消解動態試驗，試驗結果顯示，浙江開化、湖南張家界、貴州惠水和浙江桐廬的咪鮮胺半衰期分別為6.5、8.4、6.1和3.7 d，說明咪鮮胺在楊悔上降解速度快，屬易降解農藥。最終殘留量總體符合施藥濃度高、施藥次數多、采樣間隔短則最終殘留量高，施藥濃度低、施藥次數少、采樣間隔長則殘留量低的規律，最終殘留量與施藥濃度、施藥次數、采樣間隔時間直接相關。試驗地的氣候條件，作物種類、土壤類型等也是影響農藥最終殘留的重要因素；另外，最終殘留量與施藥器具、噴藥方式、作物的生長時期、天氣條件等也有密切的關系。從本次最終殘留試驗結果看，湖南張家界市試驗點最終殘留量明顯比其他3個試驗點高，可能就是由于這些因素引起的。

我國和國際食品法典委員會及相關國家都沒有制定咪鮮胺在楊梅上的最大殘留限量。中國GB 2763—2016規定了咪鮮胺在相關水果上的最大殘留限量值為柑橘類水果(柑橘除外)10 mg·kg-1、柑橘5 mg·kg-1、蘋果2 mg·kg-1、葡萄2 mg·kg-1、皮不可食熱帶和亞熱帶水果7 mg·kg-1、荔枝2 mg·kg-1、龍眼5 mg·kg-1、芒果2 mg·kg-1、香焦5 mg·kg-1、西瓜0.1 mg·kg-1。根據本試驗結果，建議我國咪鮮胺在楊梅上的最大殘留限量值為5 mg·kg-1。450 g·L-1咪鮮胺水乳劑防治楊梅褐斑病有效成分用藥量250～500 mg·kg-1，最多施藥2次，安全間隔期為14 d。