液相色譜-串聯質譜法測定山藥中10種殺菌劑殘留

朱麗婷，王華珍，王峰，陳志民，盧軍，黃梅英，章舒祺

(麗水藍城農科檢測技術有限公司，浙江 麗水 323000)

山藥又叫薯蕷、土薯、薯藥等，是人類很常用的食材之一。現代藥理研究表明，山藥中含有人體需要的多種氨基酸、維生素和粘液質等，具有提高免疫功能、改善消化功能、降血糖、降血脂、抗氧化、延緩衰老、抗腫瘤、抗突變、促進腎臟再生修復、調節酸堿平衡等藥理作用[1]。不少人會用山藥進行煲湯或烹飪，煲湯軟糯，炒菜酥脆，深受人們喜愛。山藥含有大量的粘液和淀粉，若受潮則易變軟發粘，2周左右就會發霉，皮色變黃，并極易生蟲，因此，不便于長時間的運輸和貯藏。近年來發現，一些不法商販為了在山藥貯藏和運輸過程中保持其新鮮和不易腐爛，違規對其噴灑了殺菌劑。殺菌劑雖具有高效、廣譜、低毒等優點，但長期攝入，會對人體健康造成潛在的危害[2]。目前，美國、歐盟等許多國家和組織均制定了殺菌劑在農產品和食品中的最高殘留限量(MRL)[3]。因此，隨著食品安全日益受到重視，為保障農產品的質量安全，迫切需要建立一種簡單、快速、高效且可用于山藥中多種殺菌劑同時檢測的試驗方法對農產品中農藥殘留進行有效監控。

目前國內殺菌劑的殘留檢測主要以草莓、楊梅、黃瓜等單種水果蔬菜為主[2-8]，對山藥的檢測研究基本以化學成分及營養價值為主[9-15]，對山藥中殺菌劑的測定未見報導。本文利用液相色譜串聯質譜儀抗干擾能力強且快速、準確等特點，建立了同時測定山藥中多菌靈、嘧霉胺等10種典型殺菌劑的分析方法，并應用于實際的樣品分析中。結果表明，該方法簡單、快速，完全滿足日常檢測的需求。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

安捷倫液相色譜串聯質譜儀(G6460C系列)配1290液相、SORVALL高速冷凍離心機(美國Thermo公司)；PSA、C18、炭黑等凈化材料(上海安譜科學儀器有限公司)；霜霉威、多菌靈、噻菌靈、甲基硫菌靈、抑霉唑、嘧霉胺、啶酰菌胺、腈菌唑、咪鮮胺、肟菌酯標準品(均為液體標準品，濃度為1 000 mg·L-1，天津農業部環境保護科研監測所)；乙腈色譜級、氯化鈉和無水硫酸鎂均為分析純，水為超純水。

1.2 標準溶液的配置

準確吸取霜霉威、多菌靈、噻菌靈、甲基硫菌靈、抑霉唑、嘧霉胺、啶酰菌胺、腈菌唑、咪鮮胺、肟菌酯標準溶液各1.0 mL于100 mL棕色容量瓶中，用乙腈稀釋定容到100 mL，配置成10.0 mg·L-1的標準工作溶液，于0～4 ℃保存。

1.3 檢測條件

色譜柱為Agilent Eslipse Plus C18RRHD(2.1 m×50 mm，1.8 μm)，流動相A為甲醇，B為2 mmol·L-1醋酸銨水溶液(含0.1%甲酸)，柱溫30 ℃。洗脫模式見表1。

表1 檢測中梯度洗脫比例

電噴霧正離子掃描(ESI+)。毛細管電壓4 500 V，干燥氣溫320 ℃，流速10 L·min-1，碰撞氣為氮氣，霧化器壓力40 psi，多反應監測(MRM)模式。多菌靈、嘧霉胺等10種殺菌劑的母離子、子離子和碰撞能量見表2。

1.4 樣品前處理

稱取勻漿后的山藥5.0 g樣品于50 mL離心管中，加入乙腈10 mL，渦旋混勻0.5 min，然后加入1.5 g氯化鈉和4.0 g無水硫酸鎂，渦旋混勻2 min，超聲提取3.0 min，以6 000 r·min-1離心3 min，準確吸取1.0 mL上清液置于1.5 mL離心管中，加入50 mg C18，混勻，于10 000 r·min-1離心3 min，準確吸取0.2 mL上清液，加入0.8 mL純水，混勻，過0.22 μm有機濾膜，供液相色譜-串聯質譜儀測定。

表2 10種殺菌劑的定性定量離子對、碎裂電壓、 碰撞能量和保留時間

注：*表示定量離子對，未標的為定性離子對。

2 結果與分析

2.1 圖譜分析

在本試驗條件下，多菌靈等10種殺菌劑在9.0 min內能得到較好的分離，標準液的總離子流圖(TIC)如圖1所示。

圖1 10種殺菌劑的TIC圖譜

2.2 凈化材料的選擇

山藥中含有黏蛋白、淀粉酶、皂苷、游離氨基酸、多酚氧化酶等化合物及礦物質，且含量較為豐富。為減少液相色譜串聯質譜測定時的基質效應，分別選取PSA(N-丙基乙二胺)、C18、炭黑等3種常用于農藥殘留分析過程中使用的吸附劑用于凈化條件優化。首先考察3種粉末對10種化合物的吸附作用。分別稱取50 mg凈化粉末，加入0.1 mg·L-1的混合標準溶液，每種材料平行操作3次，離心后取上清液經水稀釋1倍后進樣分析。結果發現，加入炭黑后，其粉末對10種化合物均產生不同程度的吸附；而加入PSA和C18后，兩種化合物響應值與標樣相當。故選取PSA和C18為試驗凈化材料。

采用分別經PSA和C18凈化后的提取液配制基質標準曲線，通過基質標準曲線斜率a與溶劑標準曲線斜率b比值研究其基質效應。表3表明，經C18凈化的提取液中10種殺菌劑的基質效應均較大，說明C18的去雜質能力較弱；而經PSA凈化的提取液中，僅甲基硫菌靈的基質效應較大，其他目標物基質效應0.85～1.09，因此，選用PAS作為凈化材料。

表3 不同稀釋倍數的基質效應(a/b)

2.3 稀釋倍數的選擇

參照前處理的步驟對山藥樣品進行前處理，加入PSA凈化后，對提取液采用不同稀釋比例(1、5、10倍)進行稀釋以研究其基質效應。結果發現，提取液稀釋后，甲基硫菌靈的基質效應明顯降低。當提取液稀釋10倍時，基質效應與5倍稀釋時的基質效應相差不大。為兼顧儀器靈敏度，本方法選取提取液5倍稀釋進行試驗。

2.4 方法的標準曲線

分別配置0.5、1.0、5.0、10.0、20.0、50.0 μg·L-1的混合標準溶液。以濃度為橫坐標，峰面積響應值為縱坐標，進行線形回歸。結果表明，10種殺菌劑的線性關系良好，相關系數(r)不低于0.993。本方法符合試驗要求，可用于實際樣品的定量分析。回歸方程見表4。并在該試驗條件下，分別以3倍信噪比(S/N=3)和10倍信噪比(S/N=10)來計算方法的檢出限(LOD)和定量限(LOQ)。

表4 不同殺菌劑的線性和靈敏度

2.5 方法精密度、準確度和回收試驗

選取空白山藥基質，在基質中分別添加濃度為10.0、50.0和100.0 μg·kg-1的標品做回收率試驗，每個濃度操作6個平行試驗，按照1.4節所述步驟處理后進樣，計算各添加濃度的回收率和相對標準偏差(RSD)。在該試驗條件下，添加濃度為10.0 μg·kg-1，10種殺菌劑的回收率為88.6%～105.5%，RSD為2.7%～8.3%；添加濃度為50.0 μg·kg-1，10種殺菌劑的回收率為89.6%～104.8%，RSD為1.2%～7.9%；添加濃度為100.0 μg·kg-1，10種殺菌劑的回收率為94.3%～104.7%，RSD為1.9%～9.1%(表5)。

表5 殺菌劑不同添加濃度下的回收情況

2.6 實際樣品分析

利用該方法對在農貿市場、超市隨機購買的15批次山藥樣品進行10種殺菌劑殘留量的測定，結果從2批次的山藥樣品中檢出多菌靈和嘧霉胺，測定值分別為2.51×102和1.03×103μg·kg-1，其余8種殺菌劑未檢出。

3 小結

通過建立快速測定山藥中10種殺菌劑殘留的LC-MS/MS分析方法，對于上述10種殺菌劑，本方法回收率為88.6%～105.5%，相對標準偏差為1.2%～9.1%，10種化合物檢測限為0.05～0.31 μg·kg-1，定量限為0.10～0.62 μg·kg-1。該試驗方法有效的減少了基質對10種殺菌劑測定的干擾，且前處理簡單，具有快速高效等特點，可用于山藥中10種殺菌劑殘留的快速篩查。