宮頸上皮內瘤樣病變的發生發展與P16UK4A/Ki-67共表達的相關性研究

華 蕾 李 潔 杜文淵

隨著生活水平的提高、生活節奏加快，加之人口老齡化、環境污染多方面因素，癌癥發病率逐年增加，嚴重威脅人類的生命健康[1]。宮頸癌是婦科第二大常見的癌癥，據相關研究數據，每年女性癌癥患者約5%是死于宮頸癌[2]。宮頸上皮內瘤樣變(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)是一種與宮頸浸潤癌高度密切相關的病變，多發生于25～35歲女性[3]。根據其發展趨勢分為低級別宮頸上皮內瘤樣變、高級別宮頸上皮內瘤樣變和原位腺癌，其中低級別宮頸上皮內瘤樣變(CINⅠ級)大部分可自然消退，而高級別宮頸上皮內瘤樣變(CINⅡ級、CINⅢ級)具有癌變可能，目前被視為癌前病變[4]。CIN分級反映了宮頸癌發生發展的過程。流行病學研究發現，CIN的發病率目前也呈上升趨勢，且逐漸呈年輕化趨勢，嚴重威脅著女性的健康。如何在宮頸上皮內瘤樣變人群中發現癌變的高危個體，對開展針對性預措施，降低宮頸癌患病率，是目前研究的熱點與難點[5]。鑒于此，選取漢中市人民醫院門診及住院部的宮頸病變患者200例，對宮頸活檢組織中P16UK4A/Ki-6蛋白表達情況進行研究，以探討P16UK4A/Ki-6共表達與宮頸上皮內瘤樣變發生發展的關系，具體報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年至2018年在漢中市人民醫院行宮頸活檢的標本200例，其中病理診斷為慢性宮頸炎43例，平均年齡(42.38±2.13)歲、CINⅠ級39例，平均年齡(41.22±3.56)歲、CINⅡ級41例，平均年齡(39.89±2.45)歲、CINⅢ級39例，平均年齡(43.12±3.58)歲、宮頸癌38例，平均年齡(40.78±3.14)歲，經HE染色切片確認病理診斷后，取病變組織用10%中性福爾馬林液固定后石蠟包埋、制作成蠟塊后室溫保存，進行免疫組化染色測定P16UK4A、Ki-67基因的蛋白陽性表達。

1.2 免疫組化染色

將制作好石蠟切片(厚4 μm)置58 ℃烤箱，24 h后采用常規二甲苯脫蠟，進行S-P法免疫組化染色。鼠P16UK4A單克隆抗體、兔Ki-67多克隆抗體及S-P試劑盒購自丹麥 Dako公司。

1.3 結果判斷

P16UK4A、Ki-67無著色或僅基底、基底旁著色視為陰性；陽性細胞垂直分布于宮頸上皮、超過基底及基底旁范圍(1/3及以上者)評定為陽性。所有標本均經兩位組織病理學專業醫師進行結果判讀，結果不一致者再經第三位醫師閱片后確定。

1.4 統計學處理

應用SPSS 22.0統計軟件進行數據分析，計數資料以率或構成比表示，數據處理采用卡方檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

P16UK4A/Ki-67共表達陽性率在慢性宮頸炎、CINⅠ級、CINⅡ級、CINⅢ級、宮頸癌患者分別為6.98%、15.38%、24.39%、61.54%、76.32%，見表1。陽性率隨病變級別升高而增加。經相關性分析，P16UK4A/Ki-67共表達與病變級別Spearman秩相關系數為0.907(F<0.001)，表明P16UK4A/Ki-67陽性共表達與宮頸上皮內瘤變發生發展密切相關。

表1 P16UK4A/Ki-67在各組織中的表達情況(例，%)

注：與慢性宮頸炎組比較，*為P<0.05。

3 討論

宮頸癌是最常見婦科惡性腫瘤之一，是可以防治的惡性腫瘤[6]。目前認為癌癥發生過程是從正常粘膜→炎性改變→低級別上皮內瘤變→高級別上皮內瘤變→癌，宮頸上皮內瘤變是宮頸癌的早期改變，提高可信度較高的CIN分級診斷，能使臨床診治更明確和個性化，從而有效降低宮頸癌的發病率[7-8]。目前確診宮頸上皮內瘤變的金標準仍是通過HE染色進行病理診斷。但臨床上有大量模棱兩可的標本不能通過病理診斷進行明確，原因在于病理醫師之間的經驗不同，據統計學資料顯示，不同病理醫師對CINⅠ級診斷一致性只有60%，而CINⅡ級診斷的一致性不足更低，不足50%[9]。為了提高病理分級診斷的一致性，專家建議引入特異性強的生化指標作為輔助診斷參考。P16UK4A與Ki-67在宮頸癌組織中高度表達，表達程度與病變程度密切相關，P16為抑癌基因，表達產物是抑制蛋白P16UK4A。當內源或外源癌因素作用于宮頸上皮細胞時，P16基因會發生突變、缺失等變異，刺激細胞分裂，最終成為腫瘤細胞。有研究證明，近半數的原發性腫瘤中都發現P16基因及表達蛋白的明顯異常。HPV病毒感染是宮頸上皮內瘤變及宮頸癌的主要致病因素，通過病毒重組宿主細胞DNA，誘發基因突變，導致癌癥的發生[10]。P16作為診斷宮頸病變輔助診斷可信度較高。Ki67存在于細胞增殖活躍的核中，目前是被認為檢測腫瘤細胞增殖活性最可靠的指標之一[11]。大量研究認為Ki67與宮頸病變程度密切相關，根據其表達陽性程度可進行良惡病變的鑒別。健康宮頸組織中無Ki67表達或低表達，一旦宮頸發生病變的時候，Ki67染色陽性的異型細胞數目便會增多，且細胞數量及異變程度與病變嚴重程度密切相關。病變級別越高，異型細胞數量越多同時異型性越大。但由于Ki67存在于增殖的細胞中，部分炎性疾病和CINⅠ級宮頸組織中的也可見Ki67陽性表達，因此病理診斷過程容易產生誤差。既往研究顯示，將P16UK4A、 Ki-67納入宮頸癌診斷標準可提高診斷準確率[12]，但關于P16UK4A與Ki-67共表達與宮頸上皮內瘤變發生發展的相關研究甚少。

在本研究中，通過觀察P16UK4A/Ki-67在不同宮頸病變中共表達陽性率，探究二者之間的相關性，結果顯示P16UK4A/Ki-67共表達陽性與宮頸癌發生發展顯著相關，可以有效的反映宮頸上皮內瘤變的病變程度，作為篩選癌前病變高危患者的生物指標具有一定意義，值得臨床推廣應用。