替來他明/唑拉西泮聯合右美托咪定對BALB/c 小鼠麻醉效果觀察

鄒 蘆, 戴天娥, 盧 曉, 艾曉杰

(1. 上海交通大學農業與生物學院/上海市獸醫生物技術重點實驗室, 上海 200240；

2. 迪哲(上海)醫藥有限公司, 上海 201203； 3. 上海浦靈生物科技有限公司, 上海 201203)

麻醉是指使用藥物或非藥物方法使機體或機體一部分暫時失去感覺, 以達到無痛的目的。理想的麻醉應該是誘導迅速、麻醉平穩、清醒快。吸入性氣體麻醉是實驗小鼠最常用的麻醉方法, 其以獲取容易、麻醉效果迅速且麻醉深度可調節、麻醉及復蘇迅速平穩等優點, 在小鼠麻醉中占據重要地位[1]。但是吸入性氣體麻醉需要用到昂貴的呼吸麻醉機, 而且對于使用場地和氣體回收裝置有一定的要求； 同時當需要進行大批量、連續的實驗操作時, 使用氣體麻醉就不太適合。另外, 一些特殊的動物模型無法使用吸入性氣體麻醉。

替來他明/唑拉西泮(舒泰50)是現在臨床上最常見的獸用麻醉劑，它是一種新型的解離性麻醉藥品，主要由解離性麻醉劑替來他明和苯二氮類鎮靜劑唑拉西泮按比例混合而成。唑拉西泮可加強替來他明對中樞神經系統的抑制作用，又可防止由替來他明引起的驚厥，增強肌肉松弛效果,還可以縮短麻醉蘇醒時間。其復合使用能夠使肌肉松弛，引起淺表性痛覺和內臟痛覺的消失，并且不會引起呼吸中樞的抑制，具有鎮靜、鎮痛和麻醉的作用[2]。但對小鼠的麻醉, 舒泰50 單獨使用不能起到很好的作用。右美托咪定(哆咪靜)是一種高特異性的α2 腎上腺素受體興奮劑，能降低交感神經的活性，產生鎮靜和止痛的作用[3]。由于哆咪靜對其他中樞抑制劑(如麻醉藥)具有明顯的增效作用，并能夠明顯降低麻醉劑的劑量，因此考慮哆咪靜和舒泰50 復合麻醉來麻醉小鼠。

1 材料與方法

1.1 動物

7～9 周齡SPF級BALB/c小鼠雌雄各9只，體質量19～26 g，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司[SCXK(京)2016-0006]并飼養于迪哲(上海)醫藥有限公司屏障設施內[SYXK(滬)2018-0015]。所有動物和飼養操作均符合國家實驗動物標準GB14925-2010《實驗動物環境及設施》和《實驗動物飼養管理和使用指南》[4]的要求。自由攝食(提供PMI 公司生產的5C02C 標準維持飼料)、飲水，每2 周更換一次墊料以保持干燥，飼養間按15 次/h 換氣, 溫度20～26 ℃，相對濕度40%～70%, 12 h 照明/12 h 黑暗交替光照。每籠給予1 根白楊木條供動物磨牙。IACUC 批準號為1804-PK-01。實驗前保證動物在迪哲動物房內適應至少3 d。

1.2 主要藥品及試劑

舒泰5 0 購自法國維克有限公司( 批號：6VUL)。使用前將舒泰50 凍干粉完全溶解，配成50 mg/mL 注射液待用； 哆咪靜(批號： 1832885)和阿替美唑(咹啶醒)(批號1735088)均購自碩騰(上海)企業管理有限公司； 生理鹽水購買自上海百特醫療用品有限公司(批號： S1706027)； 淚然滴眼液購自Alcon 公司(批號： 17122BA)。

1.3 實驗方法

1.3.1 動物分組 18 只BALB/c 小鼠，用隨機數字表編號，并按體質量隨機分為2 組(A 組雌雄各6 只，B 組雌雄各3只)： A組給予舒泰50和哆咪靜混合麻醉； B組給予同樣劑量的舒泰50和哆咪靜混合麻醉，待麻醉穩定維持1 h 后, 給予0.5 mg/kg劑量的咹啶醒。

1.3.2 實驗步驟 已溶解的舒泰50溶液和哆咪靜溶液按照40∶1 的比例混合均勻，用生理鹽水稀釋4 倍后待用。咹啶醒注射液按體積比1∶100稀釋后待用。每只小鼠給藥前稱重。按照舒泰50劑量40 mg/kg+哆咪靜0.1 mg/kg 給予A、B 兩組小鼠腹腔注射。當B 組動物麻醉穩定維持1 h 后，給予0.5 mg/kg劑量的稀釋后的咹啶醒注射液以拮抗哆咪靜的麻醉效果。

1.4 觀測指標

注射時間： 藥物注射入動物體內的時間； 倒地時間： 動物倒地，軀體位置不再移動，此時翻正反射消失； 疼痛反射消失時間： 使用眼科手術鑷夾取動物四肢及尾根部，均無反映定義為疼痛反射消失； 疼痛反射出現時間： 使用眼科手術鑷夾取動物四肢及尾根部, ≥2處連續2次出現疼痛反映定義為疼痛反射出現； 蘇醒時間： 動物四肢開始活動，翻正反射恢復； 誘導時間= 疼痛反射消失時間-注射時間； 麻醉維持時間= 疼痛反射出現時間-疼痛反射消失時間。此時適合進行手術操作。恢復時間= 動物蘇醒時間-疼痛反射出現時間。

1.5 統計學方法

使用Prism 8 統計軟件進行統計學處理分析。定量資料采用多個樣本均數方差分析，以x-± s 表示，組間比較采用兩樣本均數的t 檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

舒泰50 和哆咪靜復合麻醉的麻醉誘導時間、麻醉維持時間、蘇醒時間和麻醉總時間的數據見表1。數據顯示, 舒泰50 和哆咪靜復合麻醉成功率為100%(18/18), 并且能夠快速地誘導小鼠進入外科麻醉期[雌性(18.2±4.3) min, 雄性(8.0±1.2) min], 失去疼痛反射； 18 只動物無一死亡。

B 組動物在麻醉時間維持1 h 后, 注射咹啶醒，雌性動物蘇醒時間從(100±17.6) min 縮短至(31.1±8) min，減少了69%； 雄性動物(110.2±19.5) min 縮短至(36.7±5.5) min，減少了66%(P＜0.05)。

3 討論

傳統的非吸入性麻醉藥主要有戊巴比妥鈉、水合氯醛、氯胺酮、速眠新等。其中通過作為γ-氨基丁酸(GABA)受體激動劑而發揮麻醉作用的戊巴比妥鈉, 列為國家二類精神藥品, 不僅申請、購買、使用和儲存有著較高的要求，而且深度麻醉劑量與致死量很接近，使用時麻醉劑量難以掌握，極易造成術中麻醉死亡； 水合氯醛是一種催眠藥、抗驚厥藥，動物手術所需麻醉劑量的水合氯醛不能提供足夠的鎮痛作用，并且還會導致顯著的呼吸抑制，因此不推薦存活動物實驗使用水合氯醛腹腔麻醉； 氯胺酮是一種作用于大腦皮質和脊髓神經元的非競爭性N- 甲基-D- 天冬氨酸(NMDA)受體拮抗劑，廣泛應用于所有動物物種的麻醉, 還具有鎮痛作用，但氯胺酮的多種不良反應, 包括妄想、幻覺、譫妄和混亂等[5], 同時作為國家一類精神藥品, 其申請、購買的難度也限制了其使用。至于國產麻醉藥品速眠新等產品有著麻醉效果不穩定、深度不夠和不良反應大等缺點[6]，在實際使用中仍然存在較大問題。

表 1 麻醉時間比較 min

舒泰50 是目前臨床上最常見的獸用麻醉劑，在犬、貓、猴、大鼠等動物的麻醉效果得到了一致的認可, 但是對小鼠麻醉, 舒泰50的效果不盡人意。當使用劑量在75 mg/kg 以上時，極易造成動物死亡； 當使用50～75 mg/kg 時, 動物麻醉深度不夠, 四肢無意識地劃動, 無法進行手術操作。舒泰50 和哆咪靜復合麻醉彌補了其中的不足。

本文研究表明，舒泰50 和哆咪靜復合麻醉維持時間47～92 min, 總麻醉時間146～225 min，適合常規手術操作。在麻醉過程中，小鼠的眨眼反射喪失, 角膜暴露在空氣中, 極易干燥、充血,造成不適。建議涂抹眼藥膏或者定時滴眼藥水以保證眼球濕潤； 同時由于長時間麻醉造成小鼠體溫下降, 也是導致小鼠蘇醒時間過長的原因，建議在動物麻醉時添加保溫墊以保暖。本實驗表明,咹啶醒的拮抗作用, 能消除(或抑制)哆咪靜注射液引起的鎮靜與止痛作用, 從而大大縮短了小鼠的蘇醒時間，因此建議在術后給予咹啶醒，以縮短麻醉時間，增加動物存活率。同時根據不同的麻醉要求可以微調藥品的使用劑量，比如當需求的麻醉時間不足30 min 時, 可以使用舒泰5 032 mg/kg和哆咪靜0.08 mg/kg，以縮短麻醉持續時間。此復合麻醉方法不足之處在于，舒泰50和哆咪靜只能提供中等程度的鎮痛作用，因此對于某些手術操作來說，需要聯合阿片類鎮痛劑(比如丁丙諾啡)同時使用。Cagle 等[7]研究表明，哆咪靜在雄性小鼠會有66%的概率造成尿道栓塞，但本研究中未觀察到，可能尿道栓塞是反復哆咪靜麻醉才會導致的現象； 至于舒泰50 和哆咪靜復合麻醉針對其他品系小鼠的麻醉作用，有待后續研究。