鮑魚內臟多糖分離純化與抗氧化活性評價

陳勝軍 劉先進 等

摘要：【目的】分離純化鮑魚內臟多糖（Abalone viscera polysaccharide，AVP），并評價其抗氧化活性，為AVP的高值化利用提供參考依據?！痉椒ā恳怎U魚內臟為原料，采用酶法提取并初步純化出AVP，測定其DPPH自由基清除率、羥自由基（OH自由基）清除率和還原力3個抗氧化指標，評價AVP抗氧化能力;同時用葡聚糖凝膠G-100柱層析分離AVP，并對分離出的組分進行抗氧化能力比較?！窘Y果】AVP質量濃度在1～10 mg/mL時，DPPH自由基清除率線性方程為y=9.715x+1.0182（R2=0.9958），半抑制濃度（IC50）為5.04 mg/mL;OH自由基清除率線性方程為y=6.2778x-8.5275（R2=0.9603），IC50為9.32 mg/mL;還原力線性方程為y=0.0782x+0.0045（R2=0.9989），A700，0.2為2.50 mg/mL。AVP具有一定的抗氧化能力，但與抗壞血酸（Vc）相比，其抗氧化能力較弱。AVP經葡聚糖凝膠G-100柱層析可分離出兩個組分（AVP1和AVP2），AVP1和AVP2均具有一定的抗氧化活性，且AVP1抗氧化能力強于AVP2?！窘Y論】通過葡聚糖凝膠柱層析可從AVP中有效分離出AVP1和AVP2兩個組分，其中AVP1的抗氧化能力更強，在抗氧化添加劑及保健品等領域具有較好的開發利用前景。

關鍵詞： 鮑魚內臟;分離純化;多糖;抗氧化

中圖分類號： S986.2;TS254.1? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻標志碼： A 文章編號：2095-1191（2019）02-0372-06

Abstract：【Objective】Abalone viscera polysaccharide（AVP） was isolated and purified， then its antioxidant activity was evaluated. It provided technical support for high-value utilization of AVP. 【Method】In this research， the abalone viscera was used as experimental material to extract and purify AVP by enzymatic extraction and preliminary purification.The three antioxidant indexes， namely DPPH radical scavenging rate， hydroxyl radical（OH radical） scavenging rate and reducing power of AVP were determined， and the antioxidant capacity of AVP was evaluated. Meanwhile， the AVP was isolated by glucose gel G-100 column layer and the antioxidant abilities of isolated fractions were studied and compared. 【Result】The experimental results showed that the mass concentration of AVP was in the range of 1-10 mg/mL， and the linear equation of DPPH radical scavenging rate was y=9.715x+1.0182（R2=0.9958）， half-inhibitory concentration（IC50） value was 5.04 mg/mL. The linear equation of OH radical scavenging rate was y=6.2778x-8.5275（R2=0.9603）， IC50 value was 9.32 mg/mL. The linear equation of reducing power was y=0.0782x+0.0045（R2=0.9989）， and the value of A700，0.2 was 2.50 mg/mL. AVP could be separated into two components（AVP1 and AVP2） by G-100 column chromatography， both AVP1 and AVP2 had certain antioxidant activity， and AVP1 had higher antioxidant capacity than AVP2. 【Conclusion】AVP could be separated into AVP1 and AVP2 by sephadex column chromatography. AVP1 had higher antioxidant activity and therefore enjoys a good prospect of development and utilization in the fields of antioxidant additive and health products.

Key words： abalone viscera; separation and purification; polysaccharide; antioxidation

0 引言

【研究意義】鮑魚屬軟體動物門（Mollusca）腹足綱（Gastropoda）前鰓亞綱（Prosobranchia）原始腹足目（Archaeogastropoda）鮑科（Haliotidae）鮑屬（Halio-tis）（李太武等，2004），其營養豐富、口感佳，具有很高的食用價值和藥用價值，深受廣大消費者喜愛。然而，占鮑魚質量五分之一的內臟在加工過程中僅有少部分被制成鮑魚調味品等工藝產品（鄭瑞生等，2016），多數內臟被當作廢棄物直接丟棄，造成極大浪費。鮑魚內臟中富含多糖，王姣等（2015）通過木瓜蛋白酶與胰蛋白酶進行復合酶解提取，鮑魚內臟多糖（Abalone viscera polysaccharide，AVP）提取率可達16.58%。隨著醫藥學的發展與研究，人們發現腫瘤、糖尿病、心臟病、腎病等近百種疾病的產生和發展都與氧化有關（凌關庭，2004）。由于人工合成的抗氧化劑具有損傷肝臟并誘發腫瘤等缺點（王蒞莎等，2008），因此，尋找高效安全的抗氧化劑具有重要意義，其中天然抗氧化劑因其安全、無毒、高效的特點而越來越受大眾的認可（吳靜等，2016）。因此，研究AVP的抗氧化性，對提高鮑魚資源綜合利用率和鮑魚加工產品的附加值均具有重要意義，同時為研發天然抗氧化劑提供新途徑?！厩叭搜芯窟M展】多糖作為一種高分子聚合物，在生物體內具有豐富多樣的生物功能和活性作用，如調節免疫、抗病毒、抗氧化、抗腫瘤、降血壓、降血糖、降血脂等（Zhu et al.，2010，2011;Li et al.，2011;Wang et al.，2014;馬軍等，2017），已在食品和藥品中得到廣泛應用。目前對鮑魚內臟的生物活性功能研究已有不少報道。Sun等（2010）對AVP研究發現，40 mg/kg劑量的AVP在抗腫瘤和提供機體免疫能力上效果顯著;羅曉航（2012）通過高壓脈沖電場結合酶法提取了鮑魚臟器粗多糖，并發現其具有抗氧化活性;余鑫（2012）對鮑魚臟器粗多糖的提取工藝和降血脂活性進行了研究，發現其對因高脂飲食所導致的小鼠血脂升高有顯著抑制作用;鄒文文（2013）通過Sevag法及DEAE-52纖維素陰離子交換層析對鮑魚臟器粗多糖進行分離純化，得出3個組分，并發現這3個組分均具有一定的體外抗氧化能力;葉丹榕等（2014）研究皺紋盤鮑內臟提取的粗多糖對小鼠的降血糖作用，發現其能夠提高糖尿病小鼠體內抗氧化酶活性?！颈狙芯壳腥朦c】雖然已有對鮑魚臟器粗多糖進行層析和抗氧化活性的研究報道（鄒文文，2013），但其先以DEAE-52纖維素陰離子交換層析得到3個組分，再用葡聚糖凝膠G-100鑒定單一峰，且未進行粗多糖和多糖的抗氧化能力比較;而本研究直接用葡聚糖凝膠G-100對鮑魚內臟粗多糖（AVCP）進行分離純化，并將粗多糖與其多糖的抗氧化能力進行對比分析，找出其抗氧化優勢組分?！緮M解決的關鍵問題】將酶法提取的AVCP通過葡聚糖凝膠G-100柱層析分離純化，然后對分離純化后的AVP還原力、DPPH自由基清除率及羥自由基（OH自由基）清除率進行測定，以抗壞血酸（Vc）為對比，評價AVP抗氧化能力，為鮑魚內臟的開發利用提供參考依據。

1 材料與方法

1. 1 試驗材料

鮑魚內臟取自福建連江產雜交鮑，經組織搗碎機搗碎混勻制成樣品，于-20 ℃下冷凍保藏。磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、無水乙醇、鐵氰化鉀、三氯乙酸、三氯化鐵、鄰二氮菲、Vc、硫酸亞鐵、Tris、過氧化氫、鹽酸和鄰苯三酚等均為國產分析純，購自廣州左克生物科技發展有限公司;試驗用水為蒸餾水和超純水。主要儀器設備：HH-4數顯恒溫水浴鍋（常州澳華儀器有限公司）、Sigam 3K30冷凍離心機（德國Sigma公司）、EYELA N-1000旋轉蒸發儀（日本Eyela公司）、ALPHA 1-4冷凍干燥機（德國Christ公司）、Sunrise-basic Tecan吸光酶標儀（瑞士Tecan公司）、超聲波清洗儀（德國Elma公司）。

1. 2 試驗方法

1. 2. 1 AVCP提取流程 鮑魚內臟→凍干→粉碎過40目篩→鮑魚內臟粉→調節料液比1∶49（g/mL，下同）→調節pH 8.6→胰蛋白酶加酶量2.1%→酶解溫度37 ℃，酶解時間2 h→沸水滅酶10 min→冷卻，調中性→離心（4500 r/min）10 min→加上清液3倍體積的95%乙醇→醇沉過夜→離心既得（陳勝軍等，2018）。

1. 2. 2 AVP分離純化流程 AVCP→去色素（丙酮、乙醇）→脫蛋白（胃蛋白酶解）→透析→反復凍融→冷凍干燥→初步純化的AVP→葡聚糖凝膠G-100柱層析→0.9%氯化鈉溶液洗脫→收集組分（AVP1和AVP2）。

1. 2. 3 脫蛋白 利用胃蛋白酶進行酶解，酶解條件為料液比1∶40、加酶量0.2%、pH 3.0、溫度37 ℃、水解時間3 h，酶解工藝參考1.2.1，從而進一步純化AVCP。

1. 2. 4 透析 將脫蛋白后的多糖配制成一定質量濃度的多糖溶液，在截留分子量5000 Da的透析袋內用超純水透析24 h，每隔3 h換一次水。

1. 2. 5 凍融 將透析后的多糖溶液保存在-20 ℃冷凍冰箱中24 h，取出后放置室溫緩慢融化，4 ℃高速（8000 r/min）離心20 min，除去沉淀。反復凍融多次，直到離心后無沉淀即可，取出溶液冷凍干燥后即為初步純化的AVP。

1. 2. 6 葡聚糖凝膠G-100柱層析 將初步純化的AVP配制成2 mg/mL多糖溶液，用葡聚糖凝膠G-100柱層析分離并收集，0.9%氯化鈉溶液進行洗脫，流速0.5 mL/min，每6 min收集1管，共收集80管;用苯酚硫酸法檢驗，得出洗脫峰。

1. 2. 7 DPPH自由基清除率測定 參考馬賽蕊等（2012）和陳義勇等（2013）的方法，取1.0 mL樣液，加入1.0 mL 0.15 mmol/L DPPH溶液（用95%乙醇溶解），搖勻后室溫避光30 min，在517 nm波長處測定吸光值（Ai）;空白組為1.0 mL樣液加入1.0 mL 95%乙醇溶液混合，室溫避光30 min，在517 nm波長處測定吸光值（Aj）;對照組為1.0 mL DPPH溶液加入1.0 mL 95%乙醇，室溫避光30 min，在517 nm波長處測定吸光值（A0）。按下式計算DPPH自由基清除率：

DPPH自由基清除率（%）= [1-Ai-AjA0] ×100

1. 2. 8 OH自由基清除率測定 參考馬賽蕊等（2012）的方法，取0.3 mL鄰二氮菲·無水乙醇溶液，加入0.2 mL磷酸鹽緩沖液和0.3 mL硫酸亞鐵溶液，然后加入樣液1.0 mL混勻后，加入0.2 mL過氧化氫溶液搖勻，在37 ℃下水浴60 min，于510 nm波長處測其吸光值（AS）;以1.2 mL蒸餾水代替樣品和過氧化氫溶液進行相同操作，測其吸光值（A0）;以1.0 mL蒸餾水代替樣品進行相同操作，測其吸光值（Ad）。清除率按下式進行計算：

OH自由基清除率（%）=[As-AdA0] ×100

注意操作中每加入一種試劑后要立即搖勻，否則會使局部顏色過深而影響試驗結果的準確性，且過氧化氫最后加入。加樣情況如表1所示。

1. 2. 9 還原力測定 取樣液1.0 mL，加入1.0 mL 0.2 mol/L磷酸緩沖液（pH 6.6）和1.0 mL 1%鐵氰化鉀溶液混勻，在50 ℃水浴鍋內保溫20 min，加入1.0 mL 10%三氯乙酸溶液，振蕩混勻后4 ℃下10000 r/mim離心10 min，吸取上清液1.0 mL，加入1.0 mL去離子水和0.2 mL 0.1%三氯化鐵溶液，振蕩混勻后50 ℃水浴保溫10 min，觀察溶液由黃色變為藍色后，在700 nm波長處測其吸光值。以蒸餾水代替多糖樣品作為空白對照調零。

1. 2. 10 AVP抗氧化能力測定 將AVP分別配制成1、2、4、6、8和10 mg/mL溶液，通過測定AVP的DPPH自由基清除率、OH自由基清除率及還原力3個指標，與對應濃度相差100倍的Vc進行對比，得出AVP的抗氧化能力。

1. 3 統計分析

采用SPSS 20.0進行差異顯著性分析，運用Design Expert 8.0.6對試驗數據進行分析。

2 結果與分析

2. 1 初步純化的AVP抗氧化活性

2. 1. 1 AVP的DPPH自由基清除能力 DPPH是一種很穩定的自由基，由圖1可知，AVP質量濃度在1～10 mg/mL范圍內，其對DPPH自由基的清除率呈現一定的線性關系，通過擬合得出線性方程為y=9.715x+1.0182（R2=0.9958），計算得出AVP對DPPH自由基的半抑制濃度（IC50）為5.04 mg/mL;AVP對DPPH自由基具有清除作用，且10 mg/mL的清除率可達97.39%，但與Vc（圖2）相比，其對DPPH自由基清除能力仍較弱。

2. 1. 2 AVP的OH自由基清除能力 OH自由基是毒性最強的一種活性氧自由基，對生物機體具有很強的破壞作用。由圖3可知，AVP質量濃度在1～10 mg/mL范圍內，其對OH自由基的清除率呈現一定的線性關系，通過擬合得出線性方程為y=6.2778x-8.5275（R2=0.9603），計算得出AVP對OH自由基的IC50為9.32 mg/mL;AVP對OH自由基具有清除作用，但與Vc（圖4）相比，其對OH自由基清除能力仍較弱。

2. 1. 3 AVP的還原能力 由圖5可知，AVP質量濃度在1～10 mg/mL范圍內，其還原能力呈現一定的線性關系，通過擬合得出線性方程為y=0.0782x+0.0045（R2=0.9989）。以A700，0.2作為指標比較還原能力，即A700為0.2時對應的溶液質量濃度，由圖5和圖6可知AVP和Vc的A700，0.2分別為2.50和0.02 mg/mL，說明，AVP具有還原能力，但與Vc相比，其還原能力較弱。

2. 2 AVP1和AVP2的抗氧化活性

2. 2. 1 葡聚糖凝膠G-100柱層析結果 通過苯酚硫酸法測定吸光值得到洗脫曲線（圖7），從圖7可看出，AVP分離出兩個組分（AVP1和AVP2），收集峰高部分進行抗氧化活性研究。

2. 2. 2 AVP1和AVP2的抗氧化活性 由表2可知，AVP1和AVP2的DPPH自由基清除率、OH自由基清除率和還原力3個指標均高于AVP，可能是由于AVP中含有雜質且不同組分間互相影響，而降低其抗氧化能力。AVP1和AVP2均具有一定的抗氧化活性，在前面試驗中已知DPPH自由基清除率、OH自由基清除率和還原力3個指標與多糖質量濃度均呈線性關系，AVP1質量濃度低于AVP2質量濃度，但其DPPH自由基和OH自由基清除率均高于AVP2，還原力與AVP2接近，說明AVP1的抗氧化能力高于AVP2。

3 討論

多糖與機體生命的多種生理功能密切相關，具有多種生物活性功能。適量的自由基對細胞具有促進分裂、生長及消炎等多種活性功能，但過多或清除過慢會使許多生物大分子受到攻擊，從而加速機體衰老（Guerra Dore et al.，2013;劉歡等，2018）。為了獲取天然安全的抗氧化物質，王蒞莎等（2008）通過酶法提取鮑魚臟器多糖并進行分離純化，發現鮑魚臟器多糖具有一定的抗氧化能力，但未發現其哪一種組分更優;羅曉航（2012）對皺紋盤鮑臟器粗多糖的抗氧化活性研究發現，鮑魚臟器粗多糖具有一定的抗氧化活性。本研究采用酶法提取并通過葡聚糖凝膠G-100柱層析分離純化出AVP，并對其還原力、DPPH自由基清除率及OH自由基清除率進行測定，發現AVP質量濃度在1～10 mg/mL內對DPPH自由基和OH自由基的清除能力均呈現一定的線性關系，IC50分別為5.04和9.32 mg/mL;還原能力也呈現一定的線性關系，A700，0.2為2.50 mg/mL。通過3種指標考察發現AVP具有一定的抗氧化能力，但與Vc相比，其抗氧化能力較弱。

葡聚糖凝膠G-100柱層析是通過分子量的大小進行分離純化，其分離范圍為4000～150000 Da，本研究在透析時使用5000 Da的透析袋，因此選用G-100更有利于多糖組分的分離。AVP經葡聚糖凝膠G-100柱層析可分離出兩個不同分子量的組分（AVP1和AVP2）;通過對3個抗氧化指標的試驗發現，AVP1和AVP2均具有一定的抗氧化能力，且AVP1的抗氧化能力高于AVP2，而兩個組分的抗氧化能力均高于AVP。這可能是由于粗多糖中AVP1和AVP2互相影響，或有其他物質影響其抗氧化活性，導致AVP的抗氧化能力低于AVP1和AVP2。為了深入研究其抗氧化活性，下一步可對AVP1的結構、性狀及作用機理進行探究。

4 結論

通過葡聚糖凝膠柱層析可從AVP中有效分離出兩個組分（AVP1和AVP2），其中AVP1的抗氧化能力更強，在抗氧化添加劑及保健品等領域具有較好的開發利用前景。

參考文獻：

陳勝軍，劉先進，楊賢慶，李來好，黃卉，李春生. 2018. 酶法提取鮑魚內臟多糖工藝的優化[J]. 南方農業學報，49（7）：1389-1395. [Chen S J，Liu X J，Yang X Q，Li L H，Huang H，Li C S. 2018. Optimization of enzymatic extraction of visceral polysaccharide from abalone[J]. Journal of Southern Agriculture，49（7）：1389-1395.]

陳義勇，張天俊，楊軍，賴沁潤，馬小慶. 2013. 南通壇紫菜多糖的黏度性質及其抗氧化活性[J]. 食品研究與開發，34（14）：77-80. [Chen Y Y，Zhang T J，Yang J，Lai Q R，Ma X Q. 2013. Viscosity and anti-oxidation activity of polysaccharides from Porphyra haitanensis of Nantong[J]. Food Research and Development，34（14）：77-80.]

李太武，蘇秀榕，丁明進. 2004. 鮑的生物學[M]. 北京：科學出版社. [Li T W，Su X R，Ding M J. 2004. Abalone Bio-logy[M]. Beijing：Science Press.]

凌關庭. 2004. 抗氧化食品與健康[M]. 北京：化學工業出版社. [Ling G T. 2004. Antioxidant Foods and Health[M]. Beijing：Chemical Industy Press.]

劉歡，陳勝軍，楊賢慶. 2018. 海藻多糖的提取、分離純化與應用研究進展[J]. 食品工業科技，39（12）： 341-346. [Liu H，Chen S J，Yang X Q. 2018. Advances of extraction，purification and application of polysaccharides from seaweeds[J]. Science and Technology of Food Industry，39（12）：341-346.]

羅曉航. 2012. PEF結合酶法提取鮑魚臟器粗多糖及其抗氧化活性研究[D]. 福州：福建農林大學. [Luo X H. 2012. Studies on crude polysaccharide extracted from abalone viscera by PEF combinedwith enzymatic method and its antioxidant activity[D]. Fuzhou：Fujian Agriculture and Forestry University.]

馬軍，侯萍，陳燕，黃娟華，張洪業，王珊寧，黃海. 2017. 幾種海藻多糖抗氧化活性及體外抗脂質過氧化作用的研究[J]. 南方水產科學，13（6）：97-104. [Ma J，Hou P，Chen Y，Huang J H，Zhang H Y，Wang S N，Huang H. 2017. Study on antioxidant activity and anti-lipid peroxidation effect of several algal polysaccharides[J]. South China Fisheries Science，13（6）：97-104.]

馬賽蕊，胡曉，吳燕燕，李來好，陳勝軍，楊賢慶，郝淑賢. 2012. 羅非魚肉蛋白酶解液的抗氧化活性[J]. 食品科學，33（19）：52-56. [Ma S R，Hu X，Wu Y Y，Li L H，Chen S J，Yang X Q，Hao S X. 2012. Antioxidant properties of tilapia（Oreochromis niloticus） protein hydrolysates prepared with different proteases[J]. Food Science，33（19）：52-56.]

王姣，魏好程，何傳波，何傳輝，吳國宏，熊何健. 2015. 鮑內臟酶解工藝條件的優化[J]. 食品安全質量檢測學報，6（8）：3177-3185. [Wang J，Wei H C，He C B，He C H，Wu G H，Xiong H J. 2015. Optimization for extracted conditions of abalone viscera[J]. Journal of Food Safety and Quality，6（8）：3177-3185.]

王蒞莎，朱蓓薇，周大勇，孫黎明. 2008. 鮑魚臟器多糖的抗氧化活性研究[J]. 食品與機械，24（4）：65-68. [Wang L S，Zhu B W，Zhou D Y，Sun L M. 2008. Antioxidant activity of polysaccharide conjugates from abalone viscera，Halio-tis discus hannai Ino[J]. Food and Machinery，24（4）：65-68.]

吳靜，胡曉，楊賢慶，李來好，姚建玲，吳燕燕，林婉玲，仇超穎，黃卉，馬海霞. 2016. 鳶烏賊酶解產物的抗氧化穩定性與功能特性[J]. 南方水產科學，12（5）：105-111. [Wu J，Hu X，Yang X Q，Li L H，Yao J L，Wu Y Y，Lin W L，Qiu C Y，Huang H，Ma H X. 2016. Antioxidant stability and functional properties of enzymatic hydrolysates from purple back flying squid（Symplectoteuthis oualaniensis）[J]. South China Fisheries Science，12（5）：105-111.]

葉丹榕，黃月娥，陳錦權，方婷. 2014. 鮑魚臟器粗多糖對糖尿病小鼠生理功能的影響[J]. 現代食品科技，30（4）：26-33. [Ye D R，Huang Y E，Chen J Q，Fang T. 2014. Impact of crude polysaccharides from abalone viscera on the physiological function of diabetic mice[J]. Modern Food Science and Technology，30（4）：26-33.]

余鑫. 2012. 鮑魚臟器粗多糖的提取工藝及降血脂活性研究[D]. 福州： 福建農林大學. [Yu X. 2012. Studies on exteaction and lipid-lowering function of crude polysaccharides in abalone viscus[D]. Fuzhou：Fujian Agriculture and Forestry University.]

鄭瑞生，楊瑩，朱燕汝. 2016. 鮑魚下腳料制備海鮮醬汁的酶解工藝優化[J]. 食品與機械，32（4）：211-214. [Zheng R S，Yang Y，Zhu Y R. 2016. Technique optimization on enzymatic hydrolysis of seafood sauce by abalone scraps[J]. Food and Machinery，32（4）：211-214.]

鄒文文. 2013. 鮑魚臟器多糖分離純化、結構分析及抗氧化活性研究[D]. 福州：福建農林大學. [Zou W W. 2013. Stu-dies on separation and purification，structure analysis and antioxidant activity of abalone viscera polysaccharide[D]. Fuzhou：Fujian Agriculture and Forestry University.]

Guerra Dore C M P，Faustino Alves M G，Pofírio Will L S E，Costa T G，Sabry D，de Souza Rêgo L A，Accardo C M，Rocha H A O，Filgueira L G A，Leite E L. 2013. A sulfa-ted polysaccharide，fucans，isolated from brown algae Sargassum vulgare with anticoagulant，antithrombotic，antio-xidant and anti-inflammatory effects[J]. Carbohydrate Polymers，91（1）：467-475.

Li G Y，Chen S G，Wang Y M，Xue Y，Chang Y G，Li Z J，Wang J F，Xue C H. 2011. A novel glycosaminoglycan-like polysaccharide from abalone Haliotis discus hannai Ino：Purification，structure identification and anticoagulant activity[J]. International Journal of Biological Macromolecules，49（5）：1160-1166.

Sun L，Zhu B，Li D，Wang L S，Dong X P，Murata Y，Xing R，Dong Y. 2010. Purification and bioactivity of a sulphated polysaccharide conjugate from viscera of abalone Haliotis discus hannai Ino[J]. Food and Agricultural Immunology，21（1）：15-26.

Wang Y M，Wu F J，Du L，Li G Y，Takahashi K，Xue Y，Xue C H. 2014. Effects of polysaccharides from abalone （Haliotis discus hannai Ino） on HepG2 cell proliferation[J]. International Journal of Biological Macromolecules，66（5）：354-361.

Zhu B W，Li D M，Zhou D Y，Han S，Yang J F，Li T，Ye W X，Greeley G H. 2011. Structural analysis and CCK-releasing activity of a sulphated polysaccharide from abalone（Haliotis discus hannai Ino） viscera[J]. Food Chemistry，125（4）：1273-1278.

Zhu B W，Zhou D Y，Li T，Yan S，Yang J F，Li D M，Dong X P，Murata Y. 2010. Chemical composition and free radical scavenging activities of a sulphated polysaccharide extracted from abalone gonad（Haliotis discus hannai Ino）[J]. Food Chemistry，121（3）：712-718.

（責任編輯 羅 麗）